用荧光色素标记的可见区着色不溶性载体颗粒的制备和使用其的免疫测定法

文档序号:9602377
用荧光色素标记的可见区着色不溶性载体颗粒的制备和使用其的免疫测定法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及用于特异性地、迅速地检测检体(试样)中的被分析物质的方法及使 用其的试剂盒。
【背景技术】
[0002] -直以来,使用了不溶性载体颗粒的免疫测定法广为流行。
[0003] 使用了不溶性载体颗粒的免疫测定法中,采用了如下手法:在硝酸纤维素膜之类 的具有纤维结构的膜的规定位置固化有与被检测物质特异性地结合的配体的试验片上,使 用金胶体、铂金胶体、着色聚苯乙烯颗粒等作为不溶性载体颗粒,将在其上固化有与被检测 物质特异性地结合的配体的颗粒和包含被检测物质的检体利用毛细管现象展开于上述的 试验片上,由此用硝酸纤维素膜上的配体和再溶解了的不溶性载体颗粒上的配体将被检测 物质夹层,目视或者使用专用的装置来进行检测。
[0004] 金胶体、铂金胶体、着色聚苯乙烯颗粒等不溶性载体颗粒虽具有可以通过目视判 定的优点,但是这些不溶性载体颗粒即使使用专用的装置进行检测也无法预见显著的检测 灵敏度的提高。另一方面,使用标记了荧光物质的配体或者包含荧光物质的不溶性载体颗 粒时,若使用专用的装置,则具有可以预见显著的检测灵敏度提高的优点,但却无法目视判 定,即使被检测物质的量多、通过目视判定可以短时间检测,也需要使用专用的装置,反而 变得繁杂。
[0005] 为了解决该课题,提出了将可目视判定的不溶性载体颗粒和荧光颗粒混合使用 (参照专利文献1),但是由于不溶性载体颗粒上的配体和荧光颗粒上的配体互相竞争,因 此在被检测物质非常少时,无法高效率地结合荧光颗粒上的配体,从而未必成为高灵敏度。 另外,考虑生产效率时,需要分别制备2种类的不溶性载体颗粒,留下了效率低这一课题。
[0006] 并且,提出了使用免疫色谱用复合颗粒,其具有由金属形成的微粒的外侧被至少 含有一种荧光物质的二氧化硅的至少1层覆盖的结构(参照专利文献2),但是,本发明中由 于由金属形成的微粒的吸光而使外侧的荧光物质的荧光被吸收掉,因此荧光物质的种类受 到限制、使用二氧化硅层成为前提,留下了其制备需要特别的技术这一课题。
[0007] 现有技术文献 专利文献 专利文献1 :日本特开2010-014631号公报; 专利文献2 :日本特开2011-220705号公报。

【发明内容】

[0008] 发明所要解决的课题 使用不溶性载体颗粒的免疫测定法,作为P0CT (即时检验)(Point Of Care Test) 而被广泛用作体外诊断用药品,特别是被用于来源于细菌、病毒的传染病(感染症)的诊断 辅助。有时在免疫力低的婴幼儿、老年人等罹患传染病时,有可能关乎生命,关于流感病毒 传染病等,在小孩、成人也是同样的。另一方面,对于一部分的细菌、病毒有抗生素、特效药 等治疗药,通过早期进行诊断可以带来确实的治疗。另外,流感病毒传染病的传染性强,有 可能引起院内传染、诊所的候诊室内的传染。在这样的现状下,对于作为POCT的体外诊断 用药品,一方面要求是高感度,另一方面要求可以在尽可能短的时间内进行判定。
[0009] 本发明的目的在于,提供用于快速、高灵敏度的免疫测定、也可以目视判定且可高 灵敏度装置测定的不溶性载体颗粒,其制备方法及使用其的免疫测定方法,以及包含其的 免疫测定试剂盒。
[0010] 用于解决课题的手段 上述课题可以如下解决:在向通过目视可以确认的可见区着色不溶性载体颗粒上的官 能团结合配体时,同时结合荧光物质。通过组合发出与下述颜色处于补色关系的颜色的波 长的荧光的荧光物质,可以使荧光不被不溶性载体颗粒吸收而高效率地检测,所述颜色为 与不溶性载体颗粒的吸光波长相同波长的颜色。即,在红色的不溶性载体颗粒中使用发出 红色荧光的荧光物质。通过将其用于免疫测定,在被检测物质的量多的情况下,可以通过目 视判定迅速地检测,在被检测物质的量少的情况下,可以使用专用的装置高灵敏度地检测。
[0011] gp,本发明为如下所述。
[0012] [1]用荧光色素标记的可见区着色不溶性载体颗粒,其为用于免疫测定的用荧光 色素标记的可见区着色不溶性载体颗粒,其中,基于该可见区着色不溶性载体颗粒的上述 荧光色素发出的波长区的荧光的吸收小。
[0013] [2] [1]的用荧光色素标记的可见区着色不溶性载体颗粒,其中,用于标记的荧光 色素为发出与下述颜色处于补色关系的颜色的波长的荧光的荧光物质,所述颜色为与可见 区着色不溶性载体颗粒的吸光波长相同波长的颜色。
[0014] [3] [1]或[2]的用荧光色素标记的可见区着色不溶性载体颗粒,其中,可见区着 色不溶性载体颗粒为着色成蓝色的颗粒,荧光色素所发出的荧光的波长为450nm~570nm。
[0015] [4] [3]的用荧光色素标记的可见区着色不溶性载体颗粒,其中,可见区着色不溶 性载体颗粒为着色成蓝色的颗粒,荧光色素为荧光素或异硫氰酸荧光素。
[0016] [5] [1]或[2]的用荧光色素标记的可见区着色不溶性载体颗粒,其中,可见区着 色不溶性载体颗粒为着色成红色的颗粒,荧光色素所发出的荧光的波长为590nm~750nm。
[0017] [6] [5]的用荧光色素标记的可见区着色不溶性载体颗粒,其中,可见区着色不溶 性载体颗粒为着色成红色的颗粒,荧光色素为atbta-eu3+。
[0018] [7] [1]~[6]中任一项的用荧光色素标记的可见区着色不溶性载体颗粒,其中,不 溶性载体颗粒为聚苯乙烯胶乳颗粒。
[0019] [8]免疫测定方法,其使用了 [1]~[7]中任一项的用荧光色素标记的可见区着色 不溶性载体颗粒。
[0020] [9] [8]的免疫测定方法,其包含:使[1]~[7]中任一项的用荧光色素标记的可见 区着色不溶性载体颗粒结合于包含待测定的抗原或抗体的抗原抗体复合物,通过目视观察 不溶性载体颗粒的着色、和/或测定自不溶性载体颗粒所发出的荧光,来确定抗原抗体复 合物的存在。
[0021] [10] [8]或[9]的免疫测定方法,其为免疫色谱法。
[0022] [11]免疫测定试剂盒,其包含[1]~[7]中任一项的用荧光色素标记的可见区着 色不溶性载体颗粒。
[0023] [12]制备[1]~[7]中任一项的用荧光色素标记的可见区着色不溶性载体颗粒的 方法,该方法包括下述工序: (i) 测定可见区着色不溶性载体颗粒的吸收光谱的工序; (ii) 确定该可见区着色不溶性载体颗粒的吸收少的波长区的工序; (iii) 选择发出该波长区的荧光的荧光色素的工序;以及 (iv) 用所选择的荧光色素标记上述可见区着色不溶性载体颗粒的工序。
[0024] 本说明书包含作为本申请的优先权基础的日本国专利申请2013-100422号的说 明书和/或附图中所记载的内容。
[0025] 发明效果 本发明的用荧光色素标记的可见区着色不溶性载体颗粒的存在既可以通过目视检测, 也可以使用荧光检测装置检测。因此,将本发明的用荧光色素标记的可见区着色不溶性载 体颗粒用于以载体颗粒的存在为指标而测定被检测物质的免疫测定时,对于被检测物质的 有无既可以通过目视、也可以通过荧光检测装置进行判断。通过使用本发明的用荧光色素 标记的可见区着色不溶性载体颗粒,即使在没有荧光检测装置等设备的设施、场所也可以 简便地进行P〇CT (Point Of Care Test),另外,通过使用荧光检测装置来对荧光进行测定, 也可以进行更高精度的测定。
【附图说明】
[0026] 图1是表示白色聚苯乙烯颗粒和红色聚苯乙烯颗粒的吸收光谱的图; 图2是表示白色聚苯乙烯颗粒和蓝色聚苯乙烯颗粒的吸收光谱的图; 图3是表示白色聚苯乙烯颗粒和绿色、黄色聚苯乙烯颗粒的吸收光谱的图。
【具体实施方式】
[0027] 以下,对本发明进行详细地说明。
[0028] 本发明是用于免疫测定中所使用的、用荧光色素标记的可见区着色不溶性载体颗 粒。
[0029] 不溶性载体颗粒是指,颗粒本身在液体中为不溶性,成为使抗原或抗体结合并保 持的载体的颗粒。本发明中,可以使用在试药(test drug)等技术领域中所使用的胶乳颗 粒。胶乳颗粒是指,形成呈胶体状分散于水中的乳浊液的颗粒。颗粒的材质不受限定,可 以使用在试药等技术领域中用于结合抗体、抗原、配体、受体等蛋白的固相载体材料的材 质。例如可举出聚苯乙烯,苯乙烯-丙烯酸共聚物等苯乙烯共聚物,聚碳酸酯、聚甲基丙烯 酸甲酯(PMMA)、聚乙烯基甲苯等树脂,二氧化硅,纤维素等。其中,优选以苯乙烯为基本组 分(base)的颗粒。以苯乙烯为基本组分的颗粒是指,聚苯乙烯、苯乙烯或苯乙烯的衍生物 与聚合性不饱和羧酸或聚合性不饱和磺酸等的共聚物。作为苯乙烯的衍生物,可举出氯甲 基苯乙烯、二乙烯基苯等,作为聚合性不饱和羧酸,可举出丙烯酸、甲基丙烯酸等,作为聚合 性不饱和磺酸,可举出苯乙烯磺酸钠等。本发明中,将以苯乙烯为基本组分的胶乳颗粒称作 聚苯乙烯胶乳颗粒,有时也简单地称作聚苯乙烯颗粒。另外,也可以是在内部、表面包含铁、 镍、钴等磁性体的磁性体颗粒。
[0030] 所使用的颗粒的粒径为10nm~数百nm、优选为30nm~500nm。
[0031] 可见区着色颗粒是指,用人通过肉眼观察即可识别的颜色所着色的颗粒。该可见 区着色颗粒反射特定波长的可见光线,由此可以使人通过该被反射的可见光线来识别颜 色。可见光线是波长为380nm~750nm左右的光线。着色颗粒的颜色,作为彩色以色调来表 示,有红色、橙色、黄色、绿色、蓝色、紫色等,各种颜色通过反射以下特定波长的可见光线, 被人识别为着色成其颜色。
[0032] 红色 620 ~750nm 橙色590~620nm 黄色570~590nm 绿色495~570nm 蓝色450~495nm 紫色380~450nm 可见区着色颗粒可以通过用各种颜色的色素染色上述颗粒来制造。利用色素的染色, 可以是颗粒表面的染色,但为了防止色素的脱离,还优选通过使色素渗入颗粒而对颗粒内 部进行染色。另外,可以用单独的色素进行染色,也可以通过用多种色素进行染色来获得着 色成任意颜色的可见区着色颗粒。例如可以制造红色颗粒、蓝色颗粒、绿色颗粒、黄色颗粒、 粉色颗粒等各种颜色的着色颗粒。用于着色的色素可以使用能够用于树脂等的染色的公知 的色素,例如可以用苏丹蓝、苏丹III、苏丹红IV、醌茜绿、油溶橙等
再多了解一些
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