一种硫酸依替米星柱分离过程的近红外光谱在线检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于近红外检测领域，具体涉及一种硫酸依替米星柱分离过程的近红外光 谱在线检测方法。
【背景技术】
[0002] 硫酸依替米星，是最新一代氨基糖苷类抗生素，也是建国以来唯一拥有自主知识 产权的抗生素类国家一类新药。该产品是治疗革兰氏阴性菌感染和耐药性病原菌感染的重 要药物。临床表明：硫酸依替米星对细菌感染疾病疗效好，不良反应发生率低，是近年来开 发的氨基糖苷类抗生素中安全有效的优良新品种，在防治感染性疾病上发挥了重要作用
[0003] 近红外（NIR)光谱技术作为一种快速无损的绿色分析技术，具有快速分析、样品 处理简单、无需消耗试剂等特点。近年来，近红外光谱技术已经越来越多的被应用于中药研 究，包括药材产地鉴别、有效组分含量测定和制药过程的在线检测和监控。近红外光谱技术 的引入为解决复杂中药体系蒸馏过程的质量快速评价及在线检测提供了可能。
[0004] 在药品质量控制及生产应用领域，将近红外光谱技术应用于原药材、化药分 离、成品以及蒸馏、浓缩、醇沉、层析等过程中关键指标的检测已有相关专利文献，如专 利（专利【申请号】200510130631. 6, 200810050095. 2, 201010125515. 6, 200910228468. 5， 201010577454. 7)等，然而，将近红外光谱技术用于硫酸依替米星柱分离过程中关键指标的 测定仍未见相关报道。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种硫酸依替米星柱分离过程的近红外光谱在线检测方 法。
[0006] 本发明采用近红外光谱技术能够快速测定硫酸依替米星柱分离过程中洗脱液样 品中硫酸依替米星含量、Cla含量和总物质含量，实现柱分离过程质量的快速评价。该方法 准确，快速，稳定，操作简单，适应工业化生产。
[0007] 本发明提供一种硫酸依替米星柱分离过程的近红外光谱在线检测方法，其特征在 于，包括以下步骤：
[0008] (1)洗脱液样品收集
[0009] 收集硫酸依替米星柱分离过程中的洗脱液样品；
[0010] (2)近红外光谱数据采集
[0011] 采用透射法采集洗脱液样品的近红外光谱，得到光谱图；
[0012] (2)含量测定
[0013] 通过标准近红外光谱图和步骤（2)所得光谱图，通过公式计算洗脱液样品中硫酸 依替米星含量、Cla含量和总物质含量；
[0014] 其中近红外光谱条件为：扫描次数为32,分辨率为8cm1，光纤透射式探头光程 2mm，以空气为参比，扫描光谱范围为4000~10000cm^
[0015] 本发明进一步提供一种硫酸依替米星柱分离过程的近红外光谱在线检测的建立 方法，其特征在于，包括以下步骤：
[0016] (1)液相色谱法对多个批次的硫酸依替米星柱分离过程中洗脱液样品各自的硫酸 依替米星含量、Cla含量和总物质含量进行测定；
[0017] (2)离子色谱法对多个批次的硫酸依替米星柱分离过程中洗脱液样品各自的硫酸 依替米星含量、Cla含量和总物质含量进行测定；
[0018] (3)采用透射法采集多个批次的硫酸依替米星柱分离过程中洗脱液样品的近红外 光谱，扫描次数为32,分辨率为8cm\光纤透射式探头光程2mm，以空气为参比，扫描光谱范 围为 4000 ~10000cm-l;
[0019] (4)采用5600~10000cm-l波段区间的近红外数据，选择一阶导数、 Savitzky-Golay平滑和数据归一化算法用于预处理近红外光谱数据，采用偏最小二乘回归 建立近红外数据与硫酸依替米星含量、Cla含量和总物质含量之间的定量校正模型，采用相 关系数R、校正集均方差RMSEC和主成分数Factor优化建模参数，考察模型性能，模型对未 知样品的预测效果用预测均方差RMSEP、相对偏差RSEP和相关系数R确定。
[0020] 其中，相关系数R、校正集均方差RMSEC、预测均方差RMSEP和相对偏差RSEP的具 体计算公式：
[0021]
[0022]
[0023]
[0024]
[0025] 各式中Q--传统分析方法测量值；
[0026] 匕一一通过NIR测量及数学模型预测的结果；
[0027] Cn--Q均值；
[0028] η一一建立模型用的校正集样本数；
[0029] m一一用于检验模型的验证集样本数。
[0030] 其中，所述采集多批次硫酸依替米星柱分离过程中洗脱液样品；是采集5-20个批 次。
[0031] 本发明的模型建立方法如下：
[0032] (1)洗脱液样品收集
[0033] 采集多个批次的硫酸依替米星柱分离过程中的洗脱液样品；
[0034](2)含量测定
[0035] 对多个批次的硫酸依替米星柱分离过程中洗脱液样品各自的硫酸依替米星含量、 Cla含量和总物质含量进行测定，测定采用液相色谱法；
[0036] 对多个批次的硫酸依替米星柱分离过程中洗脱液样品各自的硫酸依替米星含量、 Cla含量和总物质含量进行测定，测定采用离子色谱法；
[0037] 通过以上方法得到洗脱液样品中的硫酸依替米星含量、Cla含量和它们的总物质 含量这3个质控指标数据；
[0038] (3)近红外光谱数据采集
[0039] 采用透射法采集上述多个批次的硫酸依替米星柱分离过程中洗脱液样品的近红 外光谱，扫描次数为32,分辨率为8cm\光纤透射式探头光程2_，以空气为参比，扫描光谱 范围为4000~10000cmS
[0040] (4)定量模型的建立
[0041] 采用5600~10000cm1波段区间的近红外数据，选择一阶导数、Savitzky-Golay 平滑和数据归一化算法用于预处理近红外光谱数据，采用偏最小二乘回归建立近红外数据 与硫酸依替米星含量、Cla含量和总物质含量这3个质控指标之间的定量校正模型，
[0042] 采用相关系数R、校正集均方差RMSEC和主成分数Factor优化建模参数，考察模型 性能，模型对未知样品的预测效果用预测均方差RMSEP、相对偏差RSEP和相关系数R来考 核；
[0043] (5)采集供试品近红外光谱数据
[0044] 采集硫酸依替米星柱分离过程中洗脱液样品，作为供试品，按建模样品相同近红 外光谱采集参数采集供试品的近红外光谱数据，选择相同的建模波段和光谱预处理方法， 把特征光谱分别输入已经建立的硫酸依替米星含量、Cla含量和总物质含量模型，计算得到 供试品中硫酸依替米星含量、Cla含量和总物质含量。
[0045] 其中，步骤（2)液相色谱法，色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以 0. 2mol/L三氟醋酸-甲醇（84 :16)为流动相；流速为每分钟0. 5ml;用蒸发光散射检测器 检测，取依替米星对照品和奈替米星对照品各适量，加水溶解并稀释制成每lml中含0. 2mg 的混合溶液，取20μ1注入液相色谱仪，记录色谱图，依替米星峰和奈替米星峰之间的分离 度应大于1. 2,连续5次进样，依替米星峰面积相对标准偏差应不大于2. 0%，
[0046] 测定法取依替米星对照品适量，精密称定，分别加水溶解并定量稀释制成每lml 中约含依替米星1. 0mg、0. 5mg和0. 25mg的溶液作为对照品溶液（1)、（2)、（3)，精密量取上 述三种溶液各20μ1，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，以对照品溶液浓度的对数值对相 应的峰面积的对数值计算线性回归方程，相关系数（r)应不小于0. 99;另取本品适量，同法 测定，用线性回归方程计算供试品中含量。
[0047] 其中，步骤（2)离子色谱法，色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，用 0. 2mol/L三氟乙酸-乙腈=96:4为流动相，柱温为35°C，流速为1.Oml/min，用积分脉冲安 培电化学检测器检测，检测电极为金电极，参比电极为Ag/AgCl复合电极，钛合金对电极， 四波形检测电位（见下表），柱后加碱流速0. 5ml/min，分别取依替米星和奈替米星对照品 各适量，用流动相溶解并稀释制成每lml中各含0. 025mg的混合溶液，作为溶液（1)，另取依 替米星对照品适量，用流动相溶解并稀释制成每lml中含〇. 〇〇25mg的溶液，作为溶液（2)， 分别取溶液（1)、溶液（2)各25μ1，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，溶液（1)