一种高效液相色谱同时测定龙脑、樟脑、异龙脑含量的方法
【技术领域】
[0001] 本发明本发明涉及龙脑，尤其涉及高效液相色谱测定艾片及冰片等样品中龙脑、 樟脑、异龙脑含量方法。
【背景技术】
[0002] 众所周知，龙脑有d、1、dl三种旋光异构体。《中国药典》2010年版一部收载有天 然冰片（右旋龙脑）、冰片（合成龙脑）与艾片（左旋龙脑），其中的艾片为菊科植物艾纳 香的新鲜叶经提取加工制成的结晶，其主要活性成分为左旋龙脑；冰片为龙脑香科植物龙 脑香的树脂和挥发油加工品提取获得的半透明似梅花瓣块状、片状的结晶体，是近乎于纯 粹的右旋龙脑，亦也用化学方法合成；天然冰片为天然樟科植物樟的新鲜枝、叶经提取加工 制成，为白色结晶性粉末或片状结晶，主要成分为右旋龙脑。《中国药典》记载艾片、冰片、天 然冰片："辛、苦，微寒。归心、脾、肺经。其功效主治：开窍醒神，清热止痛。用于热病神昏、 痉厥，中风痰厥，气郁暴厥，中恶昏迷，目赤，口疮，咽喉肿痛，耳流脓疮"。艾片、冰片临床应 用极为广泛，尤其在心脑血管疾病的预防和治疗中，是开窍醒神的常用中药。
[0003] 天然冰片、冰片与艾片中的标志性活性成分为龙脑，其含量通常被作为上述三种 药材主要质量控制指标，目前龙脑含量测定的主要方法包括气相色谱法、衍生化高效液相 色谱法、薄层色谱法、红外光谱法、紫外-可见分光光度法等。由于其具有挥发性，且没有较 强的紫外吸收，其含量测定方法大多采用GC法或GC-MS法。目前，《中国药典》2010版收 录天然冰片、冰片与艾片中龙脑、樟脑、异龙脑含量测定方法为气相色谱法（GC)，用于其质 量控制。但GC分析成本比较高，对样品稳定性要求高，而目前报道的液相测定的柱前衍生 化又增加了样品的前处理时间，而示差检测器是根据物质的折射率进行检测的，是一种通 用型的检测器，可以检测紫外吸收不能响应的组分，适用范围广泛，并且其对样品的要求较 低、分析成本低，可用于工业化生产的检测。中国专利数据库中也无涉及高效液相测定龙 脑、樟脑、异龙脑的含量的专利，因此建立高效液相色谱示差法准确测定龙脑、樟脑、异龙脑 含量的方法具有非常重要的意义。
【发明内容】
[0004] 本发明旨在提供简便、分离效果好、精密度和准确性高的一种高效液相色谱测定 龙脑、樟脑、异龙脑含量的方法，为达到上述目的，本方法采用了如下技术方案：
[0005] (1)确定色谱条件
[0006] 色谱柱：C18柱；
[0007] 检测器：示差检测器；
[0008] 柱温：3(TC~40Γ;
[0009] 流动相：甲醇-0. 4 %磷酸溶液或乙腈-磷酸水溶液
[0010] 流速：0· 6~lmL·minS
[0011] 进样量：10 ~20μL。
[0012] ⑵对照品洛液的制备
[0013] 称取龙脑、樟脑、异龙脑的对照品适量，精密称定，加甲醇制成lmgiL1，作为对照 品溶液；
[0014] (3)供试品溶液的制备
[0015] 精密称取适量供试品l〇mg，加甲醇溶解制备lmg·mL\即得供试品溶液；
[0016] (4)测定
[0017] 将对照品溶液与供试品溶液分别进行高效液相色谱检测，其中供试品溶液中待检 测峰之间的分离度大于1. 5,分别得到对照品溶液色谱峰与供试品溶液色谱峰，根据对照品 与供试品的出峰时间来进行供试品组分的定性，通过外标法进行计算来得到待检测组分的 含量；
[0018] (5)计算公式
[0019] 按照以下外标法计算公式计算龙脑、樟脑、异龙脑含量：
[0020] Cx= CRXAxXffR/ARXffxX100%
[0021] 式中：CX为供试品的含量，
[0022] CR为对照品的含量，
[0023]Ax为供试品的峰面积，
[0024]AR为对照品的峰面积，
[0025] WR为对照品的称样量，单位：mg，
[0026]Wx为供试品的称样量，单位:mg。
[0027] 上述方法的流动相中为甲醇或乙腈；磷酸的分数为0. 4%。
[0028] 本发明采用高效液相色谱法同时检测龙脑、樟脑、异龙脑含量，不同于已有的气相 色谱方法，与现有技术相比，具有检测速度快、检测数据准确、重现性好、灵敏度高、专属性 强、操作方法简便、检测试剂和仪器应用广泛等特点，经过精密度试验、重复性试验、线性关 系考察和加样回收试验等试验对方法进行验证，结果表明该方法准确可靠，方便快捷，成本 低廉；检测范围大；灵敏度、精确性高；将广泛应用于化学分析领域中。
【附图说明】
[0029] 图1为龙脑、樟脑、异龙脑混标高效液相色谱图；图2艾粉供试品高效液相色谱图； 图3龙脑、樟脑、异龙脑混标高效液相色谱图；图4艾片高效液相色谱图；图5对照品高效液 相色谱图；图6冰片（合成龙脑）高效液相色谱图。
【具体实施方式】
[0030] 以下实施案例将有助于本发明的了解，但这些实施案例仅为了对本发明加以说 明，本发明并不限于这些内容。
[0031] 实施例1
[0032] 艾粉中龙脑、樟脑、异龙脑含量检测
[0033] (1)色谱条件：色谱柱：依利特C18柱；检测器：示差检测器；柱温：40°C ;流动相： 甲醇：磷酸水溶液为65 :35,流速：lmL·min、
[0034] (2)标准品溶液的制备：对照品溶液的制备：称取龙脑、樟脑、异龙脑的对照品适 量，精密称定，加甲醇制成lmg·mL\作为对照品溶液；
[0035] (3)供试品溶液的制备：精密称取适量供试品10mg，加甲醇溶解制备lmg·!Λ\即 得供试品溶液；
[0036] (4)记录色谱图并测定：将对照品溶液与供试品溶液分别进行高效液相色谱检 测，其中供试品溶液中待检测峰之间的分离度大于1. 5,分别得到对照品溶液色谱峰与供试 品溶液色谱峰，根据对照品与供试品的出峰时间来进行供试品组分的定性，通过外标法进 行计算来得到待检测组分的含量。根据计算公式
卜算出的含 量见表1，对照品高效液相色谱图见附图1，供试品高效液相色谱图见附图2。
[0037] 表1艾粉中龙脑、樟脑、异龙脑含量测定结果
[0038]
[0040] 通过上述实例表明本发明稳定性好，精密度高，适用于龙脑、樟脑、异龙脑的高效 液相色谱法的含量测定。
[0041] 本发明方法学的建立
[0042] 1. 1专属性
[0043] 该方法专属性强。
[0044] 1. 2线性范围
[0045] 精密量取混合对照品溶液1、2、3、4、5、81^分别置于1〇11^量瓶中，用甲醇定容至刻 度，摇匀，配制成对照品溶液。在HPLC上进样分析并记录色谱图。分别以樟脑、龙脑、异龙 脑的浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，进行回归分析。樟脑、龙脑、异龙脑的回归方程分别 为：
[0046]Y= 77727Χ+2635. 7(R2=0. 9990)；
[0047]Y= 79415X+2756.0(R2= 0.9991)；
[0048]Y= 79284X+4796. 6(R2= 0·9993)。
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