一种胱抑素c纳米胶乳免疫比浊法检测试剂盒的制作方法
【技术领域】
[0001 ] 本发明涉及胱抑素C检测技术领域，特别涉及一种胱抑素C检测试剂，还涉及使用 此检测试剂的检测方法。
【背景技术】
[0002] 人类胱抑素C(CysC)是由122个氨基酸构成的碱性蛋白质，分子量为13kDa，属于 半胱氨酸蛋白酶抑制剂超家族的基本成员。几乎所有的机体有核细胞均可产生CysC，它是 管家基因的表达产物，产率相对恒定。有研究表明CysC能更精确反应肾小球滤过率，其性 能显著优于尿素、肌酐等指标，特别是肾功能仅轻度减退时，即可检测到血清中CysC的升 高。因为循环中CysC仅经过肾小球滤过作用而被清除，并在近曲小管被重新吸收，但重吸 收后会被完全代谢分解，不能再返回到血液中，而且血清中CysC浓度不受性别、年龄、饮食 和炎症等影响，因此CysC在血清中的浓度主要由肾小球滤过率决定，是一种反应肾小球滤 过率变化的理想内源性标志物。
[0003]因为CysC在液体中浓度低，这就要求CysC的分析方法要有很高的特异性和敏感 性，早期有单向免疫扩散法及酶免疫测定法，这两种测定方法灵敏度较低，随后相继出现较 为灵敏的放射、荧光及各种酶免免疫测定方法。这些测定方法都为非均相检测，操作复杂且 耗时长，不便广泛临床应用。直到有报道采用颗粒增强免疫比浊法来检测CysC，且有快速、 准确、自动化的特点，但同时该方法也存在线性范围较差，分析灵敏度较低，试剂不稳定的 缺点。
[0004] 鉴于此，本发明在颗粒增强免疫比浊法的基础上进行了进一步优化，添加多种表 面活性剂、稳定剂以及Mg2+，显著改善了试剂的分析灵敏度，线性范围以及稳定性。是一种 更加稳定，线性相关性好，更加灵敏的CysC检测试剂。
[0005] 本发明的目的是提供一种用于检测CysC的试剂以及使用该试剂检测CysC含量的 方法。该试剂盒采用纳米颗粒免疫比浊法，可以有效检测CysC的含量，具有分析灵敏度好， 稳定性好等优点。
[0006] 本发明是通过以下步骤： 一种CysC检测试剂，包括试剂R1和试剂R2,所述试剂R1和试剂R2的组成如下： 试剂R1中含有 Tris-HCl缓冲液........................................18. 16mmol/L 聚乙二醇 6000.......................................... 20g/L ................................................5mmol/L 牛血清白蛋白...........................................20g/L 叠氮钠................................................lg/L 试剂R2中含有 Tris-HCl缓冲液........................................18. 16mmol/L 抗人Cys-C抗体的纳米胶乳颗粒.............................2% 聚乙二醇 6000......................................... 20g/L 牛血清白蛋白..........................................20g/L 叠氮钠...............................................lg/L。
[0007] 所述CysC检测试剂，采用的表面活性剂为聚乙二醇6000,并添加了Mg2+。
[0008] 所述CysC检测试齐IJ，采用的稳定剂为牛血清白蛋白。
[0009] 所述CysC检测试剂，采用纳米胶乳颗粒。
[0010] 所述CysC检测试剂，使用全自动生化分析仪利用终点法进行测定，检测主波长为 570nm〇
[0011] 所述的检测方法，R1试剂和R2试剂的比例为3:1。
[0012] 本发明的有益效果： 1) 采用新的表面活性剂并添加了Mg2+，显著改善了试剂的分析灵敏度，线性范围； 2) 采用牛血清白蛋白作为稳定剂，显著增强了试剂的稳定性； 3) 试剂的准确度和稳定性良好，价格便宜，使用方便，完全可以满足临床需要。
【附图说明】
[0013] 图1为相关性图。
【具体实施方式】
[0014] 下面结合具体实施例对本发明进行进一步说明： 实施例1 CysC检测试剂，包括试剂R1和试剂R2: 1) 试剂R1中含有 Tris-HCl缓冲液........................................18. 16mmol/L 聚乙二醇 6000.......................................... 20g/L ................................................5mmol/L 牛血清白蛋白...........................................20g/L 叠氮钠................................................lg/L 2) 试剂R2中含有 Tris-HCl缓冲液........................................18. 16mmol/L 抗人Cys-C抗体的纳米胶乳颗粒.............................2% 聚乙二醇 6000.......................................... 20g/L 牛血清白蛋白...........................................20g/L 叠氮钠................................................lg/L。
[0015] 3)本实施例试剂的使用方法： 本实施例描述的Cys-C检测试剂，在使用时采用具有双试剂功能的全自动生化分析 仪，如日立7180全自动分析仪等，利用终点法进行测定。将R1和R2按照3:1的比例放置 到对应的试剂位上，在样品盘的对应位置放置好蒸馏水、标准品和样本，操作如表1 : 表1实施例1试剂检测方法
计算：Cys-C含量（mg/L) =(ΔΑ测定+ΔΑ标准）XC标准。
[0016] 实施例2 相关性实验：利用实施例1配方配制试剂，与市场常见的国家食品药品监督管理局认 可的某公司的CyS-C试剂盒进行对照检测，同时检测了 20个临床血清样本，检测结果如表 3所示。并获得了两种试剂的相关性曲线(如图1所示)，通过检测结果显示，两个试剂盒的 相关系数为〇. 9998,说明了两者有极大的相关性。
[0017] 表2实施例1试剂与市场常见并得到认可的Cys-C测定试剂盒对比检测结果
实施例3 分析灵敏度验证实验： 用本发明Cys-C试剂盒测试已知浓度的样本，记录吸光度差值。分别利用实施例1试 剂和市场认可的试剂进行检测。检测结果如表3所示。
[0018] 表3分析灵敏度实验结果
通过检测数据可知，市场认可检测试剂盒的吸光度差值均比实施例1的高，说明在试 剂中加入表面活性剂、Mg2+以及纳米颗粒大大的提高了试剂的分析灵敏度。
【主权项】
1. 一种胱抑素C检测试剂，其特征在于包括试剂R1和试剂R2,所述试剂R1和试剂R2 的组成如下： 试剂R1中含有 Tris-HCl缓冲液........................................18. 16mmol/L 聚乙二醇 6000.......................................... 20g/L ................................................5mmol/L 牛血清白蛋白...........................................20g/L 叠氮钠................................................lg/L 试剂R2中含有 Tris-HCl缓冲液.........................................18. 16mmol/L 抗人Cys-C抗体的纳米胶乳颗粒..............................2% 聚乙二醇 6000........................................... 20g/L 牛血清白蛋白...........................................20g/L 叠氮钠................................................lg/L。2. 根据权利要求1所述的胱抑素C检测试剂，其特征在于试剂中使用聚乙二醇6000为 表面活性剂。3. 根据权利要求1所述的胱抑素C检测试剂，其特征在于试剂R1中添加了镁离子。4. 根据权利要求1所述的胱抑素C检测试剂，其特征在于所述稳定剂为牛血清白蛋白。5. -种使用权利要求1-4中任一项所述的胱抑素C检测试剂来检测胱抑素C的检测方 法，其特征在于使用全自动生化分析仪利用终点法进行测定，检测主波长为570nm。6. 根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于R1试剂和R2试剂的比例为3:1。
【专利摘要】本发明涉及胱抑素C检测技术领域，特别涉及一种胱抑素C检测试剂，试剂R1中含有Tris-HCl缓冲液、聚乙二醇6000、氯化镁、牛血清白蛋白、叠氮钠；试剂R2中含有Tris-HCl缓冲液、抗人Cys-C抗体的纳米胶乳颗粒、聚乙二醇6000、牛血清白蛋白、叠氮钠。添加稳定剂牛血清白蛋白，大大增强了试剂的稳定性；采用表面活性剂聚乙二醇6000以及添加镁离子，不仅显著改善测定的性能，而且增强了试剂的稳定性和分析灵敏度。
【IPC分类】G01N33/68
【公开号】CN105388298
【申请号】CN201510723845
【发明人】赵新, 刘慧 , 谭柏清, 王春艳, 王珍
【申请人】山东博科生物产业有限公司
【公开日】2016年3月9日
【申请日】2015年10月30日