一种强力天麻杜仲胶囊的特征图谱检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及药物成份鉴别和质量检测技术领域,具体设及一种强力天麻杜仲胶囊 的特征图谱检测方法。
【背景技术】
[0002] 强力天麻杜仲胶囊由天麻、杜仲、独活、制附子等十二味中药制备而成;具有散风 活血,舒筋止痛的功效,用于中风引起的筋脉擧痛,肢体麻木,腰腿酸痛,头痛头昏等症。中 药复方制剂药味多,成分复杂,用部分成分的含量测定不能全面鉴别和控制中药复方制剂 质量;中药特征图谱是一种综合、可量化的质量控制鉴别手段,能够较好反映中药复杂的化 学成分,已成为公认的鉴别中药和评价其质量的有效手段,是一种良好的色谱鉴别方法。 目前尚无强力天麻杜仲胶囊特征图谱的研究报道,因此,对于强力天麻杜仲胶囊的鉴别和 质量评价,现有技术依然存在不足。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的是为了更加全面的鉴别和控制强力天麻杜仲胶囊的质量,提供一种 采用HPLC强力天麻杜仲胶囊的特征图谱检测方法,可用于强力天麻杜仲胶囊的鉴别和质 量控制。
[0004] 本发明的技术方案如下: 一种强力天麻杜仲胶囊的特征图谱检测方法,它是分别制备供试品溶液,供试品溶液 包含碱性条件乙酸乙醋萃取样品(A部位)和酸性条件乙酸乙醋萃取样品度部位);同时制 备对照品溶液;将供试品溶液和对照品溶液分别进行色谱条件测定;将供试品溶液A、B两 个部位的数据分别生成特征图谱进行精密度试验、稳定性试验和重复性试验;建立强力天 麻杜仲胶囊的特征图谱,并对特征图谱进行相似度评价;确定色谱峰的归属从而鉴别出强 力天麻杜仲胶囊的成份。
[0005] 所述供试品溶液的制备如下:取胶囊内容物约Ig,精密称定,置磨口烧瓶中,精密 加入70%乙醇30血,称定称重,水浴回流2h,放冷,用70%乙醇补足减失的重量,混匀,滤 过,用少量70%乙醇洗涂,合并滤液和洗涂液,蒸至近干;残渣加水15 使溶解,用石油酸 萃取3次,每次10mU弃去石油酸层,水层用氨水调抑11~12,用乙酸乙醋萃取4次,每次 10 111以合并乙酸乙醋层,蒸干,得碱性乙酸乙醋萃取部位(A部位);经碱性乙酸乙醋萃取后 的水层用稀盐酸调抑至1~2,用乙酸乙醋萃取4次,每次10血,合并乙酸乙醋层,蒸干,得 酸性乙酸乙醋萃取部位度部位);将A部位、B部位残留物分别用70%甲醇溶解定容至2mL, 摇匀,高速离屯、10min,取上清液,即得。
[0006] 所述对照品溶液的制备方法如下:取绿原酸、天麻素、紫花前胡巧、7-径基香豆 素、原儿茶酸、紫云英巧、没食子酸适量,精密称定,用70%甲醇溶解,分别制成相应的对照 品混合溶液。 W07] 所述色谱条件测定的色谱条件是:采用C0RTECSTMCis色谱柱,流动相为乙 腊-0. 1%憐酸水溶液,梯度洗脱,进样量5μL;体积流量0. 5min/mL;检测波长220nm;柱溫 40 〇C。
[0008] 所述建立强力天麻杜仲胶囊的特征图谱是将强力天麻杜仲胶囊分别制备供试品 溶液,进行色谱条件测定,分别记录HPLC色谱图;将A、B两个部位的数据分别导入"中药色 谱指纹图谱相似度评价系统(2004A)",生成特征图谱;W其中一个批号样品的色图谱为参 照图谱,通过多点校正和自动匹配,生成对照特征图谱;经分析确定A部位的色图谱中有28 个色谱峰为共有特征峰,B部位的色图谱中有18个色谱峰为共有特征峰。
[0009] 所述确定色谱峰的归属为:在A部位指认了 3个色谱峰,分别为1号峰:天麻素、 8号峰:紫花前胡巧、9号峰:7-径基香豆素;在B部位指认了 4个色谱峰,分别为2号峰:没 食子酸、5号峰:原儿茶酸、8号峰:绿原酸、17号峰:紫云英巧。
[0010] 本发明建立了强力天麻杜仲胶囊碱性乙酸乙醋和酸性乙酸乙醋提取部位的特征 图谱,并用于强力天麻杜仲胶囊的鉴别和质量评价,分别标定了 28和18个共有峰,分别指 认了 3个和4个色谱峰,10批制剂特征图谱的相似度在0. 85~0. 99。本发明的方法准确、可 靠,可用于强力天麻杜仲胶囊的鉴别和质量控制。
【附图说明】
[0011] 图1展示了 10批强力天麻杜仲胶囊A部位,B部位的特征图谱;图中,A:A部位; B:B部位。 图2展示了强力天麻杜仲胶囊特征图谱与各对照品的色谱比较图;图中,A:A部位; 1.天麻素,8.紫花前胡巧,9.7-径基香豆素;B:B部位;2.没食子酸,5.原儿茶酸,8.绿原 酸,17.紫云英巧。
【具体实施方式】
[0012] 下面结合附图和实施例对本发明作进一步的详细说明,但本发明的保护范围不受 具体实施例的任何限制,而是由权利要求加W限定。 阳〇1引 实施例1 : 1仪器与材料: 叫tiMate3000型高效液相色谱仪(包括系统控制器,输液累,脱气组件,低压梯度组 件,自动进样器,柱溫箱,溫控样品室,UV-DAD检测器,化romeleon色谱数据工作站),AE240 型电子天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司),CQ-250A-ST型超声波清洗器(上海跃进 医用光学器械厂),超纯水机(四川沃特尔科技发展有限公司)。
[0014]强力天麻杜仲胶囊 10 批(11254011、11254018、12254001、12254002、13254001、 13254003、14254001、14254002、14254004、14254006,编号S1~S10)由贵州宏宇药业有限公 司提供;绿原酸(110753-201415)、天麻素(110807-201306)购自中国食品药品检定研究 院;紫花前胡巧、7-径基香豆素、原儿茶酸、紫云英巧、没食子酸为从强力天麻杜仲胶囊中 分离获得,经光谱分析鉴定其结构,并经HPLC峰面积归一化法测得其纯度均大于98%。
[0015] 乙酸乙醋(分析纯,上海申博化工有限公司),甲醇、乙醇(分析纯,上海振兴化工 一厂),乙腊(色谱纯,SK化emicals公司),盐酸(分析纯,重庆川东有限公司),氨水(分 析纯,重庆江川化工有限公司),水为蒸馈水。
[0016] 2方法与结果: 2. 1对照品溶液的制备:取绿原酸、天麻素、紫花前胡巧、7-径基香豆素、原儿茶酸、紫 云英巧、没食子酸适量,精密称定,用70%甲醇溶解,分别制成相应的对照品混合溶液。 阳017] 2. 2供试品溶液的制备:取胶囊内容物约Ig,精密称定,置磨口烧瓶中,精密加入 70%乙醇30血,称定称重,水浴回流2h,放冷,用70%乙醇补足减失的重量,混匀,滤过,用 少量70%乙醇洗涂,合并滤液和洗涂液,蒸至近干。残渣加水15血使溶解,用石油酸萃取3 次,每次10血,弃去石油酸层,水层用氨水调抑11~12,用乙酸乙醋萃取4次,每次10血, 合并乙酸乙醋层,蒸干,得碱性乙酸乙醋萃取部位(A部位)。经碱性乙酸乙醋萃取后的水层 用稀盐酸调抑至1~2,用乙酸乙醋萃取4次,每次10血,合并乙酸乙醋层,蒸干,得酸性乙 酸乙醋萃取部位(B部位)。将A部位、B部位残留物分别用70%甲醇溶解定容至摇匀, 高速离屯、10min(10000r·min1),取上清液,即得。 阳01引 2. 3色谱条件: C0RTECSTMCis(2. 7μπι,4. 6X150mm)色谱柱;乙腊-0. 1%憐酸水梯度洗脱,见表1 ;进 样量5μL;体积流量0. 5min/mL;检测波长220皿;柱溫40°C。
[0019] 表1梯度洗脱程序 2. 4方法学考察: 2. 4. 1精密度试验:取批号13254001的胶囊,按"2. 2"项下方法制备供试品溶液,连 续进样6次,按"2. 3"项下色谱条件进行测定(见图2),采用"中药色谱指纹图谱相似度评 价系统(2004A)"对测定结果进行相似度计算,并对A部位W紫花前胡巧(8号峰)为参照峰 (Sa),B部位W原儿茶酸(5号峰)为参照峰(?)分别计算A,B部位的共有色谱峰的相对保 留时间和相对峰面积的