一种用液相色谱法分离测定克利贝特中间体有关物质的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于分析化学领域，具体设及液相色谱法分离测定克利贝特中间体及其有 关物质的方法。
【背景技术】
[0002] 克利贝特是一种新型的纤维酸类降脂新药，对各种类型的高脂血症均有效，既可 作为第一线降脂药物，又可在其他降脂药物疗效不佳时使用。克利贝特中间体的化学名为 [2, 2'-(4, 4'-cyclohexylidenediphenoxy) ]-2, 2'-dimethyldiethylbutyrate，分子式 为〔32成4〇6。克利贝特中间体结构式为：
在合成该化合物的过程中，需要控制一些重要中间体的纯度，W减少副反应的发生和 杂质的生成，从而提高终产品的收率和纯度。对于克利贝特中间体的合成主要控制的有关 物质为 4, 4'-(切clohexane-l,l-di}d)diphenol，结构式为：
克利贝特中间体中的杂质去除不完全，将会引起副反应的发生和杂质的生成，最终影 响药物纯度和质量。因此，实现克利贝特中间体及其有关物质的分离测定，在克利贝特的生 产及其质量控制方面具有重要的现实意义。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的在于提供一种分析克利贝特中间体化学纯度的方法，从而实现克利 贝特中间体与其有关物质的分离和测定，保证克利贝特中间体的纯度，实现克利贝特的质 量可控。
[0004] 本发明所述的用液相色谱法分析克利贝特中间体化学纯度的方法，是采用辛烷基 硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，W-定比例的缓冲盐溶液-有机相为流动相。
[0005] 上述所说的色谱柱W辛烷基硅烷键合硅胶为填料，色谱柱选自Kromasil、化itary 和Alltima等品牌。
[0006] 上述所说的有机相选自W下化合物：甲醇、乙腊、丙醇、异丙醇、四氨巧喃等，优选 乙腊。
[0007] 上述所说的方法，其流动相缓冲盐溶液-有机相采用梯度洗脱。
[000引上述所说的方法中，缓冲盐溶液选自憐酸盐、甲酸盐、乙酸盐、高氯酸盐，优选为憐 酸盐。
[0009] 其中缓冲盐溶液的浓度为0. 01~0.lmol/1，优选浓度为0. 03mol/L。
[0010] 本发明所述的分离测定方法，可按照W下方法实现： 1)取克利贝特中间体样品适量，用乙腊或流动相溶解样品，配制成每ImL含克利贝特 0. 1~1. 5mg的样品溶液。
[0011] 2)设置流动相流速为0. 5~1. 5血/min,流动相流速优选为1. 0血/min,检测波长 为200~250皿，最佳检测波长为231皿，柱溫箱溫度为10~40°C，柱溫箱溫度最佳为25°C。
[0012] 3)取1)的样品溶液10~50μ以注入液相色谱仪，完成克利贝特中间体与其有关 物质的分离测定。其中： 高效液相色谱仪的型号，无特别要求，本发明采用的色谱仪为岛津：LC-20AT累，SPD-M20A检测器，SIL-20AC自动进样器，CBM-20A控制器，CT0-10AS柱溫箱，LCsolution工 作站 色谱柱：C8 (Alltima，250X4. 6mm，5μm) 流动相：Α:0. 03Μ憐酸二氨钟缓冲液（pH2. 2)，Β:乙腊；按W下梯度进行洗脱：
流速：1.OmL/min检测波长：231皿 进样体积：10μL 本发明采用C8(Alltima，250X4.6mm，5ym)色谱柱，能够有效的分离克利贝特中间体 及其有关物质。本发明解决了克利贝特中间体及其有关物质的分离测定问题，从而减少了 副反应的发生，提高了产物的收率和纯度，保证了克利贝特的质量可控。
【附图说明】
[0013] 图1为实施例1时的克利贝特中间体及其有关物质HPLC图； 图2为实施例1时克利贝特中间体HPLC图； 图3为实施例2时的克利贝特中间体及其有关物质HPLC图； 图4为实施例2时的克利贝特中间体的HPLC图； 图5为实施例3时的溶剂HPLC图； 图6为实施例3时的克利贝特中间体及其有关物质HPLC图； 图7为实施例3时的克利贝特中间体的HPLC图。
[0014]
【具体实施方式】： W下实施例用于进一步理解本发明，但不限于本实施的范围。
[001引 实施例1 仪器与条件 高效液相色谱仪：岛津：LC-20AT，CBM-20A，SIk20AC，SPD-M20A，CTO-lOASvp; 色谱柱：C8 (K;romasil，250X4. 6mm，5ym); 流动相：A:0. 03M憐酸二氨钟缓冲液（pH2. 2)，B:甲醇；A:B=20 :80 ; 流速：1.OmL/min检测波长：231皿 进样体积：10μL 实验步骤 取克利贝特中间体及其有关物质适量，分别用乙腊溶解样品，配制成含克利贝特中间 体及其有关物质约l.Omg/mL的样品溶液。取上述克利贝特中间体及其有关物质溶液适 量，配制成系统适用性溶液；按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见附图 1~2,图1中保留时间为29. 865min的色谱峰为克利贝特中间体，其余色谱峰为克利贝特中 间体各有关物质的色谱峰；图2中保留时间为29. 835min的色谱峰为克利贝特中间体。
[001引实施例2 仪器与条件 高效液相色谱仪：岛津：LC-20AT，CBM-20A，SIk20AC，SPD-M20A，CTO-lOASvp; 色谱柱：C8 (Alltima，250X4. 6mm，5ym); 流动相：A:0.03M憐酸二氨钟缓冲液（pH2. 2);B:乙腊；按^下梯度进行洗脱: 流速：1.OmL/min
检测波长：231皿 进样体积：10μL 实验步骤 取克利贝特中间体及其有关物质适量，分别用乙腊溶解样品，配制成含克利贝特中间 体及其有关物质约1.Omg/mL的样品溶液。取上述克利贝特中间体及其有关物质溶液适 量，配制成系统适用性溶液；按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见附图 3~4,图3中保留时间为26. 820min的色谱峰为克利贝特中间体，其余色谱峰为克利贝特中 间体各有关物质的色谱峰；图4中保留时间为26. 916min的色谱峰为克利贝特中间体。 [0017] 实施例3 仪器与条件 高效液相色谱仪：岛津：LC-20AT，CBM-20A，SIk20AC，SPD-M20A，CTO-lOASvp; 色谱柱：C8 (Alltima，250X4. 6mm，5ym); 流动相：A:0.03M憐酸二氨钟缓冲液（pH2. 2);B:乙腊；按^下梯度进行洗脱:
流速：1.OmL/min检测波长：231皿 进样体积：10μL 实验步骤 取克利贝特中间体有关物质适量，分别用乙腊溶解样品，配制成含克利贝特中间体及 其有关物质约1.Omg/血的样品溶液；取上述克利贝特中间体及其有关物质溶液适量，配制 成系统适用性溶液；另取乙腊适量作为空白溶剂。按上述条件进行高效液相色谱分析，记录 色谱图。结果见附图5~7,图5为溶剂色谱图；图6中保留时间为33. 517min的色谱峰为克 利贝特中间体，其余色谱峰为克利贝特各有关物质的色谱峰，由图可W看出，克利贝特与其 有关物质能够达到基线分离，符合中国药典的要求；图7中保留时间为33. 532min的色谱峰 为克利贝特中间体，可W看出在该条件下克利贝特中间体与其有关物质可W完全分离。
[0018]对上述克利贝特中间体及其有关物质分析方法的W下项目进行了验证。
[001引系统适用性试验 根据上述实施例3确定的色谱条件，用克利贝特中间体和各有关物质的混合物来分析 此色谱条件是否符合要求。由图6可见此条件下各个有关物质与主峰之间分离度符合要 求，峰纯度和单点阀值均符合要求。
[0020] 溶液稳定性
[0021]将克利贝特中间体与其各有关物质的混合物，分别于0、2、4、6、8、12、18、24小时 进样，考察样品定量测定时溶液的稳定性，由结果可见，本溶液在24小时内稳定。
[0022]
耐用性 为了进一步验证方法的稳定性，我们将流速、柱溫、缓冲盐抑和色谱柱型号运些条件 进行相应的微调，W考察色谱条件的耐用性。 结果表明，流速变化在±0. 2ml/min范围内，柱溫变化在±5°C范围内，色谱峰型没有 变化，仅保留时间有相应的前移和后移。缓冲液抑变化对出峰时间也无明显改变。色谱柱 换做Apollo和Kromasil后各物质保留时间和分离度无明显变化。方法耐用性良好。
【主权项】
1. 一种液相色谱法分离测定克利贝特中间体有关物质的方法，其特征在于：辛烷基硅 烷键合硅胶为填料的色谱柱，以一定比例的缓冲盐溶液-有机相为流动相。2. 根据权利要求1所述的分离测定方法，色谱柱选自品牌为Kromasil、Unitary和 Alltima的色谱柱。3. 根据权利要求1所述的分离测定方法，所说的有机相选自以下化合物中的一种：甲 醇、乙腈、丙醇、异丙醇、四氢呋喃等。4. 根据权利要求3所述的分离测定方法，所说的有机相优选乙腈。5. 根据权利要求1所述的分离测定方法，所说的缓冲盐溶液选自以下缓冲盐：磷酸盐、 甲酸盐、乙酸盐、高氯酸盐等。6. 根据权利要求5所述的分离测定方法，所说的缓冲盐溶液中所含缓冲盐的浓度最优 为 0· 03mol/L。7. 根据权利要求5所述的分离测定方法，所说的缓冲盐优选磷酸盐。8. 根据权利要求1所述的分离测定方法，其特征在于，包括以下几个步骤： 1) 取克利贝特中间体样品适量，分别用乙腈或流动相溶解样品，配制成每lmL含克利 贝特中间体及其有关物质0. 1~1. 5mg的样品溶液； 2) 设置流动相流速为0. 5~1. 5mL/min，检测波长为200~250nm，柱温箱温度为10~ 40°C； 3) 取1)的样品溶液10~50μL，注入液相色谱仪，完成克利贝特中间体及其有关物质 的分离测定。9. 根据权利要求5所述的分离分析方法，缓冲盐优选磷酸二氢钾。10. 根据权利要求5所述的分离分析方法，缓冲溶液的pH值优选2. 2。11. 根据权利要求8所述的分离分析方法，步骤2)所说的流动相流速优选1.OmL/min。12. 根据权利要求8所述的分离分析方法，步骤2)所说的检测波长优选231nm。
【专利摘要】本发明属分析化学领域，本发明公开了一种用液相色谱法分离测定克利贝特中间体[2,2ˊ-(4,4ˊ-cyclohexylidenediphenoxy)]-2,2ˊ-dimethyl？diethyl？butyrate及其有关物质的方法，该方法以辛烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以一定比例的缓冲盐溶液-有机相为流动相，可以定量测定克利贝特中间体及其有关物质的含量，从而有效控制克利贝特中间体的质量，保证克利贝特终产品的质量可控。本发明方法专属性强，准确度高，操作简便。
【IPC分类】G01N30/88
【公开号】CN105403647
【申请号】CN201510648724
【发明人】王晓莹, 刘秋叶
【申请人】北京万全德众医药生物技术有限公司
【公开日】2016年3月16日
【申请日】2015年10月9日