一种检测靶物质的信号放大方法及使用该方法的免疫层析试纸和装置的制造方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及生物检测领域，设及一种检测祀物质的信号放大方法及使用该方法的 免疫层析试纸和装置。
【背景技术】
[0002] 简单、灵敏、有效的检测技术在疾病诊断、新药开发、生化防御等领域意义重大。中 国专利CN01822390. 7公开了一种检测分析物的测试条测试法，该方法是首先对检测抗体 (祀向试剂)进行生物素(配体)化修饰，示踪颗粒标记了抗生物素抗体(标记物)，运样在检测 过程中会形成"树枝状"结构，使检测信号得W放大。基于运一原理制备的乙肝表面抗原免 疫层析试纸条的灵敏性得到大幅度提高，且基于运一原理制备的乙肝表面抗原检测试纸条 较Abbott公司的乙肝表面抗原检测试纸条更为灵敏。中国专利CN200880132189公开了一 种免疫层析测试中信号放大的方法W及使用该方法的免疫层析试剂盒，该方法采用两种不 同粒径的偶联物超灵敏检测祀物质的信号方法，也是采用了树枝状信号放大技术。
[0003]现有的检测祀物质（或分析物）的信号放大方法只能针对一种祀物质进行分析，但 在检测领域，往往需要对样品中的多种祀物质进行检测，方可做出准确可靠的判断，现有的 检测方法往往是每个项目单独检测，然后综合各个检测结果，得出检测结论，且需要准备多 种试纸条并采用多份样品进行测试。现有的联检方法都是在各个单检体系中寻找一个折衷 的体系建立起来的，运个折衷的体系往往是W牺牲检测灵敏性为代价的，所W目前已有的 联合同时检测方法的灵敏性往往不够理想，无法满足现实需要。
【发明内容】
[0004]本发明所要解决的技术问题是提供一种检测祀物质的信号放大方法及使用该方 法的免疫层析试纸和装置，该方法不但能够高灵敏检测祀物质，而且实现了多种祀物质的 同时检测。
[0005]本发明所要解决的技术问题通过W下技术方案予W实现： 一种检测祀物质的信号放大方法，包括： 生物分子I、生物分子II、生物分子III…生物分子N分别与不同祀物质特异性 结合； 生物分子I、生物分子II、生物分子III…生物分子N均能与偶联在颗粒上的分 子A1、分子A2、分子A3…分子An中的任意一个结合，形成树枝状结构； 通过能特异性结合不同祀物质的生物分子I'、生物分子II'、生物分子III'… 生物分子Ν'分别捕获树枝状结构上的不同祀物质；其中， Ν> 2、Ν' > 2 和η> 1。
[0006]优选地，所述祀物质为蛋白质分子、蛋白质分子复合物、核酸、核酸复合物中的任 意一种。
[0007] 优选地，所述生物分子I、生物分子II、生物分子III…生物分子N均为生物 分子与半抗原分子的偶联物；所述生物分子I、生物分子II、生物分子III…生物分 子N上具有至少两个与分子A1、分子A2、分子A3…分子An相结合的位点。
[0008] 优选地，所述生物分子I、生物分子II、生物分子III…生物分子N中的任意 每一个生物分子上偶联有5~15个半抗原分子。
[0009] -种检测祀物质的免疫层析试纸，包括依次搭接粘贴在底板上的样品垫、第一结 合垫、层析膜、吸水垫；所述第一结合垫包被有偶联有分子A1、分子A2、分子A3…分子An的 颗粒、及能特异性结合不同祀物质的生物分子I、生物分子II、生物分子III…生物 分子N;所述层析膜上不同区域的检测线分别固定有能特异性结合不同祀物质的生物分子 I'、生物分子II'、生物分子III'…生物分子Ν' ；其中，2、N' > 2和η> 1。
[0010] 一种检测祀物质的免疫层析试纸，包括依次搭接粘贴在底板上的样品垫、第二结 合垫、第Ξ结合垫、层析膜、吸水垫；所述第二结合垫包被有能特异性结合不同祀物质的生 物分子I、生物分子II、生物分子III…生物分子Ν，所述第Ξ结合垫包被有偶联有分 子Α1、分子Α2、分子A3…分子An的颗粒；所述层析膜上不同区域的检测线分别固定有能特 异性结合不同祀物质的生物分子I'、生物分子II'、生物分子III'…生物分子Ν'; 其中，2、Ν' > 2 和η> 1。
[0011] 优选地，所述第二结合垫和第Ξ结合垫调换位置顺序。
[0012] 一种检测祀物质的免疫层析装置，包括反应微孔和免疫层析试纸，该免疫层析试 纸包括依次搭接粘贴在底板上的样品垫、层析膜、吸水垫；所述反应微孔含有偶联有分子 Α1、分子Α2、分子A3…分子An的颗粒、及能特异性结合不同祀物质的生物分子I、生物分 子II、生物分子III…生物分子N;所述层析膜上不同区域的检测线固定有能特异性 结合不同祀物质的生物分子I'、生物分子II'、生物分子III'…生物分子Ν';其中， 2、Ν' > 2 和η> 1。
[0013] 一种检测祀物质的免疫层析装置，包括反应微孔和免疫层析试纸；反应微孔中含 有生物分子I、生物分子II、生物分子III…生物分子Ν;免疫层析试纸条由依次搭接粘贴 到底板上的样品垫、第Ξ结合垫、层析膜、吸水垫组成；所述第Ξ结合垫包被有偶联有分子 Α1、分子Α2、分子A3…分子An的颗粒；所述层析膜上不同区域的检测线固定有能特异性结 合不同祀物质的生物分子I'、生物分子II'、生物分子III'…生物分子Ν' ；其中， 2、Ν' > 2 和η> 1。
[0014] 一种检测祀物质的免疫层析装置，包括渗滤卡、封闭液、含有偶联有分子Al、分子 A2、分子A3……分子An的颗粒的溶液、含有生物分子I、生物分子II、生物分子III···生物分 子N的溶液、洗涂液；其中渗滤卡由卡底、吸水垫料、渗滤膜、卡盖组成；所述渗滤膜上不同 检测区域分别固定有能特异性结合不同祀物质的生物分子I'、生物分子II'、生物分子 III'…生物分子Ν' ；其中，2、Ν' > 2和η> 1。
[0015] 本发明具有如下有益效果： 本发明的信号放大方法不但能够高灵敏检测祀物质，而且实现了多种祀物质的同时检 巧。。同样，也使用该信号放大方法制造出了高灵敏度且同时检测多种祀物质的免疫层析试 纸条或免疫层析装置，其层析膜上不同区域上设有多个检测线，各个检测线上的夹屯、反应 不会相互影响，达到了一份液体样品同时检测多种祀物质，且在同样条件下进行，既节约了 检测时间，也减小了检测误差，同时降低了检测成本。
【附图说明】
[0016] 图1为本发明同时检测两种祀物质I、II的信号放大的原理示意图； 图2为本发明一种使用该信号放大方法同时检测多种祀物质的免疫层析试纸的结构 示意图； 图3为本发明另一种使用该信号放大方法同时检测多种祀物质的免疫层析试纸的结 构示意图。
【具体实施方式】
[0017] 下面结合实施例对本发明进行详细的说明，实施例仅是本发明的优选实施方式， 不是对本发明的限定。
[0018] 本发明的信号放大方法中，包括偶联有分子A1、分子A2、分子A3…分子An(n> 1) 的颗粒、能特异性结合不同祀物质的生物分子I、生物分子II、生物分子III…生物 分子N(N> 2)、W及位于固相上不同区域的且能特异性结合不同祀物质的生物分子I'、 生物分子II'、生物分子III'…生物分子Ν' (Ν' >2)，其中，生物分子I与生物分 子Γ能够夹屯、检测特定的祀物质I，生物分子II与生物分子ΙΓ能够夹屯、检测特定的祀物 质II，W此类推；生物分子I、生物分子II、生物分子III…生物分子Ν能够与分子Α1、分子 Α2、分子A3…分子An中的任意一个结合。同时检测不同祀物质时，将生物分子I、生物分子 II、生物分子III…生物分子N分别与不同祀物质特异性结合；同时生物分子I、生物 分子II、生物分子III…生物分子N与偶联在颗粒上的分子A1、分子A2、分子A3…分 子An中的任意一个结合，形成结合有不同祀物质的树枝状结构；通过能特异性结合不同祀 物质的生物分子I'、生物分子II'、生物分子III'…生物分子Ν'分别捕获树枝状结 构上的不同祀物质，最后在固相上形成强烈的信号。
[0019] 所述分子Α1、分子Α2、分子A3……分子An为单克隆抗体或多克隆抗体，还可W是 其他可与所述生物分子I、生物分子II、生物分子III…生物分子N结合的分子。
[0020] 所述颗粒为金属颗粒、彩色乳胶颗粒、巧光颗粒中的任一种，或者其他任何一种可 W作为信号标记物的颗粒。所述颗粒的形状为球形、管状、棒状、或多面体中的任一种，但不 局限于此。
[0021] 所述祀物质为蛋白质分子、蛋白质分子复合物、核酸、核酸复合物中的任意一种， 还可W是其他能够发生特异性结合的分子。
[0022] 所述生物分子I、生物分子II、生物分子III…生物分子N均为生物分子与 半抗原分子的偶联物，如单克隆抗体与生物