一种贝伐单抗试剂盒及其抗药抗体试剂盒的制作方法

文档序号:9665654阅读:602来源:国知局
一种贝伐单抗试剂盒及其抗药抗体试剂盒的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及磁微粒化学发光免疫诊断领域,特别是涉及一种贝伐单抗试剂盒及其 抗药抗体试剂盒。
【背景技术】
[0002] 近年来,国内外对于治疗性抗体的研究越来越深入,广泛应用于炎症疾病、免疫疾 病、传染病以及癌症的治疗,并且进展迅速,涉及到发病机理,临床诊断,临床治疗,预后,遗 传,并逐渐发展到对相关药物给药过程中产生的抗体即抗药抗体(ADA)的研究。
[0003] 血管内皮生长因子(VEGF)在肿瘤发生、发展过程中发挥重要作用。VEGF通过血管 内皮细胞表面VEGFR2受体激活下游信号,可诱导内皮细胞的生长、迀移和管状形成,促进 新生血管形成、提高血管通透性,满足肿瘤细胞对氧和营养的需求。贝伐单抗 (Bevacizumab,商品名Avastin)是FDA批准上市的一种重组的人源化单克隆IgGl抗体,分 子量为149kDa,由两条重链和两条轻链组成,能够结合VEGF-A全部亚型的作用,阻断VEGF与 VEGFR2受体相互作用介导的信号通路,阻断肿瘤血管生成。经临床验证,Bevacizumab能够 有效延长癌症患者的生存期,在临床肿瘤的治疗中具有重大意义。目前主要用于治疗各种 转移性癌症,如用于联合以5-FU为基础的化疗方案一线治疗转移性结直肠癌以及晚期非小 细胞肺癌的治疗。
[0004] 然而,在使用贝伐单抗治疗期间,会产生针对其自身的ADA,降低贝伐单抗在血浆 中的浓度水平,随后疾病症状再次出现,甚至加重。因此评估体内VEGF治疗性抗体及其相对 应的ADA水平,对患者进行直接监测,辅助医护人员进行病情精确诊断,十分有必要。目前, 对于ADA的检测方法已有报道,主要为酶联免疫吸附法,但该方法存在着不足之处。
[0005] ELISA检测ADA,简便易行,特异性高,可为临床对肿瘤单抗药物的使用提供更为客 观的实验依据。但与其他生物检测或免疫检测比较,这种ELISA检测方法、技术、工具或产 品仍有较多的不足而使其应用受限,这些不足主要包括以下几个方面: (1) 检测试剂在检测过程中为开放方式,容易引起各种试剂之间的交叉污染而影响检 测结果; (2)ELISA方法多采用辣根过氧化物酶进行检测,其检测范围和灵敏度都较低。
[0006] (3)ELISA方法的检测时间通常反应是一件较长,完成一个测试所需的总时间一般 在2个小时以上,不能完全满足临床上的快速诊断的需求。
[0007] (4)ELISA方法不能随机进样检测,检测结果存在滞后性。

【发明内容】

[0008] 本发明主要解决的技术问题是提供一种贝伐单抗试剂盒及其抗药抗体试剂盒,采 用一种新型化学发光法进行测定。
[0009] 为解决上述技术问题,本发明采用的一个技术方案是:提供一种贝伐单抗 Bevacizumab试剂盒,包括生物素化抗Bevacizumab抗体、Bevacizumab校准品、Bevacizumab 质控品、AP-抗人IgG1抗体、磁微粒试剂、化学发光底物和清洗液,所述生物素化抗Bevacizumab抗体为偶联有生物素的抗Bevacizumab抗体,所述AP-抗人IgGl抗体为AP标记 的抗人IgG1抗体,所述磁微粒试剂为表面有亲和素的纳米磁微粒悬浮液。
[00?0]在本发明一个较佳实施例中,所述生物素化抗Bevacizumab抗体为生物素与抗Bevacizumab抗体分子表面的-NH2基团反应得到。
[0011] 在本发明一个较佳实施例中,所述磁微粒试剂中磁微粒的直径为0.1-0.5μηι,所述 磁微粒试剂具有超顺磁性。
[0012] 在本发明一个较佳实施例中,所述Bevacizumab校准品是由含有Bevacizumab的人 血清配制而成,用于得到校准曲线,所述Bevacizumab质控品是由含有Bevacizumab的人血 清配制而成。
[0013] 在本发明一个较佳实施例中,所述化学发光底物中包括有3-(2-螺旋金刚烷)-4_ 甲氧基-4- (3-磷氧酰)-苯基-1,2-二氧环乙烷二钠盐AMPH)。
[0014] 提供一种Anti-Bevacizumab抗药抗体试剂盒,包括生物素化Bevacizumab、抗 Bevacizumab抗体校准品、抗Bevacizumab抗体质控品、AP-抗ADA抗体、磁微粒试剂和清洗 液,所述生物素化Bevacizumab为偶联有生物素的Bevacizumab,所述AP-抗ADA抗体为AP标 记的抗ADA抗体,所述磁微粒试剂为表面有亲和素的纳米磁微粒悬浮液。
[0015] 在本发明一个较佳实施例中,所述生物素化Bevacizumab为生物素与Bevacizumab 表面的-NH2基团反应得到。
[0016] 在本发明一个较佳实施例中,所述磁微粒试剂中磁微粒的直径为0.1-0.5μηι,所述 磁微粒试剂具有超顺磁性。
[0017] 在本发明一个较佳实施例中,所述抗Bevacizumab抗体校准品是由抗Bevacizumab 抗体配制而成,用于得到校准曲线,所述抗Bevacizumab抗体质控品是由抗Bevacizumab抗 体配制而成。
[0018] 在本发明一个较佳实施例中,所述化学发光底物中包括有3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4- (3-磷氧酰)-苯基-1,2-二氧环乙烷二钠盐AMPH)。
[0019] 本发明的有益效果是:本发明的贝伐单抗试剂盒及其抗药抗体试剂盒,采用全自 动磁微粒化学发光检测方法,选取碱性磷酸酶AP-金刚烧AMPH)体系,具有稳定性好,灵敏度 高,重复性好等优点,同时大大缩短了检测时间,完成一个测试所需的总时间在50分钟以 内,而且操作简易方便,真正实现了检测全自动化。
【附图说明】
[0020] 为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案,下面将对实施例描述中所需要使 用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例,对于 本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据这些附图获得其它 的附图,其中: 图1是本发明Bevacizumab试剂盒的检测原理图; 图2是本发明Anti-Bevacizumab试剂盒的检测原理图; 图3是本发明Bevacizumab试剂盒与国外知名公司同类产品样本比对图; 图4是本发明Bevacizumab试剂盒的实际检测浓度与理论浓度的线性回归图; 图5是本发明Anti-Bevacizumab试剂盒的实际检测浓度与理论浓度的回归线性图。【具体实施方式】
[0021]下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施 例仅是本发明的一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通 技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例,都属于本发明保护的范 围。
[0022] 实施例一: 提供一种贝伐单抗1^¥3(^2111]^13试剂盒,包括生物素化抗136¥3(^2111]^13抗体、Bevacizumab校准品、Bevacizumab质控品、AP-抗人IgGl抗体、磁微粒试剂、化学发光底物和 清洗液。所述生物素化抗Bevacizumab抗体为偶联有生物素的抗Bevacizumab抗体。所述AP-抗人IgGl抗体为AP标记的抗人IgGl抗体,是将碱性磷酸酶AP与抗人IgG抗体偶联。所述磁微 粒试剂为表面有亲和素SA基团的纳米磁微粒悬浮液。所述清洗液可以是清洗浓缩液,在使 用时进行配制。
[0023] 所述生物素化抗Bevacizumab抗体为生物素与抗Bevacizumab抗体分子表面的-NH2基团反应得到。所述磁微粒试剂中磁微粒的直径为0 .l-o. 5μηι,所述磁微粒试剂具有超 顺磁性。所述Bevacizumab校准品是由含有Bevacizumab的人血清配制而成,用于得到校准 曲线,所述Bevacizumab质控品是由含有Bevacizumab的人血清配制而成。所述化学发光底 物中包括有3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1,2-二氧环乙烷二钠盐 AMPPD,主要成分为金刚烷(AMPH)),在碱性磷酸酶的催化下释放光子。
[0024]所述检测试剂盒是基于磁微粒化学发光检测原理来实现抗药抗体的免疫含量检 测的,其检测原理如图1所示:将单抗药物样本Bevacizumab与磁微粒试剂M、生物素化抗 Bevacizumab抗体R1混合,得到样本-M-R1复合物,进行洗涤,再加入AP-抗人IgGl抗体R2,得 到样本-M-R1-R2复合物,进行洗涤,再加入化学发光底物,测定发光结果。
[0025] 实施例二: 提供一种Anti-Bevacizumab抗药抗体检测试剂盒,包括生物素化Bevacizumab、抗Bevacizumab抗体校准品、抗Bevacizumab抗体质控品、AP-抗ADA抗体、磁微粒试剂和清洗 液。所述生物素化Bevacizumab为偶联有生物素的Bevacizumab。所述AP-抗ADA抗体为AP标 记的抗ADA抗体,是将碱性磷酸酶AP与抗ADA(Anti-Bevacizumab)抗体偶联。所述磁微粒试 剂为表面有亲和素SA基团的纳米磁微粒悬浮液。所述清洗液可以是清洗浓缩液,在使用时 进行配制。其中ADA指抗药物抗体Anti-DrugAntibody,这里特指Anti-Bevacizumab。
[0026] 所述生物素化Bevacizumab为生物素与Bevacizumab表面的-NH2基团反应得到。所 述磁微粒试剂中磁微粒的直径为〇 . 1-0.5μηι,
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