活化部分凝血活酶时间测定试剂盒及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种体外诊断试剂盒及其制备方法，尤其设及一种活化部分凝血活酶 时间测定试剂盒及其制备方法，属于生物技术领域。
【背景技术】
[0002] 机体的止血功能是由血小板、凝血系统、纤溶系统和血管内皮系统等的共同作用 来完成的。过去我们曾用出血时间作为止血功能缺陷的筛检试验，但因其操作标准化程度 不高，敏感性不好，且无法反映凝血因子的含量及活性，故目前已为凝血功能检查所取代。 凝血功能检查主要是凝血四项一一凝血酶原时间、活化部分凝血活酶时间、凝血酶时间和 纤维蛋白原含量。凝血四项是检验科的重要临检项目，也是手术前必须检测的项目之一，凝 血四项检测对了解检查对象的凝血功能有重要意义。
[0003] 活化部分凝血活酶时间(APTT)测定是内源性凝血因子缺乏最可靠的筛选试验，是 用来证实先天性或获得性凝血因子VDI、IX、XI的缺陷或是否存在它们相应的抑制物。APTT延 长见于：（1)因子VDKK和XI血浆水平减低，如血友病。（2)严重的凝血酶原（因子Π)因子V、 X和纤维蛋白原缺乏，如肝脏疾病、阻塞性黄痘、新生儿出血症、肠道灭菌综合征、吸收不良 综合征、口服抗凝剂、应用肝素W及低(无)纤维蛋白原血症。（3)纤容活力增强，如继发性或 原发性纤溶W及血循环中有纤维蛋白（原）降解物(FDP)"(4)血循环中有抗凝物质，如抗因 子Μ或Κ抗体、SLE等。APTT缩短见于：（1)高凝状态，如DIC的高凝血期，促凝物质进入血流 W及凝血因子的活性增高等。（2)血栓性疾病，如屯、肌梗塞、不稳定性屯、绞痛、脑血管病变、 糖尿病伴血管病变、肺梗死、深静脉血栓形成、妊娠高血压综合征和肾病综合征等。
[0004] 由于市售的活化部分凝血活酶时间(APTT)测定试剂盒种类繁多且质量参差不齐， 使得同个患者在不同的实验室中测定的结果差别较大，使得检测结果不准确，从而影响医 生对疾病的正确诊断与治疗。因此，活化部分凝血活酶时间(APTT)测定试剂的质量成了准 确的测定结果及正确诊断治疗的关键性因素。同时，由于很多干粉试剂需复溶后使用，而复 溶后的试剂稳定性又较差，又会给APTT测定的操作带来麻烦并且造成不必要的浪费，因此， 研制一种有效可靠、使用方便的活化部分凝血活酶时间（APTT)测定试剂无疑是相当必要 的。
【发明内容】
[0005] 为了克服上述现有【背景技术】中的不足，本发明提供一种活化部分凝血活酶时间测 定试剂盒及其制备方法，该活化部分凝血活酶时间测定试剂盒免去了配制过程中的分装和 冻干等步骤，避免了使用过程中复溶所导致试剂稳定性和测定效果变差的问题，保证了试 剂的稳定性，同时也避免了试剂的浪费，进一步得到准确性、重复性及稳定性等总体性能更 好且操作更简便的活化部分凝血活酶时间测定试剂。
[0006] 为了实现上述目的，本发明提供一种活化部分凝血活酶时间测定试剂盒，包含憐 脂试剂和氯化巧试剂，两种试剂储存在不同容器中；
[0007]所述憐脂试剂由固体激活剂、憐脂和缓冲体系混合而成，所述固体激活剂的含量 为0.01~2g/L，所述固体激活剂选自较花酸、皂±、高岭±、娃藻±、娃酸儀侣其中一种或几 种的混合物;所述憐脂的含量为2.5~8wt%，所述缓冲体系的抑为6.0~8.0，所述缓冲体系 中各组分含量为包括:0.1~1M的缓冲剂、0.01~0.%的稳定剂、0.1~1.Owt%的聚乙二 醇、其余为水;所述缓冲剂选自于:Tris-化1、化pes、PBS、MP0S;所述稳定剂选自于:叠氮钢、 KathoruProclin、甘氨酸、牛血清白蛋白、硫柳隶、硝酸隶苯、氯仿、石炭酸；
[000引所述氯化巧试剂的工作浓度为15~40mM。
[0009] 优选地，在上述技术方案中，所述固体激活剂的含量为0.05~Ig/L。
[0010] 优选地，在上述技术方案中，所述憐脂含量为5~7wt%。
[0011] 优选地，在上述技术方案中，所述憐脂为兔脑憐脂。
[0012] 优选地，在上述技术方案中，所述缓冲剂在缓冲体系中的含量为0.4~0.75M。
[0013] 优选地，在上述技术方案中，所述稳定剂在缓冲体系中的含量为0.05~O.lwt%， 更优选地，所述稳定剂为Kathon、甘氨酸、血清白蛋白的1:0.86:1.1的混合物。
[0014]优选地，在上述技术方案中，所述稳定剂选自于：叠氮钢、KathonJroclin、甘氨 酸、牛血清白蛋白、硫柳隶、硝酸隶苯、氯仿、石炭酸。
[0015] 优选地，在上述技术方案中，所述聚乙二醇在缓冲体系中的含量为0.3~0.8wt%。
[0016] 优选地，在上述技术方案中，所述氯化巧试剂的工作浓度为20~35mM。
[0017] 本发明还提供一种制备上述所述活化部分凝血活酶时间测定试剂盒的方法，包括 如下步骤:首先（1)配制缓冲体系，抑调至6.0~8.0,加入固体激活剂后混匀，得到初始混合 溶液；（2)向初始混合溶液中加入不同浓度的憐脂混匀，配合氯化巧溶液在凝血仪上进行质 控测定，测定结果最接近该机型凝血仪的质控范围中间值的试剂比例就是最终的配比；（3) 按照最终的试剂配比，向初始混合溶液中加入凝脂，揽拌混匀后加入聚乙二醇和稳定剂，混 匀后即为活化部分凝血活酶时间测定试剂盒中的憐脂试剂；（4)称量氯化巧固体溶解于一 级水中，混匀即为即为活化部分凝血活酶时间测定试剂盒中的氯化巧试剂；（5)将憐脂试剂 和氯化巧试剂分别包装后得到活化部分凝血活酶时间测定试剂盒。
[0018] 本发明的有益效果:提供一种活化部分凝血活酶时间测定试剂盒及其制备方法， 该活化部分凝血活酶时间测定试剂盒免去了配制过程中的分装和冻干等步骤，避免了因冻 干和复溶过程造成的试剂的瓶间差异，从而导致测定结果之间的较大差异。本发明试剂无 需冻干，即可保证试剂的稳定性，确保了开瓶后试剂的最优有效性持续至少一个月，避免了 实验结果间的较大差异，同时节约了试剂的用量，开瓶即用，操作起来更加快捷简便。
【具体实施方式】
[0019]W下结合具体实施例对本发明作进一步的详细描述。
[0020] 本发明的活化部分凝血活酶时间测定试剂盒，包含憐脂试剂和氯化巧试剂，两种 试剂储存在不同的容器中；
[0021] 憐脂试剂由固体激活剂、憐脂和缓冲体系组成，固体激活剂的含量为0.01~2g/L， 憐脂的含量为2.5~8wt%，缓冲体系的抑为6.0~8.0，缓冲体系中各组分含量为:0.1~1M 的缓冲剂、0.01~0.%的稳定剂、0.1~1.Owt%的聚乙二醇、其余为水;所述缓冲剂选自 于:化13-化1、胎96 3、？85、]\^05;所述稳定剂选自于：叠氮钢、1(日1:11〇]1、？1'〇(31;[]1、甘氨酸、牛血 清白蛋白、硫柳隶、硝酸隶苯、氯仿、石炭酸；
[0022] 氯化巧试剂的工作浓度为15~40mM。
[0023] 制备上述活化部分凝血活酶时间测定试剂盒的方法，包括如下步驟（1)配制缓冲 体系，抑调至6.0~8.0，加入固体激活剂后混匀，得到初始混合溶液；（2)向初始混合溶液中 加入不同浓度的憐脂混匀，配合氯化巧溶液在凝血仪上进行质控测定，测定结果最接近该 机型凝血仪的质控范围中间值的试剂比例就是最终的配比；（3)按照最终的试剂配比，向初 始混合溶液中加入凝脂，揽拌混匀后加入聚乙二醇和稳定剂，混匀后即为活化部分凝血活 酶时间测定试剂盒中的憐脂试剂；（4)称量氯化巧固体溶解于一级水中，混匀即为即为活化 部分凝血活酶时间测定试剂盒中的氯化巧试剂；（5)将憐脂试剂和氯化巧试剂分别包装后 得到活化部分凝血活酶时间测定试剂盒。
[0024] 实施例1
[0025] 活化部分凝血活酶时间测定试剂盒，包含憐脂试剂和氯化巧试剂，两种试剂储存 在不同容器中；憐脂试剂由较花酸、憐脂和缓冲体系组成，较花酸的含量为2g/L，憐脂的含 量为2.5wt%，缓冲体系中各组分含量为：1M的Tris-Hcl、0.Olwt%的Kathon、1 .Owt%的聚 乙二醇、其余为水，缓冲体系的pH为6.0;氯化巧试剂的工作浓度为15mM。使用本发明试剂盒 时，待测血浆与憐脂试剂用量的体积比为1:0.85~1.1。
[00%]制备上述活化部分凝血活酶时间测定试剂盒的方法，包括如下步;S囊(1)配制缓冲 体系，抑调至6.0~8.0，加入固体激活剂后混匀，得到初始混合溶液；（2)向初始混合溶液中 加入不同浓度的憐脂混匀，配合氯化巧溶液在凝血仪上进行质控测定，测定结果最该机型 凝血仪的质控范围中间值的试剂比例就是最终的配比；（3)按照最终的试剂配比，向初始混 合溶液中加入凝脂，揽拌混匀后加入聚乙二醇和稳定剂，混匀后即为活化部分凝血活酶时 间测定试剂盒中的憐脂试剂；（4)称量氯化巧固体溶解于一级水中，混匀即为即为活化部分 凝血活酶时间测定试剂盒中的氯化巧试剂；（5)将憐脂试剂和氯化巧试剂分