一种右归丸中多种成分含量的检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种右归丸中多种成分含量的检测方法，属于成分检测领域。
【背景技术】
[0002] 右归丸出自《景岳全书》，其组成和制备方法为"大怀熟地八两，山药(炒）四两，山 荣英(微炒)Ξ两，构杞(微炒）四两，鹿角胶(炒珠）四两，寃丝子(制）四两，杜仲(姜汤炒）四 两，当归Ξ两(便漉勿用），肉桂二两(渐可加至四两），制附子二两(渐可加至五六两）。上先 将熟地蒸烂巧膏，加炼蜜为丸，如梧桐子大"。右归丸被后世广泛应用临床治疗肾阳虚的病 证，并具有确切疗效。
[0003] 目前对右归丸化学成分报道较少，杜丽霞等(杜丽霞，何文智，刘晓阳，王智民，任 艳玲.左_右归丸及其拆方中马钱巧的变化规律.中国实验方剂学杂志，2014,20(21) :56-59)采用HPLC法测定了右归丸中马钱巧的含量，为右归丸的质量控制提供了标准;刘加宝 巧IJ加宝.HPLC法测定右归丸中桂皮醒的含量.黑龙江科学，2014，5 (8): 15-16)通过HPLC法 建立了快速测定右归丸中桂皮醒含量的方法;王丽双（王丽双.中药复方左归丸、右归丸和 济生肾气丸的鉴别和质量评价研究：[硕±学位论文]，山东大学，2011年)建立了红外指纹 图谱、HP1X指纹图谱鉴定方法，对右归丸的质量进行评价。但W上研究仅选取了右归丸中一 个活性成分测定或仅进行定性分析，覆盖范围相对局限，右归丸中其他化学成分尚不清楚， 应用于右归丸的质量评价难免相对片面。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种右归丸中多种成分含量的检测方法。
[0005] 本发明所提供的检测方法，包括如下步骤：
[0006] 1)利用甲醇超声提取右归丸，然后进行滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液作为供试 品溶液；
[0007] 2)向所述供试品溶液中加入内标溶液，作为待测样品；
[000引3)采用高效液相色谱-电喷雾串联质谱检测所述待测样品，即得到右归丸中下述 任一种成分的含量：
[0009] a)新乌头原碱、b)山荣英新巧、C)地黄巧A、d)附子灵、e)宋果灵、f)金丝桃巧、g)苯 甲酯次乌头原碱、h)松果菊巧、i)苯甲酯乌头原碱、j)地黄巧D、k)苯甲酯中乌头原碱、1)尼 奥灵、m)马钱巧、η)多根乌头碱、0)猜芽菜巧和P)莫诺巧。
[0010] 上述的检测方法中，步骤1)中，过滤时得到的前几滴滤液作为初滤液，常弃去，取 0.1~0.2mL即可，后续所得滤液为续滤液，用于测定。
[0011] 上述的检测方法中，步骤1)中，所述甲醇的用量可为:0.1g所述右归丸需要添加1 ~5mL甲醇。
[0012] 上述的检测方法中，步骤1)中，所述超声提取的频率可为20~80KHZ，具体可为 45Ifflz，所述超声提取的时间可为30~60min，具体可为30min;
[001引所述滤膜可为尼龙66膜，所述滤膜的孔径可为ο. 22μπι或ο. 45皿。
[0014] 上述的检测方法中，步骤2)中，
[0015] 所述内标溶液为下螺环酬的甲醇水溶液；
[0016] 所述下螺环酬的用量为：1~5ng/mL所述待测样品。
[0017] 上述的检测方法中，步骤3)中，所述高效液相色谱-电喷雾串联质谱检测方法中的 色谱条件如下：
[001引流动相A:体积分数为0.05%~0.2%的甲酸的乙腊溶液，具体可为0.1 % ;
[0019] 流动相B:体积分数为0.05%~0.2%的甲酸的水溶液，具体可为0.1 % ;
[0020] 色谱柱:AgilentEclipsePlus-C18色谱柱，柱长为100mm、柱径为2.1mm和填料粒 径为3.如m;
[0021] 柱溫:20~30°C，具体可为25°C;
[0022] 流速:〇.45mL/min;
[0023] 进样体积：10或20μ1^;
[0024] 每个样品的运行时间：12.Omin;
[002引洗脱梯度如下：
[00%] 0-1.5min:流动相A体积分数为98%，流动相B体积分数为2% ;
[0027] 1.5-4min:流动相A体积分数从98%降至55%，流动相B体积分数从2%升至45% ;
[0028] 4-8min:流动相A体积分数从55%降至15%，流动相B体积分数从45%升至85% ;
[0029] 8-9min:流动相A体积分数为15%，流动相B体积分数为85% ;
[0030] 9-9.Olmin:流动相A体积分数从15%升至98%，流动相B体积分数从85%降至2% ; [0031 ] 9-12min:流动相A体积分数为98%，流动相B体积分数为2%。
[0032] 所述高效液相色谱-电喷雾串联质谱检测步骤中的质谱条件如下：
[0033] 离子源:电喷雾离子化源；
[0034] 质谱工作模式:正离子扫描的MRM检测模式；
[0035] 气帘气、雾化气和满流加热气均使用氮气，其设定值分别为20~30psi、50~60psi 和50~60psi，具体可为20psi、55psi和55psi ;
[0036] 离子源溫度为350~500°C，具体可为500°C;
[0037] 离子源喷射电压为4500~5500V，具体可为5500V。
[0038] 所述右归丸中的16种化合物按编号1-编号16依次为新乌头原碱、山荣英新巧、地 黄巧A、附子灵、宋果灵、金丝桃巧、苯甲酯次乌头原碱、松果菊巧、苯甲酯乌头原碱、地黄巧 D、苯甲酯中乌头原碱、尼奥灵、马钱巧、多根乌头碱、猜芽菜巧和莫诺巧，此16种化合物均具 有很强的正离子信号。
[0039] 其中，编号为1的新乌头原碱的质谱工作参数如下:母离子(m/z)为486.2;产品离 子定量值(m/z)为436.2;产品离子定性值(m/z)为454.2448，404.2079;去簇电压为250V;碰 撞电压为44eV;碰撞室射出电压为25V。
[0040] 编号为2的山荣英新巧的质谱工作参数如下:母离子(m/z)为565.1;产品离子定量 值(m/z)为163.3;产品离子定性值(m/z)为403.1011,255.0845;去簇电压为250V;碰撞电压 为39eV;碰撞室射出电压为12V。
[0041] 编号为3的地黄巧A的质谱工作参数如下：母离子(m/z)为547.1;产品离子定量值 (m/z)为203.1;产品离子定性值(m/z)为385.1115,203.0532;去簇电压为151V;碰撞电压为 44eV;碰撞室射出电压为15V。
[0042] 编号为4的附子灵的质谱工作参数如下：母离子(m/z)为454.1;产品离子定量值 (m/z)为436.2;产品离子定性值(m/z)为436.2707，418.2600;去簇电压为89V;碰撞电压为 41eV;碰撞室射出电压为25V。
[0043] 编号为5的宋果灵的质谱工作参数如下：母离子(m/z)为358.2;产品离子定量值 (m/z)为340.2;产品离子定性值(m/z)为340.2280;去簇电压为98V;碰撞电压为35eV;碰撞 室射出电压为20V。
[0044] 编号为6的金丝桃巧的质谱工作参数如下:母离子(m/z)为487.1;产品离子定量值 (m/z)为185.1;产品离子定性值(m/z)为325.0329,185.0425;去簇电压为100V;碰撞电压为 33eV;碰撞室射出电压为10V。
[0045] 编号为7的苯甲酯次乌头原碱的质谱工作参数如下:母离子(m/z)为574.2;产品离 子定量值(m/z)为542.2;产品离子定性值(m/z)为542.2766，510.2499;去簇电压为150V;碰 撞电压为41 eV;碰撞室射出电压为15V。
[0046] 编号为8的松果菊巧的质谱工作参数如下:母离子(m/z)为809.2;产品离子定量值 (m/z)为663.2;产品离子定性值(m/z)为663.1917,501.1384;去簇电压为50V;碰撞电压为 62eV;碰撞室射出电压为15V。
[0047] 编号为9的苯甲酯乌头原碱的质谱工作参数如下:母离子(m/z)为604.3;产品离子 定量值(m/z)为572.3;产品离子定性值(m/z)为572.2868，554.2764;去簇电压为150V;碰撞 电压为49eV;碰撞室射出电压为15V。
[004引编号为10的地黄巧D的质谱工作参数如下:母离子(m/z)为709.2;产品离子定量值 (m/z)为3