大型溞测定农药悬浮剂毒性的方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及养殖技术领域，尤其设及一种大型潘测定农药悬浮剂毒性的方法。
【背景技术】
[0002] 大型潘是世界范围内广泛分布的甲壳纲枝角类无脊椎动物，它W浮游植物为食， 同时又是鱼类和大型无脊椎动物的巧料，是水生态系统中物质循环和能量流动的重要环 节。由于其分布广、繁殖快、生活周期短、易于培养和驯化，对环境中的毒物敏感且实验方法 简便，因此受到众多国家毒理学工作者的重视。现已成为一种标准试验生物，被广泛用于水 生生物毒理学的研究中。
[0003] 目前，已经广泛采用大型潘进行农药环境安全性评价的研究，但是采用大型潘作 为农药悬浮剂毒性筛选模型的研究较少，缺乏相关的研究数据评估模型的实用性和可靠 性。因此，提供一种易操作、实用性强的大型潘筛选农药悬浮剂毒性的方法尤其重要。
【发明内容】
[0004] 本发明要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种大型潘测定农药悬浮 剂毒性的方法，具有操作简便、实用性强、检测速度快，精确度高等优势。
[0005] 为解决上述技术问题，提供了一种大型潘测定农药悬浮剂毒性的方法，包括W下 步骤：
[0006] (1)将农药悬浮剂用Elemlt M4培养液溶解制成农药储备液；
[0007] (2)将所述农药储备液与Elendt M4培养液混合配制成梯度浓度的混合液，将所述 混合液做为大型潘的生活用水，持续培养48h，培养过程中，每隔2地时记录大型潘的生物效 应参数和所述混合液的理化参数；
[000引（3)根据大型潘的生物效应参数和农药储备液的理化参数计算农药对半数抑制浓 度ECsq，判断农药悬浮剂的毒性。
[0009] 上述的方法，优选的，所述步骤(2)中所述大型潘为来源于同一母系的孤雌繁殖3 代W上，出生时间小于2地的非头胎健康幼潘。
[0010] 上述的方法，优选的，在所述步骤(2)进行的过程中，所述大型潘不喂食。
[0011] 上述的方法，优选的，所述步骤（2)中所述Elendt M4培养液为空气曝气累曝气处 理24hW上的Elemlt M4培养液。
[001 ^ 上述的方法，优选的，所述Elemlt M4培养液的抑为6.0~9.0，硬度为140~250mg/ U溶解氧^3mg/L。
[0013] 上述的方法，优选的，所述步骤(2)进行的过程中，所述大型潘不离开水，转移时用 滴管转移。
[0014] 上述的方法，优选的，所述步骤(2)中，所述生物效应参数为大型潘的抑制率;所述 理化参数为混合液的水溫、pH值、溶解氧含量。判断所述大型潘抑制的标准为轻晃烧杯，潘 在15s内不游动视为活动抑制，但允许附肢微弱摆动。
[0015] 上述的方法，优选的，所述步骤(2)中，所述培养过程控制水溫为18°C~22°C、每日 光照16h、溶解氧浓度不低于3. Omg/L。
[0016] 上述的方法，优选的，所述农药悬浮剂的毒性的判断标准为:EC50> 10.0 mg a. i . /L 表示低毒，l.OOmg a.i./L<EC 己 〇<10.0mg a.i./L 表示中毒，O.lOOmg a.i./L<ECs〇< l.OOmg a.i./L表示高毒，EC5〇<0.100mg a.i./L表示剧毒。
[0017] 上述的方法，优选的，所述大型潘测定农药悬浮剂毒性的方法还设有空白对照组； 所述空白对照组WElendt M4培养液为大型潘的生活用水。所述空白对照组的受抑制率不 能超过10%则证明实验结果可信。
[0018] 与现有技术相比，本发明的优点在于：
[0019] (1)本发明提供了一种操作简便、实用性强的模式生物大型潘筛选农药悬浮剂毒 性的方法;该方法可初步判断出农药悬浮剂的毒性，速度快，精确度高。
【具体实施方式】
[0020] W下结合具体优选的实施例对本发明作进一步描述，但并不因此而限制本发明的 保护化围。
[0021 ]实施例
[0022] W下实施例中所采用的材料和仪器均为市售。
[0023] 实施例1:
[0024] (1)农药储备液的配制：
[00巧]称取21%嚷虫嗦悬浮剂1.1905旨，用61611扣14培养液溶解并定容至10〇1^容量瓶 中，配制成浓度为2.50X 103mg a.i ./L的农药储备液。
[00%] (2)试验液的配制：
[0027] Elemlt M4培养液的制备:将Elendt M4培养液进行空气曝气累曝气处理24hW上， 检测Elemlt M4培养液的pH为7.18，硬度为175mg/L，溶解氧为7.83。
[002引实验组:依次移取储备液0.100血、0.180血、0.324mL、0.583mL、1.050血步骤（1)中 的农药储备液分别用Elemlt M4培养液定容至250血容量瓶中，得到浓度为1 .OOmg a. i ./L、 l.SOmg a.i./L、3.24mg a.i./L、5.83mg a.i./L、10.5mg a.i./L的试验液。
[0029] 空白对照组(CKi):WElerKlt Μ婚养液作为试验液。
[0030] (3)染毒
[0031] 挑选来源于同一母系的孤雌繁殖6代，出生时间在化~24h的非头胎健康幼潘，随 机加入到上述步骤(2)的试验液中。每烧杯5只潘，进行培养，培养过程控制水溫为20°C、每 日光照下培养16h，黑暗培养化、溶解氧浓度不低于3.Omg/L。大型潘在染毒过程中不喂食。
[0032] 在染毒开始后，于第24h、4她测定并记录烧杯中试验液的溫度、pH值、溶氧量等。于 染毒后2地、4她观察并记录大型潘的抑制数。判断所述大型潘抑制的标准为轻晃烧杯，潘在 15s内不游动视为活动抑制，但允许附肢微弱摆动。
[0033] 表1为21%嚷虫嗦悬浮剂对大型潘急性毒性活动抑制试验数据记录结果。表2为试 验期间各浓度组的水溫，pH值，溶解氧的检测结果。
[0034] 表1:21 %嚷虫嗦悬浮剂对大型潘急性毒性试验数据记录表
[0035]
[0036] 在处理过程中，大型潘出现了游动不积极，原地打转，附肢和触角微弱摆动等生物 抑制效应，浓度越高时间越久，症状也会更加的严重。
[0037] 表2:水缸中生活用水的水溫、pH值、溶解氧的检测结果表
[00；3 引
[0039]
[0040] 实验组2至4的化、溫度、溶解氧含量等均在实验组1和实验组5组成的范围内。
[0041] (4)数据处理
[0042] 采用统计软件SPSS12.0，W处理浓度的对数值为自变量x，W(校正)抑制率的机率 值为因变量y，建立毒力回归方程。计算21 %嚷虫嗦悬浮剂对大型潘的的抑制浓度ECso和 95 %置信限，具体计算结果参见表3。
[0043] 表3:21 %嚷虫嗦悬浮剂水分散粒剂对大型潘急性毒性试验结果表
[0044]
[0045] (5)结果评价
[0046] 根据ECsg值判断农药毒级。毒性分级标准为：低毒化C5G> 10 . Omg a. i . /L)，中毒 (l.OOmg a.i./L<EC已〇<10.0mg a.i./L)，高毒（O.lOOmg a.i./L<EC已〇<