一种利莫那班的快速检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于分析化学检测领域，涉及一种利莫那班快速检测方法。
【背景技术】
[0002] 近年来，随着人们生活水平的提高，饮食结构不合理、缺乏运动等因素引起的肥胖 问题日益严重。世界卫生组织数据显示:2014年18岁及以上的成年人中有39%的人超重，13% 的人肥胖。肥胖可诱发或加重糖尿病、脂肪肝、心脑血管系统疾病、睡眠呼吸暂停综合症、肌 肉骨骼疾患以及某些癌症等，已成为影响人类健康的十大主要威胁之一。随着人们对减肥 的迫切需求，各种减肥产品也日益增多，鱼龙混杂。化学药物快速减肥通常会带来明显的不 良反应，而中成药、保健食品和食品大部分来源于天然物质，被认为具有较高的安全性，在 减肥市场中广受消费者青睐，但其存在起效慢或效果不明显的缺点。为谋取高额利益，部分 不法分子利用人们急于见效的心理，在其中非法添加具有减肥作用的化学药品，消费者在 不知情的情况下长期服用会使健康受到不同程度的危害，严重者甚至可导致死亡。
[0003] 利莫那班是(rimonabant)法国Sanofi-Aventis公司研发的首个用于肥胖症治疗 的大麻素 1型受体(CB1)拮抗剂，2006年7月首次在英国上市，目前已被40多个国家批准，在 20多个国家上市，能显著地降低体重、缩小腰围，减少心血管疾病等危险因素，而且还可以 改善血脂和胰岛素抵抗以及代谢综合征等。尽管利莫那班对于肥胖的治疗颇具效果，但近 些年来所报道的不良反应如癫痫发作、抑郁、焦虑、失眠、攻击性和自杀倾向等神经和精神 方面的副作用也日益受到关注。由于利莫那班治疗减肥的效果显著且便宜易得，具有被非 法添加到减肥类中成药和保健食品中的巨大风险，因此亟需开发快速、可靠的检测方法，以 保障人民群众的饮食用药安全。目前报道的利莫那班的检测方法主要为高效液相色谱法和 高效液相色谱-质谱联用法，存在检测周期长、过程繁琐、检测成本高、对操作人员的要求高 等问题，不利于在基层部门广泛开展，无法满足现场快速监督检验工作的需求。本发明针对 目前市场上的大部分减肥类中成药、保健食品和食品提供一种准确快速的利莫那班检测方 法，以满足检验及监管的需要。
【发明内容】
[0004] 本发明针对现有技术中存在的上述缺点，提供一种利莫那班的快速检测方法，具 有分析成本低、不需要使用贵重分析仪器，专属性强，灵敏度高，检验结果正确率高等优点， 适用于减肥类中成药、保健食品和食品中是否添加利莫那班的现场快速检测。
[0005] 为实现上述目的本发明采取如下技术方案： 一种利莫那班的快速检测方法，步骤为： 1) 向待测样品中加入碱化液，碱化液加入量为3mL/g待测样品，振摇2~4min，再加入与 碱化液等体积的萃取液，振摇2~4min，静置分层3~5min，取上层溶液； 2) 向步骤1)上层溶液中按体积比1:1加入酸化液，振摇2~4min，静置3~5min，观察溶 液中是否生成白色絮状不溶物:如果溶液中没有生成白色絮状不溶物，则待测样品不含有 利莫那班;如果溶液中有白色絮状不溶物生成，则继续采用步骤3)进行后续处理； 3)取步骤2)含有白色絮状不溶物的溶液，3000r/min离心3~5min，取离心后白色不溶 物，滴加复溶液至白色不溶物完全溶解后，再滴加3~5滴检测液，若溶液中产生桔红色沉淀 为待测样品中含有利莫那班，若溶液中无桔红色沉淀生成则待测样品中不含利莫那班。
[0006] 步骤1)中，所述的碱化液为强碱-水溶液，其中强碱浓度〇. 4~0.6mo 1 /L，所述的强 碱为氢氧化钠和氢氧化钾中一种或二者混合，优选〇.5mol/L的氢氧化钠-水溶液。
[0007] 步骤1)中，所述的萃取液为非极性有机溶剂，优选石油醚、正己烷和环己烷中的一 种或几种混合。
[0008] 步骤2)中，所述的酸化液为无机酸的水溶液，浓度为0.9~1. lmol/L，所述的无机 酸为盐酸、硫酸和磷酸的一种或几种混合;优选lmol/L的盐酸水溶液。
[0009] 步骤3)中，所述的复溶液为低级醇溶液，所述的低级醇为甲醇和乙醇的一种或二 者混合;优选乙醇。
[0010]步骤3)中，所述的检测液为碘化铋钾试液，所述碘化铋钾试液配制方法为:取次硝 酸铋0.85g，加冰醋酸10ml和水40ml充分溶解后，再加质量分数4%的碘化钾水溶液20ml，混 合均匀，即得。
[0011] 利莫那班化学名为5-(4-氯苯基)-1-(2，4_二氯苯基)-4-甲基-N-(l-哌啶基)-1Η-P比挫-3_甲酰胺，分子式为C22H21CI3N4O，分子量为463.79，结构式如式（I)所不：
利莫那班化学结构中具有吡唑和哌啶等含氮杂环结构，在碱性条件下呈游离生物碱， 不溶于水而溶于有机溶剂;在酸性条件下氮原子能接受质子带正电荷、呈游离态的阳离子， 极性增大，既不溶于石油醚等非极性有机溶剂也不溶于水，但易溶于甲醇等极性较大的有 机溶剂。利莫那班在酸性条件下，吡唑环和哌啶环上的碱性氮原子可与生物碱鉴别试剂反 应，如与碘化铋钾试液反应，生成桔红色沉淀，现象明显。但中成药、保健食品和食品中成分 复杂，有大量有色物质(如植物色素等)及生物碱类成分，他们中有些能溶于有机溶剂，而有 些则可溶于水，如不分离，则会严重干扰快速检测方法的沉淀或显色反应的观察，难以得出 正确的判断结果。
[0012]本发明采用稀的强碱-水溶液为碱化液，使利莫那班呈游离生物碱，增大其在有机 溶剂的溶解度，同时可以使待测样品分散均匀，提高提取效率。萃取液选择与碱化液不互溶 的非极性有机溶剂，在保证提取效率增强检测灵敏度的同时可显著降低水溶性植物色素的 干扰。用无机酸-水溶液为酸化液使利莫那班母核质子化，降低其在萃取液中的溶解度，生 成既不溶于萃取液也不溶于酸化液的不溶物。该不溶物为白色絮状且介于萃取液层与酸化 液层中间，离心后呈白色饼状，且易溶于甲醇等极性有机溶剂，以此特征专属性好，特异性 强，可以判断初步是否含利莫那班。进一步，取白色不溶物的低级醇溶液，利用碘化铋钾试 液进行检测，利莫那班可与之形成桔红色不溶物，从而进一步确认是否为利莫那班。在碱化 分散、萃取分离和酸化沉淀过程中三次利用不同物质的溶解性差异分离除去干扰物，通过 两个不同机理的沉淀反应判断待测样品中是否含有利莫那班。
[0013] 本发明与现有技术相比，有益效果如下： 1)待测样品通过碱化分散、萃取分离、酸化沉淀三步即可根据沉淀反应初步判断样品 中是否含有利莫那班，对可疑的的阳性样品利用生物碱沉淀反应进一步确认，即可准确判 断，且所用碱化液、萃取液、酸化液、复溶液、检测液均为普通的化学试剂，操作简便，分析成 本低。
[0014] 2)待测样品经碱化处理可分散均匀且增大被测成分在萃取液中的溶解度;萃取液 选择非极性有机溶剂可排除水溶性干扰物的影响；萃取液酸化后使被测成分沉淀出来，消 除了脂溶性色素及酸溶性生物碱的干扰，专属性强;对沉淀复溶后利用生物碱鉴别试剂进 一步确认，对样品中是否有利莫那班做出更准确地判断。
[0015] 3)本发明的检测方法中，所用碱化液、萃取液、酸化液、复溶液、检测液的专属性 强，通过碱化分散、萃取分离和酸化沉淀过程中三次利用不同物质的溶解性差异分离除去 干扰物，通过两个不同机理的沉淀反应确证待测样品中是否含有利莫那班。方法反应灵敏 度高、检测结果正确率高、反应迅速，现象明显，适用于现场快速检测。
【具体实施方式】
[0016] 下面结合具体实施例进一步描述本发明，在不脱离本发明上述技术思想情况下， 根据本领域普通技术知识和惯用手段做出的各种替换或变更，均包括在本发明的范围内。 [0017]本发明快速检测方法验证： 萃取液选择原则：（1)与碱化液(水)不互溶，便于目标物的萃取分离；（2)对利莫那班有 适宜溶解度，溶解度越大，沉淀反应越明显；（3)对利莫那班的无机酸盐溶解度尽可能低，溶 解度越低灵敏度越高； 复溶液选择原则：（1)对利莫那班的无机酸盐溶解性好;（2)与碘化铋钾试液(水)互溶。
[0018] 本发明参考《中国药典》2015年版溶解度试验法考察了利莫那班及其盐酸盐在以 不同溶剂中的溶解性。结果见下表1: 丰1太Γ3、換念11 fth、換你
实验结果发现:石油醚等非极性有机溶剂符合萃取液的选择原则；乙酸乙酯和二氯甲 烷等中等极性的有机溶剂虽然也符合萃取液的选择原则，但由于对盐酸利莫那班微溶，会 导致检测灵敏度降低，不适合于含利莫那班量低的样品检测；甲醇和乙醇符合复溶液选择 原则。
[0019] 实施例1:茶剂的检测 试剂配制:碱化液为0.5mol/L氢氧化钠-水溶液;