一种葡萄中赤霉素残留的检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种葡萄中植物生长调节剂残留的检测方法，具体涉及一种葡萄中赤 霉素残留的检测方法。
【背景技术】
[0002] 赤霉素具有能加速植物的生长发育，促进细胞、茎伸长，扩大叶片;促进单性结实， 使果实提早成熟，增加产量;打破种子休眠，促进发芽;改变雌雄花比率，影响开花时间，减 少花、果脱落等特点，是农业生产中用途广泛，用量最大的一种植物生长调节剂。近年来一 些种植者盲目追求高产，存在过度施用赤霉素现象，已知的赤霉素种类至少有38种，作为大 环内酯抗生素农药时，其主要成分是ga 3，也就是赤霉酸，我国制订了《出口水果中赤霉素残 留量的测定液相色谱质谱/质谱法》（SN/T 0350-2012)国家标准检测方法，但在《食品安全 国家标准食品中农药最大残留限量》(GB 2763-2014)未规定其限量值，而美国、日本等国规 定蔬菜、水果中赤霉素最高残留限量为〇.2mg/kg。
[0003] 目前，赤霉素残留分析一般采用荧光检测技术，其样品前处理常用液液萃取、薄层 分离、柱层层析法，这些方法操作繁琐，且需使用大量有机溶剂。再则，现有技术中赤霉素的 提取剂一般为丙酮，甲醇，在样品绞碎后呈浆状，粘度大影响过滤的速度，回收率偏低。因 此，建立一种高回收率、简便、快速、准确地测定葡萄中赤霉素残留的方法，对于促进食品的 安全性有着重要的指导意义。
【发明内容】
[0004] 本发明所要解决的技术问题是，提供一种高回收率、简便、快速、准确地检测葡萄 中赤霉素残留的方法。
[0005] 本发明解决其技术问题采用的技术方案是，一种葡萄中赤霉素残留的检测方法， 包括以下步骤：
[0006] (1)样品前处理:将待测样品经缩分后，将其切碎充分混匀，再粉碎制成待测样，然 后加入乙腈-1.5%醋酸提取液，无水硫酸镁，高速匀浆、高速离心，静置，接着取上清液加入 C18、PSA和无水硫酸镁，漩涡混匀，静置，过有机微孔滤膜，待测；
[0007] (2)基质标准溶液的配制:将空白样品按照样品预处理，用所得的样品溶液将赤霉 素标准液逐级稀释得到的浓度为5、10、20、50、lOOyg/L的标准工作液。
[0008] (3)液相色谱-质谱/质谱测定:将标准溶液按浓度由低到高注入配有液相色谱-质 谱/质谱仪进行测定，以定量离子峰面积-浓度作图，得到标准曲线回归方程;然后在相同条 件下将前处理的样品液注入液相色谱-质谱/质谱仪进行测定，采用外标法计算待测赤霉素 残留量的测定值。
[0009] 进一步，步骤（1)中，将待测样品经缩分后，将其切碎充分混匀，再粉碎制成待测 样，然后称取10. 〇〇~10. 〇5g待测样加入10mL乙腈-1.5 %醋酸提取液，无水硫酸镁4g，高速 勾衆lmin后，于10000r/min下离心5min，静置片亥丨」，吸取lmL上清液，加入25mg Cis、25mgPSA 和150mg无水硫酸镁后，漩涡混匀lmin，静置，过0.22μηι有机微孔滤膜，待测。
[0010] 进一步，步骤(3)中，所述液相色谱-质谱/质谱分析条件为:色谱条件色谱柱:HSS T3柱lOOmmX 2 · 1mm，1 ·8μηι，；柱温:40°C;流动相：乙腈与水的体积比为35/65，流速:0 · 4mL/ min;进样量:5yL;
[0011] 质谱条件：电喷雾离子源；扫描方式：负离子模式;检测方式：多反应监测；离子源 温度：150°C;去溶剂气温度:350°C;去溶剂气和锥孔气均为高纯氮气，流速分别为650L/h和 50L/h;碰撞气:高纯氩气，流速0.14mL/min。
[0012] 基质效应主要由基质成分和目标化合物在电喷雾离子源进行离子化时相互竞争 造成，包括基质增强效应和基质抑制效应。在液相色谱-质谱的定性定量分析中，基质效应 影响仪器的灵敏度和重复性，是影响准确定性及定量的重要因素。因此，在建立检测方法时 应考虑基质效应的影响并采取措施进行消除。本发明采用同一来源的空白样品配制标准样 品，以抵消基质效应对方法精密度及结果准确度造成的影响。
[0013]本发明采用QuEChERS前处理方法结合液相色谱-质谱/质谱法建立了葡萄中赤霉 素残留的快速检测，采用乙腈为提取剂，PSA吸附剂和ODS吸附剂与无水硫酸镁组合的提取、 净化方法，不仅可除去提取液中水分、色素、蛋白质、脂肪、腊质等干扰物，而且有助于去除 对色谱柱性能有影响的杂质，延长色谱柱使用寿命。提取液净化后不需浓缩处理，过滤膜后 直接进样检测，操作简便、快速，大大简化了样品前处理步骤，节约了时间。采用液相色谱质 谱/质谱检测结果准确可靠，灵敏度高，方法的准确度和精密度均符合残留分析的要求。
[0014] 实验证明，本发明回收率均达90 %以上，相对标准偏差RSD%低于10 %，在5~100μ g/L范围内线性良好，相关系数达到0.99，方法最低检出限0.004yg/kg，完全满足农药残留 的检测要求。
【附图说明】
[0015] 图1为赤霉素的线性范围。
【具体实施方式】
[0016] 下面结合实施例和附图对本发明作进一步说明。
[0017] 1、仪器与试剂
[0018] UPLC-MS/MS XEVO TQ超高效液相色谱-串联质谱仪(美国Waters公司）；立式大容 量高速离心机（日本Hitachi公司）;Milli-Q全自动超纯水制水机(美国Millipore公司）、天 平、漩涡混匀器。乙腈（HPLC级，美国Fi sher Sci ent if ic公司）；乙酸（HPLC级，美国 J·T·Baker公司）；C18吸附剂（30~40μπι，天津博纳艾杰尔有限公司）；PSA(粒径范围40~60μ m，天津博纳艾杰尔有限公司）；无水硫酸镁、氯化钠(优级纯，天津市科密欧化学试剂有限公 司；氯化钠140°C烘4~5h;实验用水为超纯水(经Milli-Q超纯水机制备）。赤霉素标样为 Sigma公司产品，根据需要用甲醇配成合适的标准储备溶液，于-20°C冰箱中保存。
[0019] 实施例1:葡萄中赤霉素残留的检测
[0020] 1、样品预处理
[0021] 取代表性的待测样品，经缩分后，将其切碎，充分混匀放入食品加工器粉碎，均匀 分散，制成待测样，备