一种纤维蛋白原免疫比浊法检测试剂盒的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及临床体外检测试剂技术领域，特别涉及一种纤维蛋白原免疫比浊法检 测试剂盒。
【背景技术】
[0002] 纤维蛋白原是一种由肝脏合成的具有凝血功能的蛋白质，是纤维蛋白的前体。分 子量340000,半衰期4~6日。血浆中参考值2~4克/升。纤维蛋白原由α、β、γ三对不同多肽 链所组成，多肽链间以二硫键相连。在凝血酶作用下，α链与β链分别释放出Α肽与Β肽，生成 纤维蛋白单体。在此过程中，由于释放了酸性多肽，负电性降低，单体易于聚合成纤维蛋白 多聚体。但此时单体之间借氢键与疏水键相连，尚可溶于稀酸和尿素溶液中。进一步在Ca+2 与活化的xm因子作用下，单体之间以共价键相连，则变成稳定的不溶性纤维蛋白凝块，完 成凝血过程。肝功能严重障碍或先天性缺乏，均可使血浆纤维蛋白原浓度下降，严重时可有 出血倾向。
[0003] 纤维蛋白原与肝脏疾病:纤维蛋白原系肝脏合成，主要分布在血浆，亦存在于血小 板和巨核细胞。正常血浆浓度为1.5~3.5g/L，因此当肝脏严重受损，使肝脏合成纤维蛋白 原功能发生障碍，则血浆中纤维蛋白原浓度降低。纤维蛋白原是肝脏合成的一种血浆糖蛋 白。可参与血栓及冠状动脉的形成和发展，是反映血栓状态一个指标，也是急性冠状动脉事 件的独立预报因子之一。纤维蛋白原升高提示机体纤溶活性降低，促血栓形成。
[0004] 纤维蛋白原与肾病综合征（NS) :NS患者的凝血因子改变，以纤维蛋白原水平增 高最为明显。纤维蛋白原水平增高可达l〇g/L，这是由于合成增加的结果，这种增高与其从 尿中丢失的量成比例，但纤维蛋白原的分解代谢率则正常。NS患者的纤维蛋白原和胆固醇 水平有显著相关性，而且两者与血清白蛋白水平呈负相关。
[0005] 纤维蛋白原与粥样硬化:纤维蛋白原和纤维素与粥样斑块形成的关系极为密切。 已知纤维蛋白溶解机制受到多种因素影响，例如吸烟、糖尿病，尤其是高血清甘油三酯都能 引起血浆纤维酶原激活物抑制剂升高，从而降低了纤溶酶原的合成。血液粘稠度比较高，这 些均有利于纤维素的形成。纤维蛋白原是一种急性时相蛋白，作为凝血因子I由血液进入动 脉壁内，在凝血酶作用下转变为纤维蛋白单体继发交联为纤维蛋白，可直接破坏内皮细胞 吸附在红细胞表面，使动脉血栓发生率增加，并促进粥样斑快进展。另外血浆纤维蛋白原可 沉积于血管壁，加速动脉粥样硬化，人们已发现动脉粥样硬化的斑块中纤维蛋白凝聚物的 量组疾病纤维蛋白原含量均增高，并都具有血液粘度增高。动脉粥样硬化甚者阻塞的特征。
[0006] 纤维蛋白原与心脑血管疾病:对急性缺血综合征中血栓的研究表明，血浆纤维蛋 白原水平是独立的危险因素，有冠状动脉阻塞病的患者血浆中纤维蛋白原水平较高，心肌 梗死的范围也与纤维蛋白原增加程度密切相关。有不稳定心绞痛的病人，在其发生心肌梗 死之前，往往有血浆纤维蛋白原水平升高现象。在心肌梗死病程中，再梗死多发生在纤维蛋 白原水平超过7g/L的患者。
[0007] 纤维蛋白原与血液流变学:发现纤维蛋白原与全血粘度、血浆粘度、血沉及血小板 聚集之间呈显著正相关，提示血浆纤维蛋白原含量升高，可使血液粘度增高。红细咆聚集增 高，血小板聚集增高，从而使血液处于高凝状态促进血栓形成。血浆纤维蛋白原含量升高因 其分子量大。浓度高，又具有聚合作用，是除红细胞外使血液粘度增高的重要因素；因此，血 浆纤维蛋白原含量在判断疾病的发生发展上具有十分重要的意义。 纤维蛋白原与其它因素:影响纤维蛋白原水平的其它因素较多，如遗传倾向性、年龄增 长、高脂血症、吸烟、原发性高血压、肥胖症、口服避孕药及妊娠期等，均是血浆纤维蛋白原 升尚的危险因素。
[0008] 纤维蛋白原免疫比浊法检测试剂盒基于当样本与试剂混合，样本中的Fb特异性地 与抗体反应形成不溶性的抗原-抗体复合物，引起浊度增加，在340nm波长下检测其浊度的 变化，变化程度与样本中Fb的浓度成正比。该方法是一种无需预处理样本，技术和设备要求 不高，而精密度和特异性更高的分析方法。由于该方法不需要昂贵的设备，可以实现自动 化，且可测定大量标本，因此受到临床广泛推广。但是普通的纤维蛋白原免疫比浊法检测试 剂稳定性不好，灵敏度也不高，因而限制了其在临床上的推广应用。
【发明内容】
[0009] 针对于现有技术存在的问题，本发明提供了一种纤维蛋白原免疫比浊法检测试剂 盒，该试剂盒与常规的试剂盒相比，稳定性比常规的检测试剂盒要好，分析灵敏度高，有利 于试剂在临床上的推广应用。
[0010]本发明是通过以下措施实现的： 一种纤维蛋白原免疫比浊法检测试剂盒，其特征在于，它包含试剂R1、试剂R2和校准 品，其中试剂R1组成为：100mm〇l/L pH6.8 Tris缓冲液、0.1%叠氮钠、0.1%-2%二氧化硅包覆 的磁性纳米颗粒;试剂R2组成为：100mm〇l/L pH6.8 Tris缓冲液、30ml/L羊抗人Fb抗体、20-40g/L 牛血清白蛋白、0.05% Kathon-CG。
[0011 ] 所述二氧化娃包覆的磁性纳米颗粒为Fe3〇4/Si〇2复合纳米粒子，粒径为20_50nm。
[0012] 所述试剂R1和试剂R2在使用时的比例为R1 :R2=3:1。
[0013] 本发明所使用的二氧化硅包覆的磁性纳米颗粒是采用以下方法制备的： 采用多元醇法制备Fe304纳米粒子。取一定的乙酰丙酮铁和三甘醇加入到回流加热反 应装置中，在磁力搅拌和Ar气保护的条件下，将装置缓慢加热至沸腾，并保持回流一段时 间。冷却后向反应溶液中加入乙酸乙酯使生成的四氧化三铁纳米粒子产生絮凝，磁性分离 黑色产物，清洗数次，分散到乙醇中，即得到稳定的Fe 304纳米粒子乙醇胶体溶液。之后将所 得Fe3〇4纳米粒子采用Stober水解法制得Si〇2包覆的Fe3〇4纳米粒子。所得Fe3〇4/Si〇2复合纳 米粒子的粒径为20_50nm〇
[0014] 本发明所使用的校准品为久峰润达生物技术有限公司生产的Fb校准品。
[0015] 本发明的试剂盒在具有双试剂功能的自动生化分析仪上进行，其具体使用方法见 图4,加入生理盐水、样本或校准品5μ1，之后再加入R1试剂225μ1预孵育5min后读取吸光度 A1，之后再加入75μ1的试剂R2反应5min后，读取吸光度A2，并计算Δ A。
[0016] 本发明的有益效果： 本发明提供的纤维蛋白原免疫比浊法检测试剂盒，通过在试剂R1中加入二氧化硅包覆 的磁性纳米颗粒，该磁性纳米颗粒在静电吸附的作用下与羊抗人Fb抗体结合，从而使抗体 在磁性纳米颗粒上形成凝集，大大的提高了试剂的分析灵敏度。同时在试剂R2中加入牛血 清白蛋白，解决了抗体在稀溶液中不稳定这一难题，在试验中它能使抗体稳定，且相对地中 性，但不会影响抗体的性质，而Kathon-CG是一种新型高效环保型广谱杀菌剂、防腐剂，在该 试剂盒中使用Kathon-CG有效解决了BSA长时间保存易发霉的缺点，因此BSA与Kathon-CG共 同作用有效地增强了试剂盒的稳定性，却不会对试剂的准确度产生影响，有利于该试剂在 市场中进一步的推广。
【附图说明】
[0017] 图1实施例2准确度验证实验检测结果与对照组检测结果相关性； 图2实施例3准确度验证实验检测结果与对照组检测结果相关性；