一种快速检测糖化血红蛋白的试纸条的制作方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种快速定量检测血液中糖化血红蛋白的试纸条，采用本试纸条，仅需1ul末梢全血或静脉全血就可以测试血液中糖化血红蛋白含量，样本无需任何处理，操作简单，方便测试。
【背景技术】
[0002]糖化血红蛋白作为反映长期血糖水平的金标准，可以反映最近2?3个月的平均血糖水平。2002年美国糖尿病协会已明确规定应定期检测糖化血红蛋白，将其作为监测糖尿病血糖控制的金标准。目前检测糖化血红蛋白的方法主要分为两大类:一类是基于糖化血红蛋白和血红蛋白的电荷不同，如离子交换层析法、HPLC法、毛细管电泳法；另一类是基于血红蛋白上糖化基团的结构特点，如亲和层析法、免疫法和酶法等。如硼酸亲和层析法，是通过游离的硼酸基团与血红蛋白的顺位二醇基结合，从而达到分离糖化血红蛋白和血红蛋白的目的。该方法不受大部分血红蛋白变异体和降解产物的干扰，目前在临床上得到广泛的应用。但是该类方法采用间-氨基苯硼酸琼脂糖层析柱，操作比较复杂，洗脱时间较长。因此，临床上急需寻求一种操作简单、测试时间短的糖化血红蛋白检测方法。
【发明内容】
[0003]本发明的目的在于，针对上述现有技术的不足，提供一种快速定量检测末梢全血或者静脉全血中糖化血红蛋白的试纸条，采用硼酸亲和层析试纸条技术，只需要微量的全血样本，可快速检测糖化血红蛋白的含量，具有操作简单、检测快速和方便测试的优点。
[0004]为达上述目的，本发明所采用的技术方案是:一种快速检测糖化血红蛋白的试纸条，该试纸条是取等长的样品垫、基板、反应膜及吸水纸，且样品垫的宽比基板宽2mm，反应膜宽为10mm，该基板上均匀分布有孔，孔径为3mm;将基板置于反应膜一侧，且基板的宽方向与反应膜对齐;再将样品垫粘贴重叠在基板上，并使样品垫与反应膜的一侧重叠2mm;然后将吸水纸对应粘贴在反应膜的另一侧，并与反应膜重叠3mm，再依基板的长方向裁切成数条6mm长的试条，以使每一试条的基板上具有一孔，即得。
[0005]其中，上述样品垫为醋酸纤维素膜。
[000?]上述基板由厚度为0.35mm的聚酯薄膜制成；较佳的，所述聚酯薄膜由聚对苯二甲酸乙二酯、聚氯乙烯或聚乙烯制成。
[0007]上述反应膜是取反应膜材料，将其浸泡在体积比为1-6:1的浓硫酸和浓硝酸的混合溶液中，于40-80°C处理0.5-4h;取出反应膜材料浸泡于纯化水中，并调节pH值为6.5;取出反应膜材料，置于含有5mM的EDC和5mM的NHS的混合溶液1mL中反应0.5h，再加入5-40mM的氨基苯硼酸，反应0.5-2h，以将硼酸基团修饰至反应膜材料表面;取出反应膜材料，然后浸泡于含有纯化水和5-40mM甘氨酸或牛血清蛋白的溶液中进行封闭；取出反应膜材料烘干，即得。该反应膜材料为硝酸纤维素膜、尼龙膜、羧化纤维素膜或纯纤维素膜中的一种。较佳的，所述反应膜材料为聚丙烯纤维素膜或聚乙烯纤维膜。
[0008]上述吸水纸为市购产品。
[0009]检测时，只需将1ul末梢全血或静脉全血滴于反应膜上，先加入溶血剂，再加入洗脱液，通过测定450nm的光反射强度，即可测定糖化血红蛋白的百分比含量。其中，上述溶血剂和洗脱液为血液检测时使用的常规试剂，具体地，该溶血剂由浓度为0.1M的磷酸缓冲液(pH=7.4)和0.1%的非离子表面活性剂Triton X-100组成；该洗脱液为pH值为8.4的山梨糖醇缓冲液。
[0010]本发明的检测糖化血红蛋白的试纸条，仅需1ul末梢全血或静脉全血就可以测试血液中糖化血红蛋白含量，样本无需任何处理，操作简单，方便测试，且试纸条制备方法简单，易于大规模生产。
【附图说明】
[0011]图1是本发明基板示意图。
[0012]图2是本发明糖化血红蛋白试纸条的示意图。
【具体实施方式】
[0013]本发明是一种利用硼酸亲和层析的方法检测末梢全血或者静脉全血中糖化血红蛋白的试纸条，利用溶血剂对红细胞破解后测定血红蛋白的含量，同时通过洗脱液将糖化血红蛋白进行层析，使糖化血红蛋白固定在反应膜表面，从而达到分离血红蛋白和糖化血红蛋白的目的，通过测定450nm的光反射强度，即可测定糖化血红蛋白的百分比含量。
[0014]本发明提及的糖化血红蛋白试纸条制备过程如下，结合参见图2:
1.取醋酸纤维素膜，裁切成长为240mm、宽为9mm，作为样品垫201;
2.取厚度为0.35mm的聚酯薄膜，将聚酯薄膜裁切成长为240_、宽为7_，并对聚酯薄膜进行冲孔，以作为基板202;结合参见图1，基板202上均匀分布有孔2021，孔径为3mm;该聚酯薄膜选自聚对苯二甲酸乙二酯(PET)、聚氯乙烯或聚乙烯；
3.取反应膜材料，将其浸泡在体积比为1-6:1的浓硫酸和浓硝酸的混合溶液中于40-80°C处理0.5-4h;取出反应膜材料，浸泡于纯化水中，并加入强碱氢氧化钠溶液将pH值调整至6.5，去除溶液，加入含有5mM的EDC和5mM的NHS的混合溶液1mL，反应0.5h，再加入5_40mM的氨基苯硼酸，反应0.5-2h，将硼酸基团修饰至反应膜材料表面，取出反应膜材料，然后浸泡于含有纯化水和5-40mM甘氨酸/牛血清蛋白的溶液中进行封闭，取出反应膜材料，烘干，裁切成长为240mm、宽为10mm，以作为反应膜203。该反应膜材料为硝酸纤维素膜、尼龙膜、羧化纤维素膜或纯纤维素膜中的一种，优选聚丙烯纤维素膜或聚乙烯纤维膜；
4.取市购吸水纸裁切成长为240mm、宽7mm，以作为吸水纸204;
5.将基板202置于反应膜203—侧，且基板的宽方向与反应膜对齐;再将样品垫201粘贴重叠在基板202上，并使样品垫201与反应膜203的一侧重叠2mm;然后将吸水纸204对应粘贴在反应膜203的另一侧，并与反应膜重叠3_。将组装好的材料依基板的长方向裁切成数条6mm长的试条(如图2中箭头所指的虚线，即为一裁切线)，以使每一试条的基板202上具有一孔2021，以制作成检测糖化血化蛋白的试纸条。
[0015]使用时，取其中任一试条，滴1ul末梢全血或静脉全血于反应膜上，依次加入溶血剂和洗脱液即可。
[0016]实施例1
取醋酸纤维素膜，裁切成长为240mm、宽为9mm，作为样品垫201;取厚度