采用高效液相色谱法检测柑橘红2号染料的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于食品检验领域，涉及食品添加剂使用卫生标准的分析测定方法。具体 涉及果汁和果蔬中柑橘红2号染料的测定方法。
【背景技术】
[0002] 柑橘红2号染料为橘红色粉末，不溶于水，溶于芳烃类溶剂，作为染色剂增加 甜橙（主要是脐橙）果实的红色色泽与着色均匀度，提高果实的市场竞争力。但由于其可 能的致癌性，柑橘红2号色素被欧盟和日本等国家和地区所禁用，美国国家食品药品管 理局（FDA)明确规定经处理过的果实全果（以干重计）中柑橘红2号染料最大残留量不得 超过2 mg L、
[0003] 国家标准GB 2760 -2007《食品添加剂使用卫生标准》对柑橘红2号染料能否用 于柑橘类水果增色未做出规定，也未制定柑橘水果中柑橘红2号残留量标准。目前国内 还没有制定出标准的检测方法。因此有必要建立果汁、果蔬中柑橘红2号染料的检测方法。 本工作对果汁、果蔬中柑橘红2号染料的测定进行试验，对样品提取溶剂、色谱条件进行 筛选，建立了高效液相色谱法测定果汁、果蔬中柑橘红2号染料含量的方法。
【发明内容】
[0004] 高效液相色谱是利用高压输液泵驱使流动相通过装填固定相的色谱柱，由于混合 物中各组分在性质和结构上有差异，与固定相发生作用的大小也有差异，因此在同一推动 力的作用下，不同组分在固定相中的滞留时间不同，从而按照先后顺序从固定相中流出，达 到对物质进行分离的效果，并进行定量分析和定性分析的方法。
[0005] 本发明包括以下步骤： (1)样品预处理 称取试样5.00 g于50 mL具塞离心管中，加入丙酮-正己烧（1 :3)混合溶剂20mL， 置水平往复振荡器振荡15 min (若样品为黏稠的果汁或果蔬，振荡前先均浆lmin，加水 至30 mL)，以4 000 r .π?η1转速离心6 min，吸取正己烷层至30 mL吹氮管。离心管中 再加入正己烷15 mL，重复提取一次，合并提取液于吹氮管中，在氮吹仪中于45 °C蒸发至 干。加入1 mL甲酸-乙腈正己烷饱和溶液溶解残渣，涡旋混合1 min，超声1 min，加入 正己烧0. 5 mL，润旋混合1 min,移至1. 5 mL具塞离心管中，以10000 r ·η?η 1转速离心 8 min，弃去正己烷层，离心管中再加入正己烷0 .5 mL重复提取一次，下层清液用0.22 μm滤膜过滤，在仪器工作条件下进行测定。
[0006] (2)用超高效液相色谱检测，记录色谱图，内标峰高（Hi)与柑橘红2号染料峰高 (Hs)，用标准曲线换算浓度。
[0007] 前述的柑橘红2号染料的测定方法，其特征在于该方法是以色谱柱Agilent TC C1S，波长为508nm，流速为l.OmL /min，流动相为乙腈：甲酸=92 : 8,柱温为40°C，进样量为 10 μ L〇
[0008] 本发明的有益效果是：本发明应用高效液相色谱法检测柑橘红2号染料具有较好 的准确度与精密度。
【附图说明】
[0009] 图1为柑橘红2号标准溶液及加标果汁样品溶液的色谱图。
【具体实施方式】
[0010] 下面将详细说明本发明的【具体实施方式】： 1.仪器与试剂： Waters Acquity超高效液相色谱仪，配二极管阵列检测器。
[0011] 甲酸溶液：移取1 mL甲酸用水定容至1 L,过0 . 22μηι滤膜备用。
[0012] 甲酸-乙腈正己烷饱和溶液：甲酸-乙腈（0. 5 +99. 5)加正己烷充分混合至饱和， 容器上层清晰可见一层正己烷层，静置分层，收集下层溶液。
[0013] 柑橘红2号标准储备溶液：称取柑橘红2号标准品10. 0 mg于100 mL容量瓶中， 以乙腈超声10 min溶解，冷却后定容至刻度，配成100 mg· L1标准储备溶液。于4 °C冰 箱避光保存，保存期半年。
[0014] 柑橘红2号标准溶液：分别移取适量标准储备溶液至50 mL容量瓶，用甲酸-乙 腈正己烷饱和溶液定容至刻度，配成〇. 25,0. 50,1. 00, 2. 00, 5. 00,10. 00 mg · L 1标准溶 液。置于4 °C冰箱避光保存，保存期三个月。
[0015] 乙腈为色谱纯，甲酸、丙酮、正己烷均为分析纯，水为超纯水。
[0016] 2.方法与结果 净化条件：由于用丙酮-正己烷（1 :3)混合溶剂提取样品时，会同时提取出一些类脂 物，为达到较好的净化效果，试验用甲酸-乙腈正己烷饱和溶液溶解残渣后，加入正己 烷，采用甲酸-乙腈（〇. 5 +99. 5)溶液与正己烷液-液分配脱脂，试验结果表明：柑橘红 2号的回收率理想，能较好地达到净化油脂的目的。
[0017] 色谱条件：在色谱条件下对柑橘红2号标准溶液进行测定，结果表明：柑橘红2 号在508 nm附近吸收最大，试验选择508 nm作为检测波长。试验用Agilent TC C18色 谱柱（4. 6 _ X250 _，5 μπι)，用乙腈与甲酸-水（0. 1 +99. 9)溶液以体积92比8混 合溶液作为流动相，结果表明：在柑橘红2号染料保留时间附近无干扰峰。
[0018] 干扰试验：在色谱条件下进行了柑橘红2号染料与苏丹红1号的干扰试验，结果表 明：在优化的试验条件下，苏丹红1号与柑橘红2号完全分离，苏丹红1号对柑橘红2号测 定无干扰。
[0019] 标准曲线的制作 在色谱条件下对柑橘红2号标准溶液系列进行了测定，线性范围在0.25~10.0 1^41之间，线性回归方程为八=2.73\1〇40-8.37父1〇2，相关系数为〇.99997，方法的 测定下限（l〇S/ Ν )为 0 · 1 mg · kg、
[0020] 方法的回收率及精密度 选用不含柑橘红2号染料的果汁、鲜橙、胡萝卜样品分别加入0.100，0. 200，1.00 mg ?kg1柑橘红2号标准溶液，按试验方法处理样品，在色谱条件下测定并计算其回收率 和相对标准偏差，结果见表1。
[0021] 表1回收率和精密度试验结果（n=6)
【主权项】
1. 柑橘红2号染料的测定方法，其特征在于将待测样品预处理后，用高效液相色谱检 测，包括以下步骤： (1)样品预处理 称取试样5.00 g于50 mL具塞离心管中，加入丙酮-正己烧（1 +3)混合溶剂20mL， 置水平往复振荡器振荡15 min(若样品为黏稠的果汁或果蔬，振荡前先均浆1 min，加水 至30 mL)，以4 000 r · min 1转速离心6 min，吸取正己烷层至30 mL吹氮管；离心管中 再加入正己烷15 mL，重复提取一次，合并提取液于吹氮管中，在氮吹仪中于45 °C蒸发至 干；加入1 mL甲酸-乙腈正己烷饱和溶液溶解残渣，涡旋混合1 min，超声1 min，加入正 己烧0. 5 mL,润旋混合1 min,移至1.5 mL具塞离心管中，以10000 r ·η?η-1转速离 心8 min，弃去正己烷层，离心管中再加入正己烷0.5 mL重复提取一次，下层清液用0.22 μ m滤膜过滤，在仪器工作条件下进行测定； (2)用高效液相色谱仪（型号为Waters Acquity)，配二极管检测器（型号为 Waters ·2487 )和Agilent TC C1S色谱柱作为试验仪器检测，记录色谱图，内标峰高（Hi) 与柑橘红2号染料峰高（Hs)，用标准曲线换算浓度。2. 根据权利要求1所述的的柑橘红2号染料的测定方法，其特征在于该方法是色谱柱 Agilent TC C1S，波长为508 nm，流速为1.0 mL /min,流动相为乙腈：甲酸=92 : 8,柱温为 40°C，进样量为10yL。
【专利摘要】本发明属于食品检验领域，涉及食品添加剂使用卫生标准的分析测定方法。具体涉及果汁和果蔬中柑橘红2号染料的测定方法。该方法是将样品用丙酮-正己烷(1+3)混合溶剂提取，提取液于45℃蒸发至干。用甲酸-乙腈(0.5+99.5)溶液(经正己烷饱和)溶解残渣，正己烷脱脂。色谱测定条件为色谱柱AgilentTCC18，波长为508nm，流速为1.0mL/min，流动相为乙腈：甲酸=92∶8，柱温为30℃，进样量为50μL。该方法准确度、精密度高、操作简便、迅速。结果表明柑橘红2号染料的质量浓度在0.25～10.0mg?L-1范围内与其峰面积呈线性关系，最低检出限为0.1mg?kg-1，可直接判断样品是否超标，此方法对于果汁和果蔬饮料检测监控方面具有重要意义。
【IPC分类】G01N30/02
【公开号】CN105572236
【申请号】CN201410533961
【发明人】洪霞, 张淑雅
【申请人】江苏维赛科技生物发展有限公司
【公开日】2016年5月11日
【申请日】2014年10月12日