一种快速定量蜂蜜品质的高效液相色谱方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种定量蜂蜜品质的色谱方法，尤其涉及一种快速定量蜂蜜品质的高 效液相色谱方法。
【背景技术】
[0002] 蜂蜜中含有超过180种活性物质，其主要成分为果糖和葡萄糖及4%~5%的低聚 果糖，另外蜂蜜中还含有丰富的氨基酸、维生素、活性酶、类黄酮、多酚类、类胡萝卜素等活 性物质及多种矿物质。蜂蜜具有抗氧化、抗菌、加速创伤修复、增强免疫力等多种生理活性， 因而蜂蜜不但被作为一种直接有效的营养补充来源，而且被应用于治疗肝炎、癌症、伤口感 染、便秘以及改善胃肠功能、提高机体免疫力等。
[0003] 近年来，蜂蜜作为一种药食两用的天然保健品，受到越来越多的青睐。我国是养蜂 及蜂蜜出口大国，20世纪90年代我国蜂蜜出口量占世界年贸易量的40%。然而，蜂蜜是一 种极易掺假的食品，近年来由于掺假等质量问题，使我国蜂蜜产品的信誉越来越低，出口量 逐年下降。为了规范蜂蜜市场，国家标准化委员会于2005年10月26日发布了 GB 18796- 2005《蜂蜜》国家强制性标准，并规定自2006年3月1日起实施。GB 18796- 2005规定蜂 蜜中果糖和葡萄糖含量应大于等于60%，而欧盟、日本等蜂蜜进口国还规定了蜂蜜中还原 糖含量及果葡比等参数。因此，必须建立一系列蜂蜜中还原糖的测定方法，既可以保护消费 者利益，又对蜂蜜生产企业的生产具有指导意义。
[0004] 目前，关于蜂蜜中还原糖测定的方法主要有滴定法、旋光法、薄层色谱、高效液相 色谱法、离子色谱脉冲安培法、气质联用法、高效毛细管电泳法、核磁共振法等。但是传统的 滴定法、薄层色谱法、旋光度法操作繁琐而且准确度不高。高效液相色谱法采用示差折光检 测器或蒸发光散射检测器，灵敏度较低，且受温度、流动相影响大。离子色谱脉冲安培法用 于单糖、二糖、小分子寡糖的测定，具有灵敏度高、选择性好、不用衍生、操作简便等有点。但 是，离子色谱对试剂、进样样品要求较高，样品前处理步骤要求严格，而且需要专门的离子 色谱和脉冲安培检测器。毛细管电泳、气质联用、核磁共振等方法设备昂贵，不易在国内中 小型蜂蜜生产企业内普及。
【发明内容】
[0005] 本发明采用高效液相色谱法，旨在建立一种同时测定蜂蜜中的果糖、葡萄糖、蔗糖 的方法。
[0006] 为实现上述目的，一种快速定量蜂蜜品质的高效液相色谱方法，本发明采用了以 下技术方案：收集具有代表性的蜂蜜样品10~20份，称取适量样品，用纯乙腈前处理，供高 效液相色谱检测用。以糖专用分析柱为色谱柱，乙腈-水（75 : 25)为流动相。用示差折 光检测器检测，外标法定量，计算葡萄糖、果糖和蔗糖的含量。
[0007] 所述色谱柱为糖专用分析柱（4mm X 250mm)。
[0008] 所述色谱柱柱温为35 °C。
[0009] 所述流动相流量为lml/min。
[0010] 所述流动相进样量为10 μ L。
[0011] 本发明实施例提供的技术方案带来的有益效果是：
[0012] 用高效液相色谱分离、测定蜂蜜中的可溶性糖的研究报道很少，本发明利用高效 液相色谱和糖专用分析柱成功地分离了蜂蜜中的果糖、葡萄糖、蔗糖，以乙腈：水=75:25 为流动相，15min左右即完成色谱分离过程，分离效果良好，测定的重复性高，检测灵敏，回 收率在97. 0%~98. 9%之间，前处理和操作简单。本发明溶剂采用乙腈和水，可回收利用， 无污染，实现清洁生产。既保护消费者利益，又对蜂蜜生产企业的生产具有指导意义。
【具体实施方式】
[0013] 实施例1 一种快速定量蜂蜜品质的高效液相色谱方法
[0014] 1、样品处理
[0015] 称取果糖、葡萄糖分别约100mg、蔗糖约20mg，精密称定，置50ml量瓶中，用流动相 溶解并稀释至刻度，摇匀。
[0016] 称取0· 5g蜂蜜样品，加入2mL纯乙腈，65°C水浴lOmin，10000r/min离心20min， 吸取上清液于25mL的容量瓶，残渣加入3mL蒸馏水，65°C水浴lOmin，10000r/min离心，合 并上清液，按此方法再提取一次，合并上清液，并用蒸馏水定容至25mL，抽取5mL用有机系 (0. 45 μ m滤膜）过滤，供高效液相色谱检测用。
[0017] 2、色谱分析条件
[0018] 岛津LC-20A液相色谱仪，色谱柱为糖专用分析柱（4mmX250mm)。示差折光检测 器。流动相：乙腈-水（75 : 25)，柱温35°C，流量lml/min，进样量10yL。
[0019] 3、标准曲线的测定
[0020] 准确配制 0· 2mg/mL、1. 0mg/mL、2. 5mg/mL、5. Omg/mL 和 10.0 mg/mL 的标准工作液， 进行液相色谱分析。以浓度为X轴，峰面积为Y轴进行线性回归，制作标准曲线。
[0021] 4、根据样品分析所设定的取样量，考察了每毫升中含果糖、葡萄糖为0.4、0. 6、 0. 8、1. 0、1. 2mg与每毫升中含蔗糖0. 1、0. 2、0. 3、0. 4、0. 5mg的线性关系，经浓度与峰面积 关系的回归计算，果糖的回归方程为Y = 45+382360X，相关系数R2 = 0. 999 ;葡萄糖的回归 方程为Y = 120+322658X，相关系数R2 = 0. 9991 ;蔗糖的回归方程为Y = 75+78054X，相关 系数 R2 = 0.9992。
[0022] 以上述方法分析了不同品种及来源的蜂蜜10批，典型的样品结果见下表1。分析 数据表明：①品质较好的天然蜂蜜果糖、葡萄糖的含量范围为30%~35%，蔗糖含量在2% 以下；②人工造假的蜂蜜、果糖、葡萄糖含量低于20%，而蔗糖的含量高达20%以上，有的 甚至达到30%以上。
[0023] 表1样品含量测定结果（％ )
[0024]
【主权项】
1. 一种快速定量蜂蜜品质的高效液相色谱方法，其特征在于收集具有代表性的蜂蜜样 品10~20份，称取适量样品，用纯乙腈前处理，供高效液相色谱检测用。以糖专用分析柱 为色谱柱，乙腈-水（75 : 25)为流动相。用示差折光检测器检测，外标法定量，计算葡萄 糖、果糖和蔗糖的含量。2. 根据权利要求1所述色谱柱为糖专用分析柱（4mmX 250mm)。3. 根据权利要求1所述色谱柱柱温为35°C。4. 根据权利要求1所述流动相流量为lml/min。5. 根据权利要求1所述流动相进样量为10 μ L。
【专利摘要】本发明公开了一种快速定量蜂蜜品质的高效液相色谱方法，收集具有代表性的蜂蜜样品10～20份，称取适量样品，用纯乙腈前处理，供高效液相色谱检测用。以糖专用分析柱为色谱柱，乙腈-水(75∶25)为流动相。用示差折光检测器检测，外标法定量，计算葡萄糖、果糖和蔗糖的含量。本发明利用高效液相色谱和糖专用分析柱成功地分离了蜂蜜中的果糖、葡萄糖、蔗糖，以乙腈:水＝75:25为流动相，15min左右即完成色谱分离过程，分离效果良好，测定的重复性高，检测灵敏，回收率在97.0％～98.9％之间，前处理和操作简单。本发明溶剂采用乙腈和水，可回收利用，无污染，实现清洁生产。既保护消费者利益，又对蜂蜜生产企业的生产具有指导意义。
【IPC分类】G01N30/06, G01N30/02
【公开号】CN105572237
【申请号】CN201410535926
【发明人】韩雪
【申请人】天津中发蜂业科技发展有限公司
【公开日】2016年5月11日
【申请日】2014年10月11日