测定血液和尿液中苯丙胺类、氯胺酮、哌替啶和美沙酮的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属分析化学领域，具体涉及一种测定血液和尿液中苯丙胺类、氯胺酮、哌替 啶和美沙酮的方法。本方法可简便快速测定血液和尿液中4种苯丙胺类（苯丙胺、甲基苯 丙胺、亚甲基二氧苯丙胺、亚甲基二氧甲基苯丙胺）氯胺酮、哌替啶和美沙酮等化合物，尤 其适用于司法鉴定领域。
【背景技术】
[0002] 据资料显示，目前被广泛滥用的毒品包括4种苯丙胺类化合物（苯丙 胺（amphetamine, AMP)、甲基苯丙胺（methamphetamine, MAMP)、亚甲基二氧苯丙胺 (methylenedioxyamphetamine，MDA)、亚甲基二氧甲基苯丙胺（methylenedioxymethamphet amine, MDMA)，以及氯胺酮和哌替陡。
[0003] 研究显示，AMP和MAMP其毒性主要以中枢神经系统兴奋作用为主；MDA、MDMA兼 具兴奋和致幻作用，是被称为"摇头丸"毒品的主要成分。氯胺酮又被称作"K粉"，有致幻 作用，长期使用或过量使用会对脑部造成永久损害；哌替啶又名度冷丁，是临床常用的镇痛 剂，长期使用会产生依赖性，在我国被列为严格管制的毒品；美沙酮因其药理作用与吗啡相 似，戒断症状较轻，为海洛因等阿片类毒品依赖进行替代递减法戒毒治疗的首选药物，因此 在涉毒案例的鉴定中有着较高的检出率。
[0004] 司法鉴定实践显示，血液和尿液是毒品鉴定中最为重要的生物检材；其中，尿液中 毒品的浓度高，因此，尿液是毒品定性分析常用检材；血液是毒品定量分析常用的检材，所 得的定量数值可为与文献报道的中毒浓度或致死浓度相比较。
[0005] 现有技术公开的测定血液和尿液中苯丙胺类、氯胺酮、哌替啶、美沙酮的方法通常 有酶联免疫法、气相色谱一质谱联用法、液相色谱一质谱联用法等。实践显示，所述的酶联 免疫法专属性较差，难以区分结构类似物，常出现假阳性的情况，因而，只能作为一种初筛 的手段，需要进一步采用气相色谱一质谱联用法或液相色谱一质谱联用法进行确证，且在 将生物样品进行气相色谱一质谱联用法或液相色谱一质谱联用法进行分析之前，均需要对 样品进行提取和纯化，而该步骤涉及将提取液挥干的过程，因此常产生并经研究表明，AMP 和MAMP随着提取液的挥干而快速挥发，影响分析的重现性及标准曲线的线性，造成生物检 材中所述被检物质难以准确定量的缺陷。有研究人员通过加酸或使用低温条件下对样品进 行挥干或通过衍生化操作以期避免AMP和MAMP的挥发，但所采用的方法繁琐而耗时，仍难 以满足司法鉴定对于毒品分析快速的要求。
[0006] 本申请的发明人针对目前现状，拟提供一种简便、快速而准确的能同时测定血液 和尿液中4种苯丙胺类（苯丙胺、甲基苯丙胺、亚甲基二氧苯丙胺、亚甲基二氧甲基苯丙 胺）、氯胺酮、哌替啶、美沙酮含量的方法。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的是克服现有技术的缺陷，提供一种测定血液和尿液中苯丙胺类、氯 胺酮、哌替啶和美沙酮的方法；尤其是一种简便、快速而准确的能同时测定血液和尿液中4 种苯丙胺类（苯丙胺、甲基苯丙胺、亚甲基二氧苯丙胺、亚甲基二氧甲基苯丙胺）、氯胺酮、 哌替啶、美沙酮含量的方法。本方法能满足司法鉴定对于毒品分析快速的要求。
[0008] 具体的，本发明方法采用气相色谱一质谱联用法对血液和尿液中4种苯丙胺类、 氯胺酮、哌替啶、美沙酮进行定性和定量分析。本方法中，对少量血液和尿液（〇.2-lmL)经 过碱化处理后，加入少量有机溶剂（1 一氯丁烧，100-300 μ L)进行液液萃取,转移上层萃取 液直接采用气相色谱一质谱联用法进行测定（进样量2 μ L)，即可测定被检物质的含量。
[0009] 本发明方法样品的前处理过程简便、快速、易于推广；本发明采用HP-5MS毛细气 相色谱柱以及质谱检测器，测定血液和尿液中4种苯丙胺类、氯胺酮、哌替啶、美沙酮的含 量，检测的灵敏度高、准确度好。
[0010] 更具体的，本发明的测定血液和尿液中苯丙胺类、氯胺酮、哌替啶和美沙酮的方 法，其特征在于，提取液直接采用气相色谱一质谱联用法进行测定，包括下述步骤：
[0011] (1)对血液或尿液样品预处理
[0012] 取血液或尿液检材，加入内标，加入10% NaOH溶液将检材调至强碱性，再加入 卜氯丁烧，润旋混合2min，lOOOOrpm离心5min，转移上层有机相；
[0013] (2)采用气相色谱一质谱联用法测定血液或尿液检材中4种苯丙胺类、氯胺酮、哌 替啶和美沙酮的浓度；色谱柱为HP-5MS毛细管柱。
[0014] 本发明中，只需取少量血液或尿液检材样品进行预处理，本发明的实施例中取 0. 2-lmL的血液或尿液检材样品进行预处理；
[0015] 本发明中，在血液或尿液检材样品中加入内标MAMP-D5，本发明的实施例中在血 液或尿液检材样品中加入内标MAMP-D5 0. 2-1 μ g，再加入10% NaOH溶液将检材调至强碱 性；
[0016] 本发明中，血液和尿液样品预处理操作中使用1 一氯丁烷作为提取溶剂，不涉 及提取液的挥干过程，本发明的实施例中加入1-氯丁烷100-300 μ L，涡旋混合2min， lOOOOrpm离心5min，转移上层有机相；
[0017] 本发明中，加入1-氯丁烷后，不涉及提取液的挥干过程，将提取液直接进样气相 色谱一质谱联用仪进行检测；
[0018] 本发明中，采用的色谱柱为HP-5MS毛细管柱（30mX0. 25mmX0. 25μπι)，进样量 2 μ L〇
[0019] 本发明对血液和尿液中4种苯丙胺类、氯胺酮、哌替啶、美沙酮进行了定性和定量 分析，结果准确、可靠；各化合物检测限均为5ng/mL，定量限为20ng/mL，线性范围0. 02~ 25 μ g/mL，线性相关系数r值均大于0. 99。对于血液样品，提取回收率在33. 7-80. 5 % 范围内，准确度在87. 1-113. 9 %范围内，批内精密度的RSD值不超过10. 2 %，批间精密 度的RSD值不超过12. 1% ;对于尿液样品，提取回收率在64. 6-112. 6 %范围内，准确度 在85. 1-108. 4%范围内，批内精密度的RSD值不超过6. 3%，批间精密度的RSD值不超过 11. 5%。
[0020] 表1为检测目标物的色谱保留时间和质谱特征峰。
[0021] 表 1
[0022]
[0024] 本发明方法与现有技术的方法比较具有以下明显优势：
[0025] (1)与酶联免疫法相比，本发明方法的灵敏度高，各化合物的检测限可达到5ng/ mL，而酶联免疫法的检测限为300-1000ng/mL。而对于毒品的检测，国际上通行的做法是先 用酶联免疫法进行初筛，再用气相色谱一质谱联用法或液相色谱一质谱联用法进行确证， 因而本发明方法的灵敏度足以满足司法鉴定工作中实际检案的需要。
[0026] (2)与现有技术的气相色谱一质谱联用法或液相色谱一质谱联用法相比，本发明 方法极大地简化了样品的前处理步骤；现有技术的方法均需将样品的提取液吹干的过程， 耗时较长（超过30min)，且难以避免2种重要的苯丙胺类物质（AMP和MAMP)随着提取液 的挥发而损失，进行影响分析的重现性及标准曲线的线性，造成生物检材中这2种物质难 以准确定量；虽有研究人员通过加酸或使用低温条件下对样品进行挥干或通过衍生化操作 以期避免AMP和MAMP的挥发，但这些方法繁琐而耗时，难以满足司法鉴定对于毒品分析快 速的要求；