一种量子点-抗体溶液及其制备方法与应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物技术分析检测领域，尤其是一种量子点-抗体溶液及其制备方法 与应用。
【背景技术】
[0002] 现阶段，快速检测试剂盒一般的标记物是胶体金或者荧光基团。例如，检测转铁蛋 白（SF)的检测试纸，由含有胶体金标记的抗人SF抗体的胶体金-抗体垫、包被有配对检测物 抗体(T线）和抗鼠 IgG(C线）的NC膜、样品垫、吸样垫和塑料底板组成，每个试纸的宽度为3-5mm，长度为7-8cm，样品垫、NC膜和吸样垫从塑料底板一端依次排列至另一端。
[0003] 胶体金标记的检测试剂盒虽然成本较量子点更低，但检测灵敏度不如量子点标记 高，检测范围也较量子点更窄。荧光基团标记的检测试剂盒，灵敏度也低于量子点标记。
[0004] 胶体金使用可见光吸光进行检测，结果为反应区上一条红色或紫色的条带。一般 胶体金检测试剂盒均为肉眼观察该条带是否出现及颜色深浅。而量子点则是由紫外光激 发，产生非常强的激发光，其信号强度要大于胶体金的反应信号，提高灵敏度。同时，当胶体 金在反应区结合达到一定值时，再增加结合胶体金不会改变条带颜色。而量子点是进行发 光强度测定，故而无此问题，从而增大检测范围。
[0005] 和荧光基团相比，量子点的激发光和发射光距离较远，故而激发光对于发射光的 干扰很小，从而减小检测的本底值，进而提高灵敏度。同时，量子点的激发光谱很窄，故而在 峰值的光强非常强。若使用同样光栅进行测定时，量子点产生的激发光强度远远大于荧光 基团的发光强度。故而量子点标记得到的激发光信号更强。同时，和荧光基团相比，量子点 具有相似或者更高的吸光系数和光量子产率。故而使用量子点标记，其检测灵敏度较荧光 基团更尚。
【发明内容】
[0006] 本发明所要解决的技术问题在于提供一种量子点-抗体溶液。
[0007] 本发明所要解决的另一技术问题在于提供上述量子点-抗体溶液的制备方法。
[0008] 本发明所要解决的另一技术问题在于提供上述量子点-抗体溶液的应用。
[0009 ]为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：
[0010] -种量子点-抗体溶液，是由抗体和量子点组成的量子点-抗体交联物，所述量子 点是由粒径在2-20nm之间的IIB.VIA族元素或IIIA.VA族元素为核、二氧化硅为壳的核壳型 纳米复合粒子。
[0011] 所述量子点-抗体溶液为淡橙色透明的溶液，PH值在7.5左右，溶液中的量子点是 由粒径在2-20nm之间的IIB.VIA族元素（如CdS、CdSe、CdTe、ZnSe等）或IIIA.VA族元素（如 InP、InAs等)为核、二氧化娃为壳的核壳型纳米复合粒子。交联了不同粒径的抗体经过相同 波长的激发光激发后可以发射不同发射光谱，进而表现为量子点不同颜色的改变。
[0012] 优选的，上述量子点-抗体溶液，所述抗体是鼠抗人单克隆抗体。
[0013] 所述抗体是鼠抗人单克隆抗体指通过免疫小鼠得到的B淋巴细胞，再通过杂交瘤 细胞技术在体内或体外制备，得到针对一种抗原决定簇的抗体。
[0014] 优选的，上述量子点-抗体溶液，所述量子点是ZnS、CdS、HgS、ZnSe、CdSe、HgSe、 CdTe、ZnTe、ZnO、PbSe、HgTe、CaAs、InP、InAs、InCaAs、CdS/ZnS、CdS/Ag2S、CdS/PbS、CdS/Cd (0H)2、CdS/HgS、CdS/HgS/CdS、ZnS/CdS、ZnS/CdS/ZnS、ZnS/HgS/ZnS/CdS、CdSe/CdS、CdSe/ ZnS、CdSe/ZnSe、CdSe/CuSe、CdSe/HgTe、CdSe/HgSe、CdSe/HgSe/CdSe、CdTe/HgS、CdTe/ HgTe、InAs/InP、InAs/CdSe、InAs/ZnSe、MgS、MgSe、MgTe、CaS、CaSe、CaTe、SrS、SrSe、SeTe、 8&5、8&56、8&了6、0(15:]\111、2115:]\111丄(15:(：11、2115:(：11丄(15:113、2115:113中的任意一种或任意几种 纳米粒子的组合，以及由上述任意一种量子点为核、二氧化硅为壳的核壳型纳米复合粒子。
[0015] 优选的，上述量子点-抗体溶液，是由下述方法得到的：
[0016] (1)每20-200nmol抗体和200pmol量子点混匀后，加入40-200nmol的EDC和NHS，避 光反应60-180分钟并持续搅拌；
[0017] ⑵所得反应混合物转移到10K-100KDa孔径的超滤管中，在速度10,000Xg下离心 15分钟，重复5次；
[0018] (3)收集超滤管中的反应产物，即为量子点-抗体交联物；
[0019 ] 上述量子点-抗体溶液中加入2 % BSA后，存于4 °C冰箱中备用。
[0020 ]优选的，上述量子点-抗体溶液，是由下述方法得到的：
[0021 ] (1)每lOOnmol的鼠抗人TSH单克隆抗体和200pmol粒径为4.0nm的CdTe量子点混匀 后，加入lOOnmol的EDC和NHS，避光反应60分钟并持续搅拌；
[0022] (2)将所得反应混合物转移到lOKDa孔径的超滤管中，在速度10,000Xg下离心15 分钟，重复5次；
[0023] (3)收集超滤管中的反应产物，即为量子点-抗体交联物。
[0024] 上述量子点-抗体溶液的制备方法，具体步骤为：
[0025] (1)每20-200nmol抗体和200pmol量子点混匀后，加入40-200nmol的EDC和NHS，避 光反应60-180分钟并持续搅拌；
[0026] (2)所得反应混合物转移到10K-100KDa孔径的超滤管中，在速度10,000Xg下离心 15分钟，重复5次；
[0027 ] (3)收集超滤管中的反应产物，即为量子点-抗体交联物。
[0028]优选的，上述上述量子点-抗体溶液的制备方法，所述步骤(3)所得量子点-抗体交 联物中加入2 % BSA后，存于4 °C冰箱中备用。
[0029]优选的，上述量子点-抗体溶液的制备方法，所述抗体是鼠抗人单克隆抗体。
[0030]优选的，上述量子点-抗体溶液的制备方法，所述量子点是ZnS、CdS、HgS、ZnSe、 CdSe、HgSe、CdTe、ZnTe、ZnO、PbSe、HgTe、CaAs、InP、InAs、InCaAs、CdS/ZnS、CdS/Ag2S、CdS/ PbS、CdS/Cd(OH)2、CdS/HgS、CdS/HgS/CdS、ZnS/CdS、ZnS/CdS/ZnS、ZnS/HgS/ZnS/CdS、CdSe/ CdS、CdSe/ZnS、CdSe/ZnSe、CdSe/CuSe、CdSe/HgTe、CdSe/HgSe、CdSe/HgSe/CdSe、CdTe/HgS、 CdTe/HgTe、InAs/InP、InAs/CdSe、InAs/ZnSe、MgS、MgSe、MgTe、CaS、CaSe、CaTe、SrS、SrSe、 56丁6、8&5、8&56、8&了6、0(15:]\111、2115:]\111丄(15:(：11、2115:(：11、〇(15:113、2115:113中的任意一种或任 意几种纳米粒子的组合，以及由上述任意一种量子点为核、二氧化硅为壳的核壳型纳米复 合粒子。
[0031 ]上述量子点-抗体溶液在制备检测试纸和/或试剂盒方面的应用。
[0032] 优选的，上述量子点-抗体溶液的应用，所述检测试纸的NC膜包被有配对检测物抗 体(T线）和抗鼠 IgG(C线），所述量子点-抗体溶液应用于检测试纸的T线(检测线）与C线（质 控线)上。
[0033] 优选的，上述量子点-抗体溶液的应用，所述检测试纸的NC膜是由下述方法制备得 到的：以0.01M pH7.4磷酸盐缓冲液(PBS)将配对的待测物抗体配制成0.5mg/mL-3. Omg/mL 浓度，在喷膜仪在NC膜上以1.2-1.5yL/cm的参数进行划线，包被T线，同时在NC膜上部包被 l-2mg/mL的抗鼠 IgG作为C线，干燥，备用。
[0034] 优选的，上述量子点-抗体溶液的应用，所述检测试纸由NC膜、样品垫、吸样垫和底 板组成，所述样品垫、NC膜和吸样垫依次从底板一端排列至另一端。
[0035] 优选的，上述量子点-抗体溶液的应用，所述检测试纸的NC膜是一种由硝酸纤维 素、尼龙膜、或硝酸纤维素/醋酸纤维素混合膜构成的多孔结构的膜，孔径为8_12μπι。
[0036] 优选的，上述量子点-抗体溶液的应用，所述检测试纸的样品垫为玻璃纤维膜或无 纺布。
[0037] 优选的，上述量子点-抗体溶液的应用，所述检测试纸的吸样垫为吸水滤纸。
[0038] 优选的，上述量子点-抗体溶液的应用，所述检测试纸的底板为塑料底板或聚脂底 板。
[0039] 优选的，上述量子点-抗体溶液的应用，所述检测试剂盒的装配如下：卡壳包含上 盖和下盖两个部分，内部放置检测试纸，卡壳上盖的下部对应样品垫部分设置了样品孔，用 于加入样本，卡壳上盖的中间部分应对试纸NC膜中部设置了视窗口，用于观察NC膜上的C、T 线，判定结果。
[0040] 优选的，上述量子点-抗体溶液的应用，所述检测试剂盒的卡壳的材质为聚脂、塑 料、或硬性纸质材料。
[0041] 优选的，上述量子点-抗体溶液的应用，所述检测试剂盒的装配方法为:在相对湿 度小于40 %的条件下，取底板，将已包被待测物特异性抗体的NC膜粘贴在底板的中部，在NC 膜T线的另一侧按顺序粘贴样品垫;在NC膜C线一侧粘贴吸样垫;各粘贴组分接口相互叠压 l-2mm，粘贴好的大板切成3-5mm宽的试纸条;然后将两种试纸条分别放置于卡壳下盖的槽 中，然后盖上上盖，压紧，完成装配。
[0042]优选的，上述量子点-抗体溶液的应用，所述检测试剂盒的检测方法如下:检测时 将10μ1的被检样本(如血清、血浆或全血)加入到所述量子点-抗体溶液中，将70μ1混合物加 入上样孔中，然后在稀释液孔中加入50μ1样品稀释液，在15-20分钟内，用量子点免疫层析 结果判读记录仪对检测结果进行判定。
[0043] 上述量子点免疫层析结果判读记录仪是一种光学检测系统，内置了对待测物检测 试纸的标准曲线和判定方法，用于对检测结果的定量判定。
[0044] 本发明的有益效果是：
[0045] 本发明提供了量子点-抗体溶液使用量子点代替传统胶体金或荧光基团进行标 记，提高灵敏度，可用于检测一些微量或痕量物质，该类物质由于浓度或含量过低而无法使 用现有免疫层析法进行检测。
[0046]具体来说，与现有技术中利用共价偶联制备量子点抗体，利用一种氧化锌或氧化 石墨烯量子点制备量子点抗体溶液在液体中进行均相免疫分析不同，本发明利用交联剂 EDC将任意一种量子点为核、二氧化硅为壳的核壳型纳米复合粒子表面的羧基进行活化，再 与抗体表面的氨基结合，形成量子点抗体溶液，与包被配对抗体的硝酸纤维素膜的试剂卡 组成免疫层析检测试剂盒;利用量子点作为荧光信号无干扰、半衰期时间长的优势大大提 高了免疫层析试剂的灵敏度，适用于所有抗体与量子点的交联，甚至可用于检测一些微量 或痕量物质，该类物质由于浓度或含量过低而无法使用现有免疫层析法进行检测。
【附图说明】
[0047]图1