一种硫醇类药物含量的检测方法
【技术领域】
[0001]本发明属于检测技术领域，涉及一种硫醇类药物的定量检测方法，尤其涉及一种使用衍生化预处理和液相色谱-紫外检测器分离检测硫醇类药物的方法。
【背景技术】
[0002]硫醇类药物是一类具有巯基结构药物的总称，主要包括美司钠(mesna)，卡托普利(captopril)，半胱氨酸(cysteamine)和硫普罗宁(t1pronin)等化合物，目前在医学领域被广泛用于心力衰竭，X射线损伤，肝炎和血性膀胱炎等疾病的治疗。这些药物多有一定的副作用，可能引起咳嗽，头痛，痛捧，胸闷等症状。
[0003]硫醇类药物常见的分析定量方法有液相色谱，离子色谱分离，紫外、电化学、蒸发光散射以及近红外光谱法，还有滴定法、旋光检测法等。如CN102520093A提出一种离子色谱串联紫外检测法测定卡普托利含量的方法，该方法采用离子色谱阳离子交换系统与紫外检测器联用，根据物质在色谱柱上保留行为的差异，选择合适的分离条件，再选择最优的紫外检测波长，能够在比较高的灵敏度下分离检测卡托普利，该方法虽然简单，但硫醇类药物极性较强，在色谱柱分离过程通常出峰时间过早，得不到有效分离；另外，硫醇类药物的化学结构一般缺少匹配的紫外或荧光信号响应，导致该方法灵敏度低，重现性差。
[0004]已有文献使用衍生化预处理的方法检测硫醇类药物，如文献已报道使用3-溴甲基-异丙安替比林(BMP)作为衍生化试剂屏蔽卡普托利结构中的巯基基团，能够在比较高的灵敏度下分离检测卡普托利(3-Bromomethyl-propyphenazone as a new derivatizat1nreagent for high performance liquid chromatography of captopril andhydrochlorothiazide with UV-detect1n,B1med.Chromatogr.，1998，12:57)，但该方法衍生化过程需要加入碳酸钾作为催化剂，操作步骤相对复杂，成本较高;CN 102977113A公开了一种基于一种香豆素色烯衍生物检测硫醇的方法，所述的香豆素色系衍生物为8，9_dihydro-2H-cyclopenta[b]pyrano[2,3-f ]chromene-2,10(7AH)_d1ne(简称:CPC)，检测方法是基于CPC，在pH为7.4的HEPES溶液中定量地检测硫醇的含量;CN 103575727A公开了一种检测硫醇的试剂，所述试剂是马来酰亚胺衍生物:2-( 2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-1Η-苯并〔de〕异喹啉-1，3(2H)_ 二酮;CN 102183471A公开了一种硫醇的定量检测方法和试剂盒，所述方法和试剂盒基于一种色稀衍生物NPC: 7-ni tro-2，3-di hydro-ΙΗ-cyclopenta[b]chromen-l-one，在pH为7.0的缓冲溶液中定量地检测硫醇的含量。但是，这些方法不能避免硫醇类药物的聚合，并且检测灵敏度不高。
【发明内容】
[0005]针对现有技术存在的问题，本发明的目的在于提供一种硫醇类药物含量的检测方法，所述方法简单易行，操作简便，且具有较高的灵敏度和重现性，可广泛应用于生物制药、药物动力学及药品安全等领域。
[0006]为达此目的，本发明采用以下技术方案:
[0007]本发明提供了一种硫醇类药物含量的检测方法，所述方法包括如下步骤:
[0008](I)向硫醇类药物的溶液中加入还原试剂，还原溶液中的二硫聚体组分，得到还原产物溶液；
[0009](2)将还原产物溶液与醌类衍生化试剂进行衍生化反应，得到衍生化产物溶液；
[0010](3)检测衍生化产物的含量，得到硫醇类药物的含量。
[0011]所述还原产物为硫醇药物的单体结构形式，所述衍生化产物为醌类衍生化试剂与硫醇类药物的硫醇基团反应生成的以C-S键合的产物。
[0012]本发明提供的硫醇类药物含量的检测方法，其检测原理为:先使用还原试剂对待检测的硫醇类药物的溶液进行还原性处理，之后，使用醌类衍生化试剂对硫醇类药物进行预衍生化，由于醌类衍生化试剂的结构式中存在大量吸电子位点，可与富电子的硫醇基团通过亲核加成反应生成以C-S键合的衍生化产物，并且所述加成反应迅速且无其他副反应，由于硫醇基团被醌类化合物屏蔽，氧化副反应得到抑制，所述C-S键合的衍生化产物易检测分呙。
[0013]本发明提供的检测方法得到的数据精确，分析时间短，灵敏度高，为硫醇类药物的定量提供了一种优选的方法。
[0014]步骤(I)所述硫醇类药物为化学分子结构式中含有巯基的药物。
[0015]优选地，步骤(I)所述硫醇类药物为卡托普利、美司钠、青霉胺、半胱氨酸和硫普罗宁中的任意一种或至少两种的组合。典型但非限制性的组合为卡托普利与美司钠，青霉胺、半胱氨酸与硫普罗宁，卡托普利、美司钠、青霉胺与半胱氨酸，卡托普利、美司钠、青霉胺、半胱氨酸与硫普罗宁。
[0016]优选地，步骤(I)所述硫醇类药物在溶液中的浓度为I?lOOppm，如2ppm、3ppm、5ppm、I Oppm、15ppm、20ppm、30ppm、40ppm、50ppm、7 Oppm 或 90ppm 等，优选为 20 ?50ppm 0
[0017]进行步骤(I)所述还原反应前，先调节硫醇类药物的pH值为6?8，如调节至6.3、6.7、7、7.2、7.5、7.6或7.8等，优选为将?!1值调节为7。
[0018]步骤(I)所述还原试剂为三羧甲基磷酸(TCEP)、二硫苏糖醇、硼氢化钠和三丁基膦的任意一种或至少两种的组合。典型但非限制性的组合为:三羧甲基磷酸与二硫苏糖醇，硼氢化钠与三丁基膦，三羧甲基磷酸、二硫苏糖醇与硼氢化钠，三羧甲基磷酸、二硫苏糖醇、硼氢化钠与三丁基膦。所述还原剂能够将溶液中硫醇类药物的二硫聚体还原，从而有利于硫醇类药物含量的准确检测。
[0019]优选地，步骤(I)所述还原试剂的投加量为I?80ppm，如3ppm、5ppm、10ppm、15ppm、20ppm、25ppm、37.3ppm、45ppm、55.2ppm、65ppm、68.5ppm、70.2ppm 或 77.5ppm 等，优选为 30 ?45ppm，进一步优选为35ppm。
[0020]优选地，步骤(I)所述还原反应在搅拌条件下进行，所述搅拌的速率为150?250r/min，如150.12r/min、168r/min、190r/min、207r/min、238.6r/min、225r/min、220r/min等，优选为200r/min。
[0021 ] 优选地，步骤(I)所述反应的时间为3?8min，如5.3min、3.03?7.76min、3.44?
7.4min、3.75?7.12min、4.3?5.6min 等，优选为 5min。
[0022]步骤(2)所述醌类衍生化试剂为分子结构中含有醌式结构的化合物。
[0023]优选地，步骤(2)所述醌类衍生化试剂为苯醌、萘醌、菲醌和蒽醌中的任意一种或至少两种的组合。典型但非限制性的组合为:苯醌与萘醌，菲醌与蒽醌，萘醌与菲醌，苯醌、萘醌与菲醌，苯醌、萘醌、菲醌与蒽醌。
[0024]步骤(2)所述醌类衍生化试剂的投加量为I?lOOppm，如1.3ppm、5ppm、lOppm、20ppm、25ppm、46.8ppm、55ppm、65ppm 或 98.7ppm 等，优选为 30 ?50ppm。
[0025]优选地，步骤(2)所述反应在水浴条件下进行。
[0026]优选地，所述水浴的温度为20?40cC，如20.IcC、23cC、27.IcC、28cC、29.8Γ、31°C、34°C、34.1°C 或39.4°C 等，优选为25?35 °C，进一步优选为30 °C。
[0027]优选地，步骤(2)所述反应的时间为I?30min，如1.06min、3.5min、8