可用于辅助诊断疟疾的试剂盒的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明主要设及试剂盒W及诊断方法。具体而言，本发明设及用于辅助诊断追疾 感染，特别是用于辅助诊断恶性追原虫感染的诊断试剂盒。
【背景技术】
[0002] 追疾仍然是全球公共卫生的紧要问题，每年死亡达0. 7 - 2. 7百万。在过去的35 年，追疾的发病率增长了 2 - 3倍。在1955年，世界卫生组织（WHO)开始了一项通过应用氯 哇进行临床治疗和应用DDT (二氯二苯Ξ氯乙烧）控制蚊群而根除追疾的宏大计划。在20 世纪60年代后期逐步停止，运项计划虽然在全世界许多国家引起重要且持续的疾病负担 减轻。然而，在许多国家追疾仍有复发，其主要是由于耐药寄生虫的出现和传播导致的。耐 杀虫剂蚊子的出现，人口密度的增加（自1963年，世界人口已经翻了一番），全球变暖（运 种带菌者扩散至W前没有到达的范围），持续贫穷，政治动荡，W及由于传染性疾病导致的 生产力的损失，所有的运些因素破坏了治疗和控制追疾的稳定的公共卫生基础的维持。
[0003] 追疾寄生虫属于追原虫属，能后感染许多脊椎动物宿主，包括多种非人类灵长类 物种。四种追原虫属寄生于人类：恶性追原虫（Plasmodium, fal-ciparum)、^日追原虫 (P. malariae)、卵形追原虫化ovale)和间日追原虫（P. vivax)。其中，恶性追原虫和间日 追原虫分别与大部分追疾的发病率和死亡率相关。
[0004] 由于追疾治疗药物的特殊性，精确快速的诊断不仅能及时发现并治疗追疾患者， 大大降低病死率，也能通过早期排除追疾，及时挽救感染了其它传染性疾病患者的生命。W 此同时，精确快速的早期诊断也是对追疾实时流行病监测和控制的必要手段。到目前为止， 对可疑病人采血制作厚薄血片经染色后显微镜检查法（简称镜检法）一直被认为是追疾诊 断的"金标准"，其优点是费用低，能鉴定追原虫虫种，但是也存在着缺陷，即需要非常专业 的检验人员，当原虫密度较低时，可出现假阴性，引起误诊或漏诊，同时还需要显微镜、染色 液等一些辅助设备。随着临床机构，特别是一些现代化程度高的医院，由于检验人员更依赖 仪器设备，对镜检能力的掌握明显下降；而在一些欠发达地区，由于种种原因，未能配备镜 检相关的设备和试剂。运些因素限制了临床对追疾快速有效的诊断。因此，研究新的追疾 快速诊断方法成为目前研究的热点。
【发明内容】
阳〇化]本发明的目的在于提供新的用于辅助诊断追疾，特别是辅助诊断恶性追疾的试剂 盒。
[0006] 本发明人提供了 16条多肤。令人惊奇的是，本发明人发现，虽然所述16条多肤单 独诊断追疾时的检出率均在30. 7%~57. 5%之间，远远未达到作为检测工具的要求，但在 W受试者来源的生物样本是否对所述16条多肤中的至少一条或一条W上有响应作为判定 受试者是否已被追原虫感染的指标的情况下，却可高达95. 8%的检出率（且假阳性率 低至1. 9% )诊断追疾，进而诊断追疾。
[0007] 因此，本发明包括：
[000引 1. 一种试剂盒，其包括一个或多个固体载体，W及独立地连接于所述一个或多个 固体载体上的下述多肤集合1 :
[0009] SEQ ID NO :1所示的多肤或其变体；
[0010] SEQ ID NO :2所示的多肤或其变体； W11] SEQ ID NO :3所示的多肤或其变体； 阳01引 SEQ ID NO :4所示的多肤或其变体； 阳01引 SEQ ID NO :5所示的多肤或其变体；
[0014] SEQ ID NO :6所示的多肤或其变体； 阳01引 SEQ ID NO :7所示的多肤或其变体；
[0016] SEQ ID NO :8所示的多肤或其变体；
[0017] SEQ ID NO :9所示的多肤或其变体； 阳01引 SEQ ID NO : 10所示的多肤或其变体；
[0019] SEQ ID NO : 11所示的多肤或其变体；
[0020] 沈Q ID NO : 12所示的多肤或其变体； 阳02U SEQ ID NO : 13所示的多肤或其变体；
[0022] 沈Q ID NO : 14所示的多肤或其变体； 阳02引 SEQ ID NO : 15所示的多肤或其变体讯
[0024] 沈Q ID NO : 16所示的多肤或其变体； 阳〇2引其中，变体是指：
[00%] (a)在亲本多肤中缺失、取代、插入和/或添加1个或多个氨基酸而得的，且具有与 亲本多肤等同的功能的多肤；或
[0027] 化）与亲本多肤具有50% W上氨基酸同源性，且具有与亲本多肤等同的功能的多 肤。
[0028] 2.根据权利要求1所述的试剂盒，其用于诊断追疾。
[0029] 3.根据权利要求2所述的试剂盒，其用于诊断恶性追原虫感染。
[0030] 4.根据权利要求1所述的试剂盒，其中，全部多肤独立地连接于同一固体载体上。
[0031] 5.下述多肤集合1在制备用于诊断追疾的试剂盒中的用途： 阳0巧多肤集合1
[0033] SEQ ID NO :1所示的多肤或其变体；
[0034] SEQ ID NO :2所示的多肤或其变体；
[0035] SEQ ID NO :3所示的多肤或其变体；
[0036] SEQ ID NO :4所示的多肤或其变体；
[0037] SEQ ID NO :5所示的多肤或其变体；
[0038] SEQ ID NO :6所示的多肤或其变体；
[0039] SEQ ID NO :7所示的多肤或其变体；
[0040] SEQ ID NO :8所示的多肤或其变体； 阳04U SEQ ID NO :9所示的多肤或其变体；
[0042] 沈Q ID NO : 10所示的多肤或其变体；
[0043] 沈Q ID NO :11所示的多肤或其变体；
[0044] 沈Q ID NO : 12所示的多肤或其变体；
[0045] 沈Q ID NO : 13所示的多肤或其变体；
[0046] 沈Q ID NO : 14所示的多肤或其变体；
[0047] SEQ ID NO : 15所示的多肤或其变体讯
[0048] 沈Q ID NO : 16所示的多肤或其变体；
[0049] 所述变体是指：
[0050] (a)在亲本多肤中缺失、取代、插入和/或添加1个或多个氨基酸而得的，且具有与 亲本多肤等同的功能的多肤；或
[0051] 化）与亲本多肤具有50% W上氨基酸同源性，且具有与亲本多肤等同的功能的多 肤。
[0052] 6.根据权利要求5所述的用途，其中，所述诊断追疾包括诊断恶性追感染。
[0053] 7. -种诊断受试者是否为追疾患者的方法，该方法包括：
[0054] 使用权利要求1~4中任一项所述的试剂盒检测SEQ ID NO :1~8所示的多肤或 其变体是否对受试者来源的血液样本有响应；其中， 阳化5] 当检测到分别来自下述多肤组1~16中的至少一个或一个W上多肤组中的至少 任意一个或一个W上的多肤对所述受试者来源的血液样本有响应时，判定受试者是追疾患 者；否则，判定受试者不是追疾患者；
[0056] 多肤组1 :SEQ ID NO :1所示的多肤或其变体；
[0057] 多肤组2 :SEQ ID NO :2所示的多肤或其变体；
[0058] 多肤组3 :SEQ ID NO :3所示的多肤或其变体；
[0059] 多肤组4 :SEQ ID NO :4所示的多肤或其变体； W60] 多肤组5 :SEQ ID NO :5所示的多肤或其变体； 阳06U 多肤组6 :SEQ ID NO :6所示的多肤或其变体； 阳06引多肤组7 :SEQ ID NO :7所示的多肤或其变体； 阳06引多肤组8 :SEQ ID NO :8所示的多肤或其变体；
[0064] 多肤组9 :SEQ ID NO :9所示的多肤或其变体； W65] 多肤组10 :SEQ ID NO : 10所示的多肤或其变体；
[0066] 多肤组11 :SEQ ID NO : 11所示的多肤或其变体；
[0067] 多肤组12 :SEQ ID NO : 12所示的多肤或其变体； W側多肤组13 :SEQ ID NO : 13所示的多肤或其变体； W例多肤组14 :SEQ ID NO : 14所示的多肤或其变体；
[0070] 多肤组15 :SEQ ID NO : 15所示的多肤或其变体讯 阳〇7U 多肤组16 :SEQ ID NO : 16所示的多肤或其变体； 阳0巧所述变体是指：
[0073] (a)在亲本多肤中缺失、取代、插入和/或添加1个或多个氨基酸而得的，且具有与 亲本多肤等同的功能的多肤；或
[0074] 化）与亲本多肤具有50% W上氨基酸同源性，且具有与亲本多肤等同的功能的多 肤。
[00巧]8根据权利要求7所述的方法，其中，所述血液样本为全血、血浆或血清。
[0076] 9.根据权利要求1~4中任一项所述的试剂盒、根据权利要求5或6的用途、或根 据权利要求7或8任一项所述的方法，其中，所述的多肤和变体来源于恶性追原虫。
[0077] 发巧的具体连施方式
[0078] 《化集合巧《化紀
[0079] 本说明书中，多肤集合1是下述多肤组1~16的全部：
[0080] 多肤组1 :SEQ ID NO :1所示的多肤或其变体，其中，SEQ ID NO :1所示的多肤相当 于恶性追疾原虫的红细胞结合蛋白-175的1486位~1502位； 阳0川多肤组2 :SEQ ID NO :2所示的多肤或其变体，其中，SEQ ID NO :2所示的多肤相当 于恶性追疾原虫的成熟带虫红细胞表面蛋白的223位~252位； 阳0間多肤组3 :SEQ ID NO :3所示的多肤或其变体，其中，SEQ ID NO :3所示的多肤相当 于恶性追疾原虫的裂殖子成帽蛋白1的286位~315位； 阳08引多肤组4 :SEQ ID NO :4所示的多肤或其变体，其中，SEQ ID NO :4所示的多肤相当 于恶性追疾原虫的裂殖子成帽蛋白1的346位~375位；
[00