一种分级快速半定量测试排卵胶体金试纸、试剂盒及检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物检测领域，设及一种医用检测耗材，具体设及一种分级快速半定 量测试排卵胶体金试纸、试剂盒及检测方法。
【背景技术】
[0002] 目前市面上大多数的排卵试纸都是采用胶体金方法进行检测的，但均只能告知被 检者是否在24-48小时内排卵，只能定性检测尿液中是否含有LH，只有当尿液中LH浓度> 25mIU/ml时T线 > (:线，用于预测育龄妇女的排卵时间，不能定量检测尿液中LH的浓度，不能 对育龄妇女的LH浓度和是否能正常排卵作出预判。
【发明内容】
[0003] 根据上述领域的需求和不足，本发明旨在提供一种分级半定量测试排卵胶体金试 纸，本发明试纸用于分级半定量快速检测人尿液中的LH的浓度，本发明方法利用不同浓度 的显示，一是可W绘制时间-浓度曲线，更精确的预测排卵时间，二是可W检测LH的不同浓 度，对是否能正常排卵作出预判，可W 了解女性机体激素水平。
[0004] 本发明的技术方案如下：
[0005] -种半定量测试排卵胶体金试纸，其特征在于，包括左侧试纸和右侧试纸，两侧试 纸在高度方向上包括基板支撑层、反应试剂载体吸附层，反应试剂载体吸附层固定在基板 支撑层上，且从加样端到手持端依次设有样品纤维垫，金标纤维垫，硝酸纤维素药膜，手持 端吸水材料垫，在金标纤维垫和手柄端吸水材料垫上覆盖有保护膜层，在硝酸纤维素药膜 上印制有条状的且均与试纸长度方向垂直的检测线1'1、了2、了3、1'4线和质控线(：线，从手持端 到加样端，左侧试纸反应区依次为C，T3，T1，右侧试纸反应区依次为C，T4，T2。
[0006] 在所述金标纤维垫上包被有胶体金标记的a-LH单抗;在所述1'1、了2、了3、了4线上分 别包被有包被浓度为0.5-lmg/ml，包被浓度为0.1-0.2，包被浓度为0.1-0.2mg/ml，包被浓 度为0.01-0.02mg/ml的β-LH抗体;所述质控线C包被有羊抗鼠 IgG多抗，其包被浓度为0.2- Im邑/ml。
[0007] 所述1'1、了2、了3、1'4线上的护1^抗体的单位面积包被量比值为50:10:10:1。
[0008] 所述试纸为测试条二合一、双联板，或双联笔。
[0009] -种分级快速半定量测试排卵胶体金双联试剂盒，其特征在于:包括上述的胶体 金试纸。
[0010] 还包括由盒体和盒盖构成的两个并列的盒封闭体，所述盒体内设有安装胶体金试 纸条的定位槽，所述盒体设有连接装置，两个盒体之间通过连接装置可拆卸式连接。当两个 试剂盒拆开时可分别单独使用。
[0011] 所述盒盖上均设有加样孔和结果观察孔;当所述胶体金试纸条放置于盒体内的定 位槽时，对应于盒盖加样孔处为样品纤维垫;对应于结果观察孔处为硝酸纤维素药膜。
[0012] 所述连接装置为两个，分别为可拆卸式装置1和可拆卸式装置2,并分别设于两个 盒封闭体的对应于加样孔和结果观察孔的边缘处。
[0013] 两个并列的试剂盒均为长方形。生产、安装、运输、使用、保存极为方便，简单大方。
[0014] 使用上述的半定量测试排卵胶体金试纸或双联试剂盒进行分级快速半定量测试 排卵的方法。
[00巧]技术效果：
[0016] 本发明通过四条检测线实现4种浓度的检测，左侧反应区包被有C、T3、T1^条线， T1为高灵敏度，最低能检测L田农度为lmIU/ml，T3最低能检测L田农度为25mIU/ml，右侧反应 区包被有C、T4、T2S条线，T2最低能检巧化LH浓度为5mIU/ml，T4最低能检巧化LH浓度为 65mIU/ml〇
[0017] 本方法一是采用包被不同浓度的捕捉抗体可W捕捉不同浓度的LH，来区分不同的 检测灵敏度，二是采用包被不同位置的捕捉抗体，来区分不同的检测灵敏度。如果尿液中含 有LH，将与金标a-LH单抗反应形成复合物，在层析作用下，被预先固定在膜上的β-LH单抗捕 获，在检测区内形成1-4条紫红色条带(T1/T2/T3/T4)，根据尿液中HCG的浓度决定与反应区 的1'1、了2、了3、1'4哪条线反应。
[0018] 本发明产品在使用时，同时在两侧试纸的加样端加入尿液，根据检测线的显色情 况从而预测排卵时间，可W检测LH的不同浓度，对是否能正常排卵作出预判，从而了解女性 机体激素水平。
[0019]本发明可从根据所检测的LH情况，预测排卵时间和女性生理周期hLH水平，根据W 下参考值，将测试条设计成四条检测线：
[0020] LH值参考范围(单位:IU/L)
[0021] 男：1.5-9.3
[0022] 女:卵泡期1.9-12.5
[0023] 排卵期8.7-76.3
[0024] 黄体期0.5-16.9 [00巧]绝经期15.9-54 [00%]妊娠期 0-1.5
[0027] 血LH的浓度，
[0028] 在排卵前期为2~15mIU/ml [00巧]排卵期为30~lOOmIU/ml，
[0030] 卵后期为 4 ~lOmIU/ml。
[0031] 一般在非排卵期的正常值是2~25mIU/ml。
[0032] 设计四条检测线的意义：
[0033] T1敏感性lmIU/ml:Tl线会显色，提示有可能未在排卵期。
[0034] T2敏感性5mIU/ml: T1和T2线会显色，提示有可能未在排卵期。
[0035] T3敏感性25mIU/ml: T1、Τ2和T3线会显色，提示有可能在排卵期。
[0036] Τ4敏感性65mIU/ml: Τ1、Τ2、Τ3和Τ4线会显色，提示有可能在排卵期。
[0037] 如果测试结果在女性的生理周期中一直只有T1显色或四条线全部显色考虑异常 情况。
[0038] 本发明产品及方法为半定量测试，可W得知女性生理周期尿液中L田农度范围值， 从而利用不同含量的显示用于排卵的预测，W及女性生理周期LH水平是否正常。本发明试 纸利用不同浓度的显示用于排卵的预测，可预估女性不同生理周期的不同促黄体生成素 (W下简称LH)浓度，用W预估排卵的时间，根据LH的高低可W判断是否为正常LH水平，能否 正常排卵。
[0039] 在月经周期LH的释放高峰与卵巢排卵有着密切关系，LH高峰一经出现，预示24-36 小时卵巢排卵，因此可W在月经周期中监测血清LH峰值(排卵期为30~100mIU/ml)，W确定 最佳受孕时间。LH可促使女性排卵并且形成黄体分泌孕激素，是受孕的一个条件，但是如果 运个平衡被打破就会出现受孕障碍，那么，LH都有一个标准值，LH由腺垂体前叶嗜碱性细胞 所分泌。检查的时候如果LH不正常，出现偏高或者偏低，就会影响雌激素功能，最终会导致 女性不能正常排卵。LH偏高与机体内分泌素乱有关，出现LH偏高可使卵巢功能失调，使雌孕 激素水平分泌失衡，从而影响卵泡的发育，导致排卵障碍，也可造成不孕症。
[0040] 现有方法学试剂的现状及局限
[0041] 1、25年前经典传统的方法学、产品设计和使用理念；
[0042] 2、被人垢病的单一定性主观性判读或经验型猜测结果；
[0043] 3、20多年如一日缺乏创新和研发；
[0044] 4、良莽不齐的厂家，伪劣品质的粗糖乱造，(ffiM和假冒品牌，价格贫瘡和市场的混 乱，被作死的产品。
[0045] 本发明新方法和试剂特点
[0046] 1、新概念的引领使用，方法学原剂型生命周期的延展和更新；
[0047] 2、科学客观地实现了从定性到半定量的快速检测；
[0048] 3、依然是用尿液样本测试，较比血定量更有实用性、普遍性和经济性；
[0049] 4、分级区划可W对比分析预测排卵期天数，甚至到12小时之内；
[0050] 5、辅助性的配件还可W勾画出排卵期曲线。
【附图说明】：
[0051 ]图1本发明左侧试纸的俯视图；
[0052] 图2本发明右侧试纸的俯视图；
[0053] 图3本发明试纸的纵向剖面图；
[0054] 图4本发明双联试剂盒俯视图；
[0055] 图5本发明双联试剂盒仰视图；
[0056] 其中：1-手持端，2-质控线C线，3-检测线T1线，4-MAX标志线，5-加样端，6-硝酸纤 维素药膜层，7-样品纤维层，8-手持端吸水材料层，9-金标纤维层，10-大无纺布，11-小无纺 布，12-手持端胶带，13-箭头胶带，14-基板支撑层，15-检测线T3线，16-检测线T2线，17-检 测线T4线，18-盒盖，19-盒体，20-加样孔，21-结果观察孔，22-可拆卸连接装置1,23-可拆卸 连接装置2。
【具体实施方式】：
[0057] 提供下述实施例是为了更好地进一步理解本发明，并不局限于所述最佳实施方 式，不对本发明的内容和保护范围构成限制，任何人在本发明的启示下或是将本发明与其 他现有技术的特征进行组合而得出的任何与本发明相同或相近似的产品，均落在本发明的 保护范围之内。
[0058] 根据胶体金检测的原理，将本发明的胶体金试纸条的加样端浸入尿液中，或者在 加样端的样品纤维层滴加尿液，尿液中的物质在纤维层材料的毛细作用下沿着试纸条从加 样端向手持端移动，当尿液中含有LH时，尿液随着层析作用先与胶体金标记的a-LH抗体反 应，当爬行至反应区又与β-LH抗体反应，根据尿液中LH的含量决定与反应区的Τ1、Τ2、Τ3、Τ4 哪条线反应。
[0059] 实施例1.试剂盒的制备
[0060] 1试纸条的制备：
[0061] 1.1 包被
[0062] 1.1.1准备：用ρΗ7.410mM PBS稀释β-LH单抗，分别配制成0.5mg/ml (用于Τ1)， 0.1 mg/ml (用于Τ2、Τ3)，0 .Olmg/ml(用于T4);用pH7.410mM PBS稀释抗鼠 IgG多抗，配制成 0.2mg/ml用于C线的包被。将硝酸纤维素膜裁切成270mm*19mm。
[0063] 1.1.2 包被
[0064] 1.1.2.1左侧反应区包被
[0065] 用BIODOT包被机进行包被，左侧反应区的包被尺寸为C线上边缘距膜上边缘为 6.5111111，1!下边缘距膜下边缘为6.5111111，然后将(：、了3、1'1^条线均分，^条线中屯、线间距约为 2.6臟，口'线宽度为0.8±0.1臟，^条线的包被量为0.祉1/畑1，包被速度为70111111/3。包被完毕 后，干燥6小时，干燥溫度控制在35-40°C，湿度^ 35%，干燥后加干燥剂4-30°C密封保存。
[0066] 1.1.2.2右侧侧反应区包被<