一种中成药“益肾补骨液”hplc特征图谱的构建方法

文档序号:9909202阅读:468来源:国知局
一种中成药“益肾补骨液” hplc特征图谱的构建方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于中药技术领域,具体涉及中成药的HPLC特征图谱的构建方法。
【背景技术】
[0002] 益肾补骨液(骨碎补、何首乌、茯苓、续断、白芍、当归、党参、熟地黄、黄精等十二味 药材组成)标准收载于部颁标准中药成方制剂第十册,标准编号:(WS 3-B-2020-95),公开了 益肾补骨液的质量控制方法。本品质量标准中仅有性状、检查、鉴别项,没有含量测定项,用 于产品生产中的质量控制还难于精准。

【发明内容】

[0003] 本发明的目的是提供一种中成药"益肾补骨液" HPLC特征图谱的构建方法
[0004] 用于"益肾补骨液"生产中的质量控制,克服现有的质量控制方法存在的上述不 足。
[0005] 本发明的HPLC特征图谱的构建方法包括以下步骤:
[0006] (1)供试品溶液的制备:取本品5~15ml蒸至近干,加水25~35ml使溶解,加乙醚25 ~35ml振摇提取,弃去乙醚液,水液用乙酸乙酯振摇提取3次,每次25~35ml,合并乙酸乙酯 液,蒸干,残渣加甲醇溶解定容至5ml量瓶中,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液。
[0007] (2)对照品溶液的制备:取柚皮苷照品适量,精密称定,分别加甲醇制成每lml约含 O.lmg的溶液,即得。
[0008] (3)测定:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5~15μ1,注入高效液相色谱 仪,记录120分钟内的色谱图,图谱数据导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统.》2004Α版 分析,即得"益肾补骨液"的特征图谱。
[0009] 前述方法中,所述高效液相色谱测定的色谱条件为:
[0010] 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈为流动相Α,以0.02%磷酸溶液为流动 相Β,进行梯度洗脱;流速0.8~1.2ml ·π?η-1,柱温30~40°C,检测波长225~235nm;理论塔 板数按柚皮苷峰计算应不低于3000。
[0011]优选的,所述的一种"益肾补骨液"的HPLC特征图谱的构建方法,包括以下步骤: [0012] (1)供试品溶液的制备:取本品l〇ml蒸至近干,加水30ml使溶解,加乙醚30ml振摇 提取,弃去乙醚液,水液用乙酸乙酯振摇提取3次,每次30ml,合并乙酸乙酯液,蒸干,残渣加 甲醇溶解定容至5ml量瓶中,摇匀,过0.22μπι的微孔滤膜,取续滤液作为供试品溶液。
[0013 ] (2)对照品溶液的制备:取柚皮苷照品适量,精密称定,分别加甲醇制成每lml约含 O.lmg的溶液,即得。
[0014] (3)测定:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5~15μ1,注入高效液相色谱 仪,记录120分钟内的色谱图,图谱数据导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统.》2004Α版 分析,即得"益肾补骨液"的特征图谱。
[0015] 所述高效液相色谱测定的色谱条件优选为:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂, 以乙腈为流动相A,以0.02%磷酸水溶液为流动相B,梯度洗脱,流速1 .Oml · min-1,柱温35 °C,检测波长230nm,理论塔板数按柚皮苷峰计算应不低于3000。
[0016] 梯度洗脱过程中,流动相A、B的比例变化为:0~10min,A相5%,B相95% ;10~ 30min,A相 14%-17%,B相80%-83% ;30~65min,A相 17%-20%,B相83%-80% ;即梯度洗 脱程序表1:
[0017]
[0018]如前述一种"益肾补骨液"的HPLC特征图谱的构建方法得到的特征图谱,所述图谱 中有7个特征峰。对7个特征峰进行归属:1号特征峰归属为白芍药材、2号特征峰归属为何首 乌药材、3号和5号(柚皮苷)特征峰归属为骨碎补药材、4号和7号特征峰归属为续断药材、6 号特征峰归属为陈皮药材。
[0019] 有益效果:
[0020] 1.本发明建立了"益肾补骨液" HPLC特征图谱共有模式,标定了 7个共有峰,建立的 特征图谱技术含量高,避免了益肾补骨制剂质量控制的单一性和片面性,减少了人为处理 产品质量达标的可能性。
[0021] 2.本发明选择在230nm波长处进行测定,其出峰较多,反映的信息较完全;各个峰 吸收值良好,基线平稳,也避免了近紫外杂质峰较大吸收情况。
[0022] 3.本发明方法所得一种"益肾补骨液"的HPLC特征图谱的构建方法图谱的峰多,峰 形好,易于鉴别,相似性高,专属性强,稳定性好,准确可靠。
【附图说明】
[0023] 图1是本发明测得的益肾补骨液高效液相特征图谱;
[0024] 图2是11批益肾补骨液特征图谱叠加图;
[0025]图3是益肾补骨液特征图谱共有峰归属图;
【具体实施方式】
[0026] 实施例1
[0027] 一种益肾补骨液的HPLC特征图谱的构建方法,包括以下步骤:
[0028] (1)供试品溶液的制备:供试品溶液的制备:取本品5ml蒸至近干,加水25ml使溶 解,加乙醚25ml振摇提取,弃去乙醚液,水液用乙酸乙酯振摇提取3次,每次25ml,合并乙酸 乙酯液,蒸干,残渣加甲醇溶解定容至5ml量瓶中,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液。
[0029] (2)对照品溶液的制备:取柚皮苷照品适量,精密称定,分别加甲醇制成每lml约含 O.lmg的溶液,即得。
[0030] (3)测定:色谱条件:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以乙腈为流动相A,以 0.02%磷酸水溶液为流动相B,按下表梯度洗脱程序进行梯度洗脱;流速1.0ml ·π?η-1,柱 温30°C,检测波长225nm,理论塔板数按柚皮苷峰计算应不低于3000;分别精密吸取对照品 溶液与供试品溶液各1〇μ1,注入高效液相色谱仪,记录120分钟内的色谱图,图谱数据导入 《中药色谱指纹图谱相似度评价系统.》2004Α版分析,即得益肾补骨液的特征图谱。
[0031] 表2
[0032]
[0033] 实施例2
[0034] 一种益肾补骨液的HPLC特征图谱的构建方法,包括以下步骤:
[0035] (1)供试品溶液的制备:供试品溶液的制备:取本品10ml蒸至近干,加水30ml使溶 解,加乙醚30ml振摇提取,弃去乙醚液,水液用乙酸乙酯振摇提取3次,每次30ml,合并乙酸 乙酯液,蒸干,残渣加甲醇溶解定容至5ml量瓶中,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液。
[0036] (2)对照品溶液的制备:取柚皮苷照品适量,精密称定,分别加甲醇制成每lml约含 O.lmg的溶液,即得。
[0037] (3)测定:色谱条件:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以乙腈为流动相A,以 0.02 %磷酸水溶液为流动相B,按下表梯度洗脱程序进行梯度洗脱;流速1.0ml · min-1,柱 温35 °C,检测波长230nm,理论塔板数按柚皮苷峰计算应不低于3000;分别精密吸取对照品 溶液与供试品溶液各1〇μ1,注入高效液相色谱仪,记录120分钟内的色谱图,图谱数据导入 《中药色谱指纹图谱相似度评价系统.》2004Α版分析,即得益肾补骨液的特征图谱。
[0038] 实施例3
[0039] 一种益肾补骨液的HPLC特征图谱的构建方法,包括以下步骤:
[0040] (1)供试品溶液的制备:供试品溶液的制备:取本品15ml蒸至近干,加水35ml使溶 解,加乙醚35ml振摇提取,弃去乙醚液,水液用乙酸乙酯振摇提取3次,每次35ml,合并乙酸 乙酯液,蒸干,残渣加甲醇溶解定容至5ml量瓶中,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液。
[0041] (2)对照品溶液的制备:取柚皮苷照品适量,精密称定,分别加甲醇制成每lml约含 O.lmg的溶液,即得。
[0042] (3)测定:色谱条件:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以乙腈为流动相A,以 0.02 %磷酸水溶液为流动相B,按下表梯度洗脱程序进行梯度洗脱;流速1.0ml · min-1,柱 温40°C,检测波长235nm,理论塔板数按柚皮苷峰计算应不低于3000;分别精密吸取对照品 溶液与供试品溶液各1〇μ1,注入高效液相色谱仪,记录120分钟内的色谱图,图谱数据导入 《中药色谱指纹图谱相似度评价系统.》2004Α版分析,即得益肾补骨液的特征图谱。
[0043] 实验例:
[0044] 1.仪器与试药
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