一种超高效液相色谱法测定藿香正气滴丸中7种成分含量的方法
【技术领域】：
[0001] 本发明涉及一种药物成分的检测方法，特别涉及一种超高效液相色谱法测定藿香 正气滴丸中7种成分含量的方法，所述方法包括制备藿香正气滴丸供试品溶液，将其注入 超高效液相色谱仪，采用梯度洗脱，得到橙皮苷、甘草酸、欧前胡素、和厚朴酚、异欧前胡素、 厚朴酚和苍术素7个种成分的含量。
【背景技术】
[0002] 藿香正气滴丸是天津天士力制药股份有限公司生产的独家品种，该制剂包括广藿 香油、苍术、陈皮、厚朴等10味药材组成的复方制剂，具有解表化湿，理气和中的功效，用于 头痛昏重、脘腹胀痛、呕吐泄泻、胃肠型感冒等。作为天士力研发的现代中药代表剂型，具有 药物稳定性高、不易水解氧化、起效快、无异味、口感好、携带方便等特性。
[0003] 现有藿香正气滴丸的质量标准是采用高效液相色谱法同时测定橙皮苷、厚朴 酚及和厚朴酚，作为检测和控制陈皮及厚朴的含量指标，现已申请专利（专利申请号为 CN201110269071. 8)。为了能够更加严格的控制该制剂的质量并且提高质量检测标准，本发 明应用超高效液相色谱法（UPLC)同时测定藿香正气滴丸中橙皮苷、甘草酸、欧前胡素、和 厚朴酚、异欧前胡素、厚朴酚和苍术素7种成分含量。本方法可在20min内完成一次色谱分 析，被测定的7种成分色谱峰均有良好的分离度，方法精密度、重复性的RSD均小于2. 0% ; 在室温条件下24h内稳定；各成分均有较宽的线性范围和良好的线性关系（r > 0. 9995); 平均加样回收率97. 5-101. 4%，RSD均小于2. 0%。本发明的方法操作简便，测定结果准确 可靠，可用于藿香正气滴丸的质量控制。
【发明内容】
[0004] 本发明涉及一种超高效液相色谱法测定藿香正气滴丸中7种成分含量的方法，该 方法包括以下步骤：
[0005] 步骤1 :供试品溶液的制备：将藿香正气滴丸溶解于甲醇，过滤，得到滤液
[0006] 步骤2 :用超高效液相色谱仪测定供试品溶液：将供试品溶液注入超高效液相色 谱仪，得到色谱图；
[0007] 步骤3 :根据色谱图计算供试品溶液中7种成分的含量：以外标法计算供试品溶液 中7种成分的含量，其中所述的7种成分为橙皮苷、甘草酸、欧前胡素、和厚朴酚、异欧前胡 素、厚朴酚、苍术素。
[0008] 所述超高效液相色谱仪，色谱条件如下：
[0009] 色谱柱：C18 色谱柱（lOOmmX 2. 1mm，1. 7 μ m);
[0010] 流动相为乙腈-ο. 1-0. 3%甲酸水溶液，
[0011] 流动相优选乙腈-0. 2%甲酸水溶液
[0012] 梯度洗脱程序如表1所示；
[0013] 表1梯度洗脱程序
[0014]
[0015] 流速为 0· 2 ~0· 6mL/min，优选为 0· 4mL/min ；
[0016] 紫外检测波长：甘草酸、欧前胡素、异欧前胡素为250nm ;橙皮苷为284nm ;厚朴酉分、 厚朴酸为290nm ;苍术素为336nm ;;
[0017] 优选双通道紫外检测器，通道A :甘草酸、欧前胡素、异欧前胡素为250nm;通道B : 0-10min，橙皮苷为284nm ;10· 01-15min，和厚朴酚、厚朴酚为290nm ;15· 01-20min，苍术素 为 336nm ;
[0018] 柱温：25°C~35°C，优选为 30°C ;
[0019] 进样量：1μL~10yL，优选为2yL。
[0020] 其中，步骤1 :供试品溶液的制备；方法如下：取0. 5-1. 5g藿香正气滴丸，精密称 定，精密加入甲醇l〇_30mL，称定重量，超声处理15-25min，放至室温后，用甲醇补足减失的 重量，用0. 2-0. 3 μ m微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。
[0021] 优选的，步骤1 :供试品溶液的制备；方法如下：取约1. Og藿香正气滴丸，精密称 定，精密加入甲醇20mL，称定重量，超声（500W，40kHz)处理20min，放至室温后，用甲醇补足 减失的重量，用〇. 22 μ m微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。
[0022] 其中，步骤3、计算供试品溶液中橙皮苷、甘草酸、欧前胡素、和厚朴酚、异欧前胡 素、厚朴酚、苍术素的含量，使用事先制备的标准对照图谱；所述标准对照图谱的制备，方法 如下：分别精密称取橙皮苷、甘草酸、欧前胡素、和厚朴酚、异欧前胡素、厚朴酚、苍术素对照 品适量，加甲醇溶解并定容，制得质量浓度分别为橙皮苷0. 6000mg/mL、甘草酸0. 2024mg/ mL、欧前胡素0. 0806mg/mL、和厚朴酉分0. 4032mg/mL、异欧前胡素0. 0230mg/mL、厚朴酉分 0. 3016mg/mL、苍术素0. 0416mg/mL的混合对照品储备液。精密量取混合对照品储备液 l.OOmL，置10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得混合对照品溶液。将混合对照品溶 液注入超高效液相色谱仪，得到色谱图；即为标准对照图谱。
[0023] 本发明的核心在于色谱条件的选择，如何解决同时测定7种有效成分的含量的色 谱条件，是一大挑战，本发明为此进行了大量的筛选工作，最终得到本发明的色谱条件。另 外，本发明对供试品溶液的配制也进行了筛选，结果适用性极好。
[0024] 本发明所选用的仪器与材料如下：
[0025] ACCURICY UPLC H CLASS系统（包括二元超高压溶剂系统、自动进样恒温样本管理 器、TUV检测器、Empower 2色谱工作站，美国waters公司）；Mettler Toledo XS105分析 天平（瑞士 Mettler Toledo公司）；KQ-500DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限 公司）；Millipore Simplicity 超纯水系统。
[0026] 对照品橙皮苷（批号：110721-201115)、欧前胡素（批号：110826-201214)、 和厚朴酚（批号：110730-201313)、异欧前胡素（批号：110827-201109)、厚朴酚（批 号：110729-200412.)、苍术素（批号：11924-201303)均购于中国食品药品检定研究院， 供含量测定用，甘草酸（批号=17239-64,纯度98.0% )购于NACALAI TES0UE，INC。甲醇 (色谱纯，美国Merck公司），乙腈（色谱纯，美国Merck公司），甲酸（色谱纯，瑞士 Fluke 公司），冰乙酸（色谱纯，天津康科德有限公司），磷酸（色谱纯，天津市光复精细化工研究 所）。
[0027] 藿香正气滴丸（天津天士力制药股份有限公司生产11批，批号分别为2014C08、 131128、131201、131202、131203、131204、131205、131206、131207、131208、131209);藿香正 气滴丸为市售或应用申请号为CN03145667. 7中的方法制备所得。
[0028] 本发明优选的实验方法、色谱条件和溶剂提取方法，是经过筛选得到的，筛选过程 如下：
[0029] 混合对照品溶液的制备
[0030] 分别精密称取橙皮苷、甘草酸、欧前胡素、和厚朴酚、异欧前胡素、厚朴酚、苍术 素对照品适量，加甲醇溶解并定容，制得质量浓度分别为橙皮苷0. 6000mg/mL、甘草酸 0· 2024mg/mL、欧前胡素 0· 0806mg/mL、和厚朴酚 0· 4032mg/mL、异欧前胡素 0· 0230mg/mL、厚 朴酚0. 3016mg/mL、苍术素0. 0416mg/mL的混合对照品储备液。精密量取混合对照品储备液 1. 00mL，置10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得混合对照品溶液。
[0031] 1、藿香正气滴丸7种成分含量测定方法学考察
[0032] (1)系统适用性试验
[0033] 取供试品溶液，色谱条件为：ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱（100mmX2· 1mm， 1. 7 μ m);流动相为乙腈-0. 2 %甲酸水溶液，梯度洗脱程序如表1所示；流速为0. 4mL/ min ;检测波长：通道A :甘草酸、欧前胡素、异欧前胡素为250nm ;通道B :0-10min，橙皮苷 为284nm ;10. 01-15min，和厚朴酚、厚朴酚为290nm ;15. 01-20min，苍术素为336nm ;柱温： 30°C;进样量：2 μ L。进样，结果7种被测定成分均能达到基线分离，与相邻色谱峰的分离度 均大于1. 5,以各成分色谱峰计算理论塔板数均超过20000,峰形较好。UPLC色谱图见图1