一种绵马贯众药材中山柰苷的含量测定方法

文档序号:9921151阅读:511来源:国知局
一种绵马贯众药材中山柰苷的含量测定方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种中药绵马贯众药材的含量测定方法,特别涉及一种利用液相色 谱-串联三重四级杆质谱(HPLC-MS/MS)测定绵马贯众药材中山柰苷含量的方法,属于医药
技术领域。
【背景技术】
[0002] 绵马贯众为鳞毛蕨科植物粗莖鳞毛蕨Dryopteris crassirhizoma Nakai的干燥 根茎和叶柄残基,具有清热解毒、驱虫的功效,可以用于虫积腹痛,疮疡。
[0003] 绵马贯众中活性成分主要包括间苯三酚类、黄酮类、萜类等。目前,该药材活性成 分的含量研究主要集中在间苯三酚类成分,例如肖国君等公开了绵马贯众中一种间苯三酚 单体的高效液相色谱含量测定方法[药物分析杂志,2005,25(5): 502-504],高增平等公开 了绵马贯众中总间苯三酚含量的紫外分光光度测定方法[北京中医药大学学报,2009,32
[4] :259-262],马国祥等公开了绵马贯众中两种间苯三酚单体的薄层色谱扫描含量测定方 法[中国药科大学学报,1994,25(6): 376-377]。
[0004] 根据结构中是否存在糖基,黄酮类成分可以分为黄酮苷元和黄酮糖苷。文献报道, 绵马贯众中含有去甲氧基荚果蕨素等多种黄酮苷元和山柰苷(即山柰素-3,7_0-a-L-二鼠 李糖苷)等多种黄酮糖苷[Chem Pharm Bull,2008,56(5) :711-714],该文献只完成了化合 物结构确证,未进行上述成分的含量测定。柳芳等公开了绵马贯众中一种黄酮苷元的高效 液相色谱含量测定方法[中国实验方剂学杂志,2012,18(10): 130-132],但一方面该方法提 取溶剂为纯甲醇,无法完全提取药材中大极性的黄酮糖苷,另一方面使用的紫外检测器不 够灵敏,不能测定微量、痕量成分。
[0005] 上述已公开的含量测定方法中,所用提取溶剂包括苯、乙醚、甲醇、95%乙醇等,因 而测定的目标成分多为极性相对较小的间苯三酚、黄酮苷元类成分。而绵马贯众的中药制 剂多以水为提取溶剂,例如《中国药典》2015年版一部收载的抗感系列制剂(颗粒、口服液) 和连花清瘟系列制剂(片、胶囊、颗粒),这类制剂中绵马贯众的药效物质应为黄酮糖苷等大 极性成分,如山柰苷等。目前,国内外尚无能够准确测定绵马贯众中黄酮糖苷类成分含量的 方法。《中国药典》2015年版一部收载的绵马贯众药材,以及处方中含有该药材的6个中药制 剂品种项下,均没有绵马贯众指标成分的含量测定项目。
[0006] 周莉等公开了一种测定罗汉果茎、叶及其提取物中山柰苷的HPLC含量测定方法, 以紫外检测器在345nm进行检测,山柰苷线性范围为进样量0.209~1.045yg[中国现代中 药,2010,12(11) :24-25,31]。马秉智等公开了一种测定单芽狗脊中山柰苷的HPLC含量测定 方法,以紫外检测器在265nm进行检测,山柰苷线性范围为进样量0.0844~0.4220yg[中国 实验方剂学杂志,2012,18 (12): 130-131 ]。上述文献方法检测限相对较高,以上述文献方法 对绵马贯众药材进行测定,样品中未能检出山柰苷色谱峰。
[0007] 闫利华等将扶芳藤药材中山柰苷进行水解,以紫外检测器测定其苷元山柰素的含 量[中国中药杂志,2015,40(10): 1877-1886]。按照文献方法,药材中其他山柰素的糖苷也 会被水解,因而测定结果不能反映原药材山柰苷单体的含量。另外,该文献利用Waters ACQUITY UPLC/Xevo G2 QTOF液质联用仪(负离子模式)对扶芳藤药材中山柰苷等成分进行 了定性分析,但未能进行定量测定。文献采用的Q-T0F质谱检测器在定量分析方面具有局限 性,难以准确定量。
[0008] 综上所述,现有技术中无能够准确测定绵马贯众中黄酮糖苷类成分含量的方法, 而对其他药材中山柰苷的含量测定方法也并不适用于绵马贯众药材。

【发明内容】

[0009] 针对现有技术的不足,本发明的目的是提供一种灵敏、准确地测定绵马贯众药材 中黄酮糖苷单体一山柰苷含量的方法,具体地提供一种利用液相色谱-串联三重四级杆质 谱测定绵马贯众药材中山柰苷含量的方法。
[0010] 发明概述
[0011] 本发明使用液相色谱-三重四级杆质谱联用技术,对中药材绵马贯众中山柰苷进 行了含量测定,该方法操作简便,分析数据准确。
[0012] 本发明的技术方案如下:
[0013] -种绵马贯众药材中山柰苷的含量测定方法,步骤如下:
[0014] 对照品溶液的制备:取山柰苷对照品适量,精密称定,加甲醇制成每lmL含0.5yg的 溶液,即得;
[0015] 供试品溶液的制备:取绵马贯众药材,粉碎成细粉,取约〇. 5g,精密称定,置具塞锥 形瓶中,精密加入体积份数40 %~70 %的甲醇溶液50mL,密塞,称定重量,超声处理15~60 分钟,放冷,再称定重量,用体积份数40%~70%的甲醇溶液补足减失的重量,摇匀,滤过, 取续滤液,即得;
[0016] 色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以体积份数 0.01 %~0.5 %的甲酸乙腈溶液为流动相A,体积份数0.01 %~0.5 %的甲酸溶液为流动相 B,采用梯度洗脱方式:0min440min441min-46min,流动相A: 10%430%490%-90%, 流动相B: 90 % -70 % - 10 % - 10 % ;流速为0.8~1. OmL/min;采用三重四级杆质谱检测器, 电喷雾正离子模式,进行多反应监测,选择m/z 579.2-287.1,433.1作为检测离子对,质谱 分流比2:1~5:1;进样量10yL时,对照品溶液m/z 579.2-287.1提取离子流图中山柰苷色 谱峰信噪比应大于10:1;
[0017] 测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1〇此,注入液相色谱仪,以对照 品溶液m/z 579.2-287.1,433.1离子对定位山柰苷色谱峰,测定对照品溶液和供试品溶液 m/z579.2-287.1或m/z 579.2-433.1提取离子流图中相应色谱峰面积,以外标法进行计 算,即得供试品中的山柰苷含量。
[0018] 所述的梯度洗脱方式为梯度性地改变洗脱液的组分(成分、离子强度等)或pH,以 期将层析柱上不同的组分在合理的时间内洗脱出来的方法。所述的体积份数0.01 %~ 0.5 %的甲酸乙腈溶液是指甲酸在乙腈中的体积浓度。
[0019] 根据本发明优选的,所述的供试品溶液的制备中提取溶剂甲醇溶液的体积分数为 50% 〇
[0020] 根据本发明优选的,所述的供试品溶液的制备中超声处理时间为30分钟。
[0021] 根据本发明优选的,所述的色谱条件与系统适用性试验中流动相A为体积份数 0.02 %的甲酸乙腈溶液,流动相B为体积份数0.02 %的甲酸溶液。
[0022] 根据本发明优选的,所述的色谱条件与系统适用性试验中流动相流速为l.OmL/ min〇
[0023] 根据本发明优选的,所述的色谱条件与系统适用性试验中质谱分流比为3:1。
[0024]根据本发明优选的,所述的测定法中测定m/z 579.2-287.1提取离子流图中相应 色谱峰面积。
[0025]根据本发明优选的,一种绵马贯众药材中山柰苷的含量测定方法,步骤如下:
[0026] 对照品溶液的制备:取山柰苷对照品适量,精密称定,加甲醇制成每lmL含0.5yg的 溶液,即得;
[0027] 供试品溶液的制备:取绵马贯众药材,粉碎成细粉,取约0.5g,精密称定,置具塞锥 形瓶中,精密加入体积份数50%的甲醇溶液50mL,密塞,称定重量,超声处理30分钟,放冷, 再称定重量,用体积份数50 %的甲醇溶液补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得;
[0028] 色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以体积份数 0.02 %的甲酸乙腈溶液为流动相A,体积份数0.02 %的甲酸溶液为流动相B,采用梯度洗脱 方式:0min440min441min-46min,流动相A: 10 % -30 % -90 % -90 %,流动相B: 90 % - 70%410% - 10%;流速为1.0111171^11;采用三重四级杆质谱检测器,电喷雾正离子模式,进 行多反应监测,选择m/z 579.2-287.1,433.1作为检测离子对,质谱分流比3:1;进样量10μ L时,对照品溶液m/z 579.2-287.1提取离子流图中山柰苷色谱峰信噪比应大于10:1;
[0029] 测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10yL
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