一种吡噻菌胺残留量的gc-ei-ms测定方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种吡噻菌胺残留量的GC-EI-MS测定方法，更具体地说是采用气相色 谱-电子轰击离子源-质谱(GC-EI-MS)定性定量测定粮谷、猪肉、牛肉、羊肉、鸡肉等动物肌 肉及制品等复杂基质的动植物源性食品中残留的吡噻菌胺含量的方法，属于农药残留量的 测定技术领域。
【背景技术】
[0002]吡噻菌胺(Penthiopyrad)是日本三井化学公司研发的新颖酰胺类杀菌剂，英文通 用名为 penthiopyrad，试验代号：MTF-753，商品名为 Afetofluapro XAS 登录号：183675-82-3,化学名称为(RS)-N-[2-(l，3-二甲基丁基)-3-噻吩基]-甲基-3-(三氟甲基)-1Η-吡唑-4-甲酰胺，化学结构式为：
[0003] 吡噻菌胺与现有的羧酰胺类杀菌剂有不同的杀菌谱，除了与现有羧酰胺类杀菌剂 一样对担子菌有效外，其对子囊菌、不完全菌亦有效，现被推荐用于防治对其他杀菌剂具抗 性的灰霉病和白粉病。该药剂通常使用的有效成分剂量为100~200g/hm 2,其被广泛应用于 果树、蔬菜、草坪等众多作物，防治锈病、菌核病、灰霉病、霜霉病、苹果黑星病和白粉病。 Penthiopyrad于2008年在日本获得首次批准，用于果树、蔬菜和观赏植物，后又于2011年11 月在加拿大获准登记。商标名为Vertisan和Fontelis(均以penthiopyrad 200g/L为其活性 成分）和Treoris (penthiopyrad 100g/L+chlorothalonil (百菌清）250g/L)的3个产品主要 用在果树、蔬菜和田间作物上，在实际应用发现吡噻菌胺具有很广阔的应用前景。
[0004] 随着吡噻菌胺的登记、推广和使用，作为我国主要出口市场的欧盟、加拿大和澳大 利亚等国家制定了其在蔬菜、水果、粮谷和畜产品等食品农产品中的最大允许残留量 (MRL)，加拿大规定吡噻菌胺在果蔬、坚果、粮谷及畜产品等动物源性食品中的MRL为0.01~ 30mg/kg;澳大利亚规定吡噻菌胺在果蔬、坚果、粮谷及畜产品等动物源性食品中的MRL为 0.01~5mg/kg;欧盟规定吡噻菌胺在果蔬、坚果、粮谷及畜产品等动物源性食品中的MRL为 0.01~30mg/kg;欧盟、日本等国家规定若田间使用农药没有在该国家登记，没有制定相应 的残留限量标准时，出口至其国家的食品农产品包括畜禽肉等动物源性食品中残留限量均 实行0.01mg/L的"一律标准"。
[0005] 现阶段，对吡噻菌胺残留量测定方法的研究较少，报道的检测方法主要为蔬菜和 水果中吡噻菌胺残留检测方法，这些检测方法均采用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)测定蔬 菜和水果中吡噻菌胺残留量的检测方法，使用LC-MS/MS测定食品农产品中农药残留具有快 速、简便、灵敏度高等优点，但由于其价格较昂贵，很多检测机构、企业或科研院所未配置该 仪器或配置台数较少，由于不同的化合物采用LC-MS/MS检测时，需使用不同的流动相或色 谱柱，这样需要不断更换色谱柱、流动相并耗费比较长的时间对系统进行平衡，这一定程度 上制约了 LC-MS/MS的应用。配备电子轰击电离源的气相色谱质谱(GC-EI -MS)分析食品农产 品中农药残留具有很大优势，由于电子轰击电离源质谱为通用性检测器，可实现几百种农 药的多残留分析，可同时定性和定量，价格适中，因此现各种检测机构和企业均配备气相色 谱-电子轰击离子源-质谱仪(GC-EI-MS)对食品农产品中的农药残留进行检测，但迄今为止 未见食品农产品中吡噻菌胺残留量的GC-EI-MS检测方法的报道，吡噻菌胺属电负性化合 物，由于粮谷、动物源性食品等食品农产品基质比较复杂，须建立净化效果良好的样品前处 理方法和仪器分析条件才能满足检测要求，因此，建立气相色谱-电子轰击离子源-质谱 (GC-EI-MS)定性和定量分析粮谷和动物源性食品中吡噻菌胺残留量的检测方法具有重要 意义。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供一种吡噻菌胺残留量的GC-EI-MS测定方法，主要用于测定粮 谷、动物源性食品等复杂基质食品农产品中吡噻菌胺残留量。
[0007] 为实现以上目的，本发明所采用的技术方案是:一种吡噻菌胺残留量的GC-EI-MS 测定方法，包括如下步骤：
[0008] (1)提取 称取混匀样品于具塞离心管中，加入适量水复苏后，定量加入乙腈或含1 %乙酸的乙腈 溶液均质或振荡超声提取，然后加入氯化钠或乙酸钠中的一种和无水硫酸镁，剧烈涡旋 lmin后离心。
[0009] (2)净化 移取一定体积样品提取液，浓缩至lmL左右，经C18/PSA固相萃取柱净化，乙腈洗脱，收 集洗脱液，浓缩至干后，用体积比为1/1的丙酮/正己烷混合溶剂溶解定容，过膜后，待气相 色谱-电子轰击离子源-质谱(GC-EI-MS)检测。
[0010] (3)标准工作溶液的配制 将不含吡噻菌胺的同种类基质空白样品按上述步骤（1)、（2)处理时，得样品提取净化 残渣，加入适量溶剂和标准溶液，涡旋混匀，配制成至少3个浓度的吡噻菌胺系列标准工作 液。
[0011] (4)气相色谱-电子轰击离子源-质谱法(GC-EI-MS)测定 将步骤(3)中的各浓度梯度的标准工作液进行GC-EI-MS测定，以标准工作液的色谱峰 面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准工作曲线;在相同条件下将步骤(2)中净化后的 样品液注入GC-EI-MS进行测定，测得样品液中吡噻菌胺的色谱峰面积，代入标准工作曲线， 得到样品液中吡噻菌胺含量，然后根据样品液所代表试样的质量计算得到样品中吡噻菌胺 残留量。若上机溶液中吡噻菌胺残留量超过线性范围上限，需用定容溶剂将上机溶液浓度 稀释至线性范围之内。
[0012] 步骤（1)中样品若为粮谷及动物肝脏等含水量较少的样品，提取前须加适量水充 分浸润。
[0013] 步骤（1)中采用乙腈提取时加入氯化钠盐析，采用含1%乙酸的乙腈溶液提取时加 入乙酸钠盐析。
[0014] 步骤(2)中进行C18/PSA固相萃取净化，乙腈洗脱时，洗脱体积为6~8mL。
[0015] 步骤(4)中气相色谱条件为:色谱柱:HP-5MS毛细管色谱柱，柱长30m，内径0.25mm， 膜厚0.25μπι;进样口温度250°C ;载气：He，不分流模式进样，进样量：lyL;恒流模式，流速 1. OmL/min;升温程序:初温60°C保持2min，以每分钟20°C的速度升至200°C，然后以每分钟2 °C的速度升至220°C，再以每分钟20°C的速度升至280°C，保持lOmin;传输线温度:280°C。
[0016] 步骤(4)中质谱条件为:离子源温度150°C;四极杆温度150°C;电离模式：电子轰击 电离，即EI模式，能量70eV;扫描方式：选择离子监测（SIM)模式，监测的离子为：302.1、 177.0、359.1、166.1。
[0017]步骤(4)中测定样液和基质标准工作溶液时，若样液中农药色谱峰保留时间与标 准溶液中相应农药保留时间相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均 出现，而且离子丰度比与标准溶液的离子丰度比相一致，则可判断样液中存在这种农药;若 上述两个条件不能同时满足，则判断不含该种农药。
[0018] 本发明的有益效果在于：
[0019] 本发明利用分散固相萃取技术，建立了简便、快速并能有效避免样品中基质干扰 的样品前处理方法，将此前处理方法结合GC-EI-MS应用于粮谷、动物源性食品中吡噻菌胺 定性确证和定量检测，平均回收率为86.9 %~93.5 %，平均相对标准偏差(RSD)为4.5 %~ 7.0%，检出限低于1.68yg/kg，具有操作简便、快速、准确、灵敏度高及重复性好的优点。能 满足美国、欧盟、日本等国家对相应产品安全检测的技术要求，为保障我国人民食品安全及 对外出口贸易健康发展提供有力的技术支撑。
【附图说明】
[0020] 图1为添加在空白猪肉基质中的吡噻菌胺的GC-EI-MS选择离子色谱图。
[0021] 图2为不含吡噻菌胺的猪肉空白样品的GC-EI-MS选择离子色谱图。
[0022] 图3为以不含吡噻菌胺的猪肉空白样品为基质配制的吡噻菌胺标准工作曲线。
【具体实施方式】
[0023]现以以下实施实例来说明本发明，但并不是限制本发明的范围。
[0024]实施例中使用的仪器与试剂
[0025] T18 Basic均质器（IKA，Germany) ;CR21GHI离心机（日立，Japan) ;MS3基本型旋祸 混合器（IKA，Germany) ;TurboVap LV型样品自动浓缩仪（Caliper，USA) ;7890N气相色谱-5977C质谱仪(Agilent，USA);C18/PSA固相萃取柱(6mL，500mg/500mg)购于天津博纳艾杰尔 科技有限公司。
[0026] 试剂
[0027] 乙腈、丙酮、正己烧（HPLC级，Merke，Germany);乙酸（HPLC级，CNW，Germany);无水 硫酸镁、氯化钠和乙酸钠为分析纯，均购自国药集团化学试剂有限公司。
[0028] 标准物质：纯度99.5%，购自德国Dr.Ehrenstorfer公司。
[0029] 实施例1:小麦中吡噻菌胺残留量的检测
[0030] (1)样品前处理
[0031] 提取 称取经充分混勾的5g小麦样品（研磨成面粉)于50mL离心管中，加入20mL水复苏30min 后，准确加入20mL含1 %乙酸的乙腈溶液，振荡提取20min，超声提取5min，加入3g无水硫酸 镁和2g乙酸钠，祸旋lmin后，7000r/min离心5min。离心后，取8mL乙腈提取液于40°C旋蒸或 氮气吹至近干，加入lmL乙腈涡旋后，待净化。
[0032] 净化 用5mL乙腈预洗C18/PSA固相萃取柱，当液面到达吸附剂的顶部时，将上述提取溶液转 入柱中，用2mL乙腈洗涤试管，并将洗涤液移入SPE柱中，待溶液达到吸附剂顶部时，加入4mL 乙腈至柱子上进行洗脱，洗脱液全部接收到定量试管中，氮气吹干后用体积比为1/1的丙 酮/正己烷混合溶剂定容至lmL，过0.22μπι滤膜后，待GC-EI-MS测定。
[0033] (2)标准工作溶液的配制 准确称取25 ± 0. lmg标准品于25mL容量瓶中，用乙腈溶解，定容得1000.0 yg/mL标准储 备液;移取l.OmL标准储备液置于100mL容量瓶中，用用体积比为1/1的丙酮/正己烷混合溶 剂定容得到10.〇yg/m