一种马来酸匹杉琼的高效液相色谱分析检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及抗肿瘤药物的分析检测方法技术领域，具体涉及一种马来酸匹杉琼的 高效液相色谱分析检测方法，即通过高效液相色谱法分析检测马来酸匹杉琼的纯度以及有 关物质。
【背景技术】
[0002] 马来酸匹杉琼:化学名称为6,9_二[(2-氨乙基)氨基]苯并[G]异喹啉-5,10-二酮 二马来酸盐，分子量为557.5。
[0003] 马来酸匹杉琼结构式为：
[0005] 马来酸匹杉琼由总部设在西雅图的生物科技公司细胞治疗公司C e 1 1 Therapeutics (纳斯达克股票代码：CTIC)上市销售。本品最初于2003年由意大利的 Novuspharma公司合成，随后Cell Therapeutics公司对化合物进行了修饰，以减少对心脏 的毒性，而这种毒性会限制现有蒽环类药物的剂量和有效性。2012年，本品获得欧盟有条件 许可，和美国的"加快审批"类似，有条件上市许可主要授予针对目前临床治疗药物未满足 需求并且预计其上市后可带来显著公共健康益处的药品，批准附有条件，CTI将需要进行上 市后临床研究以进一步证实此前观察到的短期临床益处。本品在英国、德国、奥地利、丹麦、 芬兰、意大利、荷兰、瑞典等国上市销售，商品名为Pixuvri。
[0006] -定的酸度有利于提高马来酸匹杉琼在水溶液中的稳定性，但是，如果酸度太低， 或者溶液呈碱性，以及氧化剂和还原剂会降低马来酸匹杉琼的稳定性。由于马来酸匹杉琼 易环合，测定马来酸匹杉琼时要注意同时分析检测其环合产物，目前尚未发现有关6-氟-9-氨基乙胺苯并[g]异喹啉-5,10二酮、9-氟-6-氨基乙胺苯并[g]异喹啉-5,10二酮、6-氨基乙 胺-8,9-哌嗪苯并[g]异喹啉-5,10二酮、9-氨基乙胺-6,7-哌嗪苯并[g]异喹啉-5,10二酮、 6,9_二氟苯并[g]异喹啉-5,10二酮各杂质在同一色谱条件下的检测方法。因此，需要建立 一种灵敏度高，与杂质分离度好，并且能够检测马来酸匹杉琼在溶液中环合产物的方法。
【发明内容】
[0007] 本发明涉及一种马来酸匹杉琼纯度的高效液相色谱分析检测方法，此方法理论板 数、分离度、拖尾因子等均能满足药物分析检测的要求，检测灵敏，方便迅速，适合于马来酸 匹杉琼纯度的测定以及杂质和有关物质的分析。
[0008] 针对现有技术中存在的不足，本发明所要解决的技术问题是如何采用一般的十八 烷基硅烷键合硅胶色谱柱准确地分析检测马来酸匹杉琼的纯度。本发明为解决以上技术问 题，首次在流动相中创造性地加入一定量的二氧六环，彻底解决了主峰与杂质峰以及相邻 杂质峰之间分离困难的难题，操作简便、灵敏度高、准确性好。提供了一种马来酸匹杉琼纯 度及有关物质的检测方法，用于分析检测马来酸匹杉琼的纯度，本方法特别适合使用一般 的硅烷键合硅胶柱，尤其是十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱分析检测马来酸匹杉琼的纯度， 经文献检索，尚无类似文献报道。
[0009] 本发明提供的技术方案是：
[0010] -种马来酸匹杉琼的高效液相色谱分析检测方法，包括如下步骤：
[0011] a.取马来酸匹杉琼药物，用水和有机溶剂的混合溶液，或者用流动相配制成含马 来酸匹杉琼1 〇〇~1 〇〇〇μg/ml的溶液；
[0012] 上述马来酸匹杉琼溶液的配制可使用水和有机溶剂的混合溶液，也可以使用流动 相，但考虑到溶液的稳定性，优选用流动相作为溶剂来配制；
[0013] 优选的，所配制的溶液中马来酸匹杉琼浓度为500μg/ml;
[0014] 所述水和有机溶剂的混合溶液中有机溶剂选自醇类或腈类有机溶剂，优选甲醇或 乙腈。
[0015] 优选的，所述流动相为用水、乙腈和二氧六环体积比为(70~80): (10~30): (1~ 10)的混合液溶解庚烷磺酸钠后，用磷酸调节pH至2.5~3.5所得溶液，所述流动相中庚烷磺 酸钠的浓度为15~25mmol/L，最佳为20mmol/L;
[0016] 所述混合液中水、乙腈和二氧六环体积比最佳为75:20:5;
[0017] b.取上述含马来酸匹杉琼100~1000μg/ml的溶液适量，注入到高效液相色谱仪 中，用流动相进行冲洗，所述高效液相色谱仪中色谱柱以烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
[0018] 所述烷基硅烷键合硅胶优选C8~C18烷基硅烷键合硅胶，最佳为十八烷基硅烷键合 硅胶；
[0019] C.使用波长为240~250nm的紫外光检测，最佳检测波长为247nm〇
[0020] 所述马来酸匹杉琼药物优选为马来酸匹杉琼原料药。
[0021] 所述马来酸匹杉琼药物中包括如下已知杂质中的至少一种:①6-氟-9-氨基乙胺 苯并[g]异喹啉-5，10二酮、②9-氟-6-氨基乙胺苯并[g]异喹啉-5，10二酮、③6-氨基乙胺-8,9-哌嗪苯并[g]异喹啉-5,10二酮、④9-氨基乙胺-6,7-哌嗪苯并[g]异喹啉-5,10二酮、⑤ 6,9_二氟苯并[g]异喹啉-5,10二酮。
[0022] 所述马来酸匹杉琼原料药中还包括马来酸匹杉琼的降解产物;所述马来酸匹杉琼 的降解产物包括马来酸匹杉琼脱乙氨基物，以及马来酸匹杉琼在酸、碱、氧化剂和还原剂作 用下的降解产物。
[0023] 与现有技术相比，本发明分析检测方法的优点和有益效果在于：
[0024] 本发明的马来酸匹杉琼纯度测定及有关物质的分析检测方法，经文献检索，为首 次在流动相中创造性地加入一定量的二氧六环，彻底解决了主峰与杂质峰以及相邻杂质峰 之间分离困难的难题，操作简便。用于分析检测马来酸匹杉琼时，主峰与杂质、相邻杂质之 间均有较满意的分离度。
【附图说明】
[0025]图1为实施例1中马来酸匹杉琼原料药的HPLC分析图；
[0026]图2为实施例2中马来酸匹杉琼原料药的HPLC分析图；
[0027]图3为实施例3中马来酸匹杉琼原料药的HPLC分析图；
[0028]图4为实施例4中马来酸匹杉琼原料药的HPLC分析图；
[0029]图5为实施例5中马来酸匹杉琼原料药的HPLC分析图；
[0030]图6为实施例6中马来酸匹杉琼原料药的HPLC分析图；
[0031]图7为实施例7中马来酸匹杉琼原料药的HPLC分析图；
[0032]图8为实施例8中马来酸匹杉琼原料药的HPLC分析图；
[0033]图9为实施例9中马来酸匹杉琼原料药的HPLC分析图
[0034]图10~图13为实施例10中马来酸匹杉琼对照品及杂质对照品的HPLC分析图。
【具体实施方式】
[0035] 为便于本领域技术人员理解本
【发明内容】
，下面申请人将结合具体实施例进一步描 述本发明的技术方案，但以下内容不应以任何方式限制本发明权利要求书请求保护的范 围。
[0036] 以下诸实施例中，所用主要原材料如下：
[0037] Pixantrone Dimaleate(马来酸匹杉琼）对照品，CAS Number: 144675-97-8;
[0038]中间体对照品：6-氣_9_氨基乙胺苯并[g]异喹啉-5，10二酮和9-氣_6_氨基乙胺苯 并[g]异喹啉-5,10二酮、6-氨基乙胺-8,9-哌嗪苯并[g]异喹啉-5,10二酮和9-氨基乙胺-6， 7-哌嗪苯并[g]异喹啉-5,10二酮及6,9-二氟苯并[g]异喹啉-5,10二酮，购自国内某公司， 并经结构确证。
[0039] 马来酸匹杉琼原料药为申请人根据常规现有技术自制。
[0040] 乙腈(色谱纯）、二氧六环(分析纯）、庚烷磺酸钠(色谱纯）、磷酸(分析纯，85wt% )。
[0041] 其他均为常规试剂和原材料。
[0042] 实施例1
[0043]色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为用水、乙腈和二氧六环体 积比为75: 20:5的混合液溶解庚烷磺酸钠后，用磷酸调节pH至2.5所得溶液(配1L流动相只 需加磷酸3~4滴，因此磷酸的用量对体积影响可以忽略不计），所述流动相中庚烷磺酸钠的 浓度为20mmol/L，流速 1.2ml/min，检测波长247nm，色谱柱:Alltima C18 4.6X 150mm，5ym， 柱温40°C，进样量:20μ1。
[0044]供试品溶液制备：
[0045]取马来酸匹杉琼原料药约50mg，精密称定，置100ml容量瓶中，加流动相溶解并稀 释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
[0046] 取上述溶液20μ1注入液相色谱仪，记录色谱图，按面积归一化法计算马来酸匹杉 琼的纯度。
[0047]马来酸匹杉琼的HPLC分析图见附图1所示，其中保留时间18.666min为马来酸匹杉 琼色谱主峰。主峰与相邻杂质及杂质间分离度的最小值为2.13。
[0048] 实施例2
[0049] 色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为用水、乙腈和二氧六环体 积比为75: 20:5的混合液溶解庚烷磺酸钠后，用磷酸调节pH至3.5所得溶液，所述流动相中 庚烷磺酸钠的浓度为20mmol/L，流速1.2ml/min，检测波长247nm，色谱柱:Alltima C18 4.6 X 150mm，5μL?，柱温40 °C，进样量:20μ1。
[0050]供试品溶液制备：
[00511取马来酸匹杉琼原料药约50mg，精密称定，置100ml容量瓶中，加流动相溶解并稀 释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
[0052] 取上述溶液20μ1注入液相色谱仪，记录色谱图，按面积归一化法计算马来酸匹杉 琼的纯度。
[0053]马来酸匹杉琼的HPLC分析图见附图2所示，其中保留时间16.789min为马来酸匹杉 琼色谱主峰。主峰与相邻杂质及杂质间分离度的最小值为1.65。
[0054] 实施例3
[0055]色谱条件：以辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为用水、乙腈和二氧六环体积 比为75: 20:5的混合液溶解庚烷磺酸钠后，用磷酸调节pH至3.0所得溶液，所述流动相中庚 烷磺酸钠的浓度为20mmol/L，流速1.2ml/min，检测波长247nm，色谱柱:Agilent XDB-C8 4.6\250臟，5以111，柱温40°(：，进样量:2(^1。
[0056]供试品溶液制备：
[0057]取马来酸匹杉琼原料药约50mg，精密称定，置100ml容量瓶中，加流动相溶解并稀 释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
[0058] 取上述溶液20μ1注入液相色谱仪，记录色谱图，按面积归一化法计算马来酸匹杉 琼的纯度。
[0059]马来酸匹杉琼的HPLC分析图见附图3所示，其中保留时间24.093min为马来酸匹杉 琼色谱主峰。主峰与相邻杂质及杂质间分离度的最小值为2.80。
[0060] 实施例4
[0061 ]色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充