金天格胶囊指纹图谱的建立方法及其指纹图谱的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种金天格胶囊指纹图谱的建立方法及其指纹图谱，是以人工虎骨对照药材为参照，采用高效液相色谱法测定其指纹图谱。本发明所提供的方法建立的金天格胶囊HPLC指纹图谱与对照图谱的相似度均大于0.90，能有效的表征其质量，有利于全面监控产品的质量；本发明建立了金天格胶囊HPLC特征图谱共有模式，标定了12个共有峰，建立的指纹图谱技术含量高，避免了金天格胶囊质量控制的单一性和片面性，减少了人为处理产品质量达标的可能性。
【专利说明】
金天格胶囊指纹图谱的建立方法及其指纹图谱
技术领域
[0001] 本发明属于中药检测技术领域，具体设及金天格胶囊指纹图谱的建立方法及其指 纹图谱。
【背景技术】
[0002] 金天格胶囊是一种健骨药物，由人工虎骨粉和适量辅料制成的制剂，人工虎骨粉 具有健骨作用，用于腰背疼痛，腰膝酸软，下肢瘦弱，步履艰难等症状的改善。
[0003] 虎骨作为一种名贵中药材并经过千百年的临床实践，它的药用价值得到了充分的 证明，虎骨具有显著的抗炎、追风、镇痛、健骨等功效，主要用于治疗骨质疏松、风湿W及骨 伤等。在1993年，为遵守国际公约，我国明令禁止虎骨贸易和药用后，含有虎骨成分的很多 著名中成药就悄然消失了。为使具有悠久历史的W虎骨为原料的传统中药制品不在市场上 消亡，2003年由中国药品生物制品检定所、金花企业(集团）股份有限公司等联合研制出了 与天然虎骨所含成分基本相同的人工虎骨粉配方。经实验室检测，用该配方制成的人工虎 骨指纹图谱与天然虎骨几乎相同，13项实验及30多个药理、药效及安全性指标与天然虎骨 粉无明显差异。
[0004] 目前，对一种健骨药物的的鉴定，往往是选取一种健骨药物的一两种中药成分进 行鉴定，比如申请号为201510419150.0、名称为"一种健骨药物的质量检测方法"，公开了一 种健骨药物的总氨基酸、巧的检测方法。
[0005] 中药指纹图谱是指某种中药材或者中成药中所共有的、具有特征性的某类或数类 成分的色谱或者光谱的图谱。在现阶段，中药的有效成分绝大多数没有明确的情况下，中药 指纹图谱对于控制中药材或者中成药的质量显得格外重要。因此，对健骨药物金天格胶囊 建立中药指纹图谱，进行质量检测具有重大意义。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于提供一种金天格胶囊指纹图谱的建立方法及其指纹图谱，该方 法可W保证金天格胶囊的质量稳定性、一致性和可控性，从而确保金天格胶囊的安全性和 有效性。
[0007] 本发明是通过W下技术方案来实现：
[000引本发明公开的一种金天格胶囊的指纹图谱的建立方法，包括W下步骤：
[0009] 1)供试品溶液的制备
[0010] 精密称取金天格胶囊内容物0.25g，加水溶解，沸水浴加热处理5~20min后，冷却、 离屯、，取上清并用微孔滤膜过滤后，制得供试品溶液；
[ocm] 2)参比对照溶液的制备
[0012] 精密称取人工虎骨对照药材0.25g，加水溶解，沸水浴加热处理5~20min后，冷却、 离屯、，取上清并用微孔滤膜过滤后，制得参比对照溶液；
[0013] 3)测定
[0014] 分别精密吸取供试品溶液和参比对照溶液各5~20μ1，注入液相色谱仪，依照高效 液相色谱法进行测定，记录65分钟内的色谱图，用指纹图谱软件进行处理，得到金天格胶囊 的指纹图谱。
[0015] 所述高效液相色谱条件为：
[0016] 填充剂:十八烷基硅烷键合硅胶，250 X 4.6mm，5μπι;
[0017] 流动相A:甲醇与0.02氣醋酸水溶液按体积比2:98配成的混合液;流动相Β:甲 醇与0.02 % Ξ氣醋酸水溶液按体积比30:70配成的混合液；
[001引检测波长：220~380nm;
[0019] 柱溫:28 ~40°C;
[0020] 梯度洗脱，流速0.2~0.5mL/min。
[0021 ]梯度洗脱过程中，流动相A和流动相B的变化比例为：
[0022] 0 ~20min，流动相 A:100%;
[0023] 20 ~30min，流动相 A:100%~50%、流动相B:0~50%;
[0024] 30~45min，流动相A:50%~0、流动相B:50%~100% ;
[00巧]45~60min，流动相A:0~100%、流动相B:100~0%;
[00%] 60 ~65min，流动相 A:100%。
[0027] 所述十八烷基硅烷键合硅胶的孔径为300A。
[002引检测波长为280nm;柱溫为30°C ;梯度洗脱，流速为0.3mL/min。
[0029] 步骤1)加入5~20mL水溶解金天格胶囊内容物;步骤2)中加入5~20mL水溶解人工 虎骨对照药材。
[0030] 所述离屯、是在2000~3500;r/min下，处理2~lOmin。
[0031] 本发明还公开了采用上述的方法建立的金天格胶囊指纹图谱，所述指纹图谱中有 12个共有峰。
[0032] 与现有技术相比，本发明具有W下有益的技术效果：
[0033] 本发明公开的金天格胶囊指纹图谱的建立方法，W人工虎骨对照药材为参照，采 用高效液相色谱法测定其指纹图谱。本发明所提供的方法建立的金天格胶囊指纹图谱与对 照图谱的相似度均大于0.90,能有效的表征其质量，有利于全面监控产品的质量，避免了金 天格胶囊质量控制的单一性和片面性，减少了人为处理产品质量达标的可能性，有效保证 了金天格胶囊的质量稳定性、一致性和可控性，从而确保金天格胶囊的安全性和有效性。
[0034] 本发明建立了金天格胶囊HPLC特征图谱共有模式，标定了 12个共有峰，建立的指 纹图谱技术含量高，多肤指纹图谱的峰多，峰形好，易于鉴别。
【附图说明】
[0035] 图1为8批次金天格胶囊的多肤指纹图谱叠加色谱图；
[0036] 图2为人工虎骨对照药材的多肤指纹图谱色谱图。
【具体实施方式】
[0037] 下面结合具体的实施例对本发明做进一步的详细说明，所述是对本发明的解释而 不是限定。
[003引实施例1
[0039] -种金天格胶囊的指纹图谱的建立方法，包括W下步骤：
[0040] (1)供试品溶液的制备:取金天格胶囊内容物约〇.25g，加水10ml溶解，沸水浴加热 10分钟，冷却后离屯、(3000转/min)5分钟，取上清液用微孔滤膜滤过，作为供试品溶液；
[0041] (2)参比对照溶液的制备：取人工虎骨对照药材，同供试品方法制成对照药材溶 液；
[0042] (3)测定法:分别精密吸取参比对照溶液和供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪， 测定，记录65分钟内的色谱图，用指纹图谱软件进行处理，即得一种健骨药物的指纹图谱。
[0043] (4)所述高效液相色谱测定的色谱条件为：W十八烷基硅烷键合硅胶（孔径为 300Α; 250 X 4.6mm、5皿)为填充剂，甲醇-0.02 % S氣醋酸(2:98)为A相，甲醇-0.02 %立氣 醋酸(30:70)为財目，梯度洗脱，检测波长为280nm;柱溫30°C ;流速0.3ml/min。
[0044] 实施例2
[0045] -种金天格胶囊的指纹图谱的建立方法，包括W下步骤：
[0046] (1)供试品溶液的制备:取金天格胶囊内容物约〇.25g，加水5ml溶解，沸水浴加热5 分钟，冷却后离屯、(2000转/min)10分钟，取上清液用微孔滤膜滤过，作为供试品溶液；
[0047] (2)参比对照溶液的制备:取人工虎骨对照药材0.25g，同供试品方法制成对照药 材溶液；
[004引（3)测定法:分别精密吸取参比对照溶液和供试品溶液各扣1，注入液相色谱仪，测 定，记录65分钟内的色谱图，用指纹图谱软件进行处理，即得一种健骨药物的指纹图谱。 [0049] (4)所述高效液相色谱测定的色谱条件为：W十八烷基硅烷键合硅胶（孔径为 300A;250 X 4.6mm、5皿)为填充剂，甲醇-0.02 % S氣醋酸(2:98)为A相，甲醇-0.02 %立氣 醋酸(30:70)为B相，梯度洗脱，检测波长为220nm;柱溫28°C ;流速0.2ml/min。
[00加]实施例3
[0051] -种金天格胶囊的指纹图谱的建立方法，包括W下步骤：
[0052] (1)供试品溶液的制备:取金天格胶囊内容物约〇.25g，加水20ml溶解，沸水浴加热 20分钟，冷却后离屯、(3500转/min)2分钟，取上清液用微孔滤膜滤过，作为供试品溶液；
[0053] (2)参比对照溶液的制备:取人工虎骨对照药材0.25g，同供试品方法制成对照药 材溶液；
[0054] (3)测定法:分别精密吸取参比对照溶液和供试品溶液各20μ1，注入液相色谱仪， 测定，记录65分钟内的色谱图，用指纹图谱软件进行处理，即得一种健骨药物的指纹图谱。
[0055] (4)所述高效液相色谱测定的色谱条件为：W十八烷基硅烷键合硅胶（孔径为 300Λ ;250 X 4.6mm、5μπι)为填充剂，甲醇-0.02 % Ξ氣醋酸（2:98)为A相，甲醇-0.02 % Ξ氣 醋酸(30:70)为B相，梯度洗脱，检测波长为380nm;柱溫40°C ;流速0.5ml/min。
[0056] 参见图1，为本发明方法建立的8批次金天格胶囊的指纹图谱，所述图谱中有12个 共有峰。图2为人工虎骨对照药材的指纹图谱。
[0057] 通过8批次金天格胶囊HPLC图谱的比较，进行相似度评价，采用国家药典委员会 "中药色谱指纹相似度评价系统"对8个批次金天格胶囊进行相似度计算，8个批次金天格胶 囊与人工虎骨对照药材的指纹图谱相似度均大于0.90。
[0058] 综上所述，本发明具有W下优点：
[0059] 1.本发明所提供的方法建立的健骨药物HPIX指纹图谱与对照药材图谱的相似度 均大于0.90，能有效的表征其质量，有利于全面监控产品的质量。
[0060] 2.本发明建立了一种健骨药物HPLC特征指纹图谱共有模式，标定了 12个共有峰， 建立的指纹图谱技术含量高，避免了该制剂质量控制的单一性和片面性，减少了人为处理 产品质量达标的可能性。
[0061 ] 3.本发明方法所得健骨药物中多肤指纹图谱的峰多，峰形好，易于鉴别。
【主权项】
1. 一种金天格胶囊的指纹图谱的建立方法，其特征在于，包括以下步骤： 1) 供试品溶液的制备 精密称取金天格胶囊内容物〇.25g，加水溶解，沸水浴加热处理5~20min后，冷却、离 心，取上清并用微孔滤膜过滤后，制得供试品溶液； 2) 参比对照溶液的制备 精密称取人工虎骨对照药材〇.25g，加水溶解，沸水浴加热处理5~20min后，冷却、离 心，取上清并用微孔滤膜过滤后，制得参比对照溶液； 3) 测定 分别精密吸取供试品溶液和参比对照溶液各5~20μ1，注入液相色谱仪，依照高效液相 色谱法进行测定，记录65分钟内的色谱图，用指纹图谱软件进行处理，得到金天格胶囊的指 纹图谱。2. 根据权利要求1所述的金天格胶囊的指纹图谱的建立方法，其特征在于，高效液相色 谱条件为： 填充剂:十八烷基硅烷键合硅胶，250 X 4 · 6mm，5μπι; 流动相A:甲醇与0.02%三氟醋酸水溶液按体积比2:98配成的混合液;流动相Β:甲醇与 0.02 %三氟醋酸水溶液按体积比30:70配成的混合液； 检测波长:220~380nm; 柱温:28~40 °C; 梯度洗脱，流速〇. 2~0.5mL/min。3. 根据权利要求2所述的金天格胶囊的指纹图谱的建立方法，其特征在于，梯度洗脱过 程中，流动相A和流动相B的变化比例为： 0~20min，流动相A: 100% ; 20~30min，流动相A: 100 %~50 %、流动相B: 0~50 % ; 30~45min，流动相A: 50 %~0、流动相B: 50 %~100 % ; 45~60min，流动相A:0~100%、流动相B: 100~0% ; 60~65min，流动相A: 100%。4. 根据权利要求2所述的金天格胶囊的指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述十八烷 基硅烷键合硅胶的孔径为300A。5. 根据权利要求1所述的金天格胶囊的指纹图谱的建立方法，其特征在于，检测波长为 280nm;柱温为30 °C ;梯度洗脱，流速为0 · 3mL/min。6. 根据权利要求1所述的金天格胶囊的指纹图谱的建立方法，其特征在于，步骤1)加入 5~20mL水溶解金天格胶囊内容物;步骤2)中加入5~20mL水溶解人工虎骨对照药材。7. 根据权利要求1所述的金天格胶囊的指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述离心是 在 2000 ~3500r/min 下，处理 2 ~lOmin。8. 采用权利要求1~7中任意一项所述的方法建立的金天格胶囊指纹图谱，其特征在 于，所述指纹图谱中有12个共有峰。
【文档编号】G01N30/02GK105823833SQ201610069433
【公开日】2016年8月3日
【申请日】2016年2月1日
【发明人】陶玉
【申请人】金花企业(集团)股份有限公司西安金花制药厂