一种冰冻切片免疫组化染色操作方法
【专利摘要】本发明公开了一种冰冻切片免疫组化染色操作方法，将3—5um的冰冻组织切片，室温放置30分钟，3?8℃丙酮固定10?12分钟，然后用PBS清洗15分钟，采用过氧化氢孵育5—10分钟。本发明所采用的技术方案对常规的染色操作步骤进行改变，改变组织切片的厚度，丙酮固定时间，以及对过氧化氢孵育时间进行选择，改变组织切片的染色效果。本发明操作步骤简单，与现有技术的操作步骤、试剂等使用均不同，极大的便利于实验室操作人员的免疫组化操作，可快速的掌握滴入抗体的位置和大小。
【专利说明】
一种冰冻切片免疫组化染色操作方法
技术领域
[0001]本发明涉及实验室检验分析方法，具体涉及一种冰冻切片免疫组化染色操作方法。
【背景技术】
[0002]实验室做免疫组化滴抗体时，发现在染色操作步骤时，无法进行正常染色，导致实验操作人员滴加抗体时，无法把握滴加组织大小和位置。
[0003]基于此，实验室研发人员研究开发了一种冰冻切片免疫组化染色操作方法。
【发明内容】
[0004]本发明所要解决的技术问题是:现有冰冻切片免疫组化染色所采用的操作方法无法对组织切片的组织进行正常染色，导致滴加抗体时，无法把握滴加组织的大小和位置。现提供一种冰冻切片免疫组化染色操作方法，通过对现有操作步骤进行处理，解决免疫组化染色操作步骤染色效果不佳等技术问题。
[0005]本发明的通过下述技术方案实现:
一种冰冻切片免疫组化染色操作方法，将冰冻组织切片3—5um，室温放置30分钟，3-8°(:丙酮固定10-12分钟，然后用PBS清洗15分钟，采用过氧化氢孵育5—10分钟。
[0006]对冰冻切片的常规处理是将组织切片置于软塑料盖中，组织切片小可加入适量OCT包埋剂浸没组织，然后将装有组织切片的软塑料盖放入盛有液氮的容器内，当接触液氮开始气化沸腾，将小盒保持原味切不加入液氮内，大约10—20秒组织迅速冰冻切片。取出组织切片立即置于-80 °C冰箱内保存。
[0007]本发明技术方案通过采用将组织切片的厚度进行调整，切片厚度设置在3-5um，而这种厚度采用人工是无法操作做到的，而本发明技术方案是通过机器操作实现，利于滴加抗体后，组织切片的抗体着色。
[0008]优选地，所述染色具体操作方法为将冰冻切片4um，在室温下放置30分钟后依次采用4°C丙酮固定10分钟，PBS缓冲液以每次5分钟，共三次对冰冻切片进行清洗，最后采用可消除内氧化物酶活性的过氧化氢孵育5分钟。
[0009]优选地:所述染色具体操作方法为将冰冻切片5um，在室温下放置30分钟后依次采用8°C丙酮固定12分钟，PBS缓冲液清洗冰冻切片15分钟，最后采用可消除内氧化物酶活性的过氧化氢孵育1分钟。
[0010]优选地，所述染色具体操作方法为将冰冻切片3um，在室温下放置30分钟后依次采用8°C丙酮固定11分钟，PBS缓冲液清洗冰冻切片15分钟，最后采用可消除内氧化物酶活性的过氧化氢孵育8分钟。
[0011 ] 优选地，所述冰冻切片切完后放置的温度为-80°c或-20°C。
[0012]本发明与现有技术相比，具有如下的优点和有益效果:
(I)本发明所采用的技术方案对常规的染色操作步骤进行改变，改变组织切片的厚度，丙酮固定时间，以及对过氧化氢孵育时间进行选择，改变组织切片的染色效果。
[0013](2)本发明操作步骤简单，与现有技术的操作步骤、试剂等使用均不同，极大的便利于实验室操作人员的免疫组化操作，可快速的掌握滴入抗体的位置和大小。
【具体实施方式】
[0014]为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，下面结合实施例，对本发明作进一步的详细说明，本发明的示意性实施方式及其说明仅用于解释本发明，并不作为对本发明的限定。
[0015]实施例1:
一种冰冻切片免疫组化染色操作方法，将4um的冰冻切片在室温下放置30分钟后依次采用4°C丙酮固定10分钟，PBS缓冲液以每次5分钟，共三次对冰冻切片进行清洗，最后采用可消除内氧化物酶活性的过氧化氢孵育5分钟。
[0016]实施例2:
一种冰冻切片免疫组化染色操作方法，将5um的冰冻切片，在室温下放置30分钟后依次采用8°C丙酮固定12分钟，PBS缓冲液清洗冰冻切片15分钟，最后采用可消除内氧化物酶活性的过氧化氢孵育10分钟。
[0017]实施例3:
一种冰冻切片免疫组化染色操作方法，将3um的冰冻切片，冰冻切片的温度为-800C，然后在室温下放置30分钟后依次采用8°C丙酮固定11分钟，PBS缓冲液清洗冰冻切片15分钟，最后采用可消除内氧化物酶活性的过氧化氢孵育8分钟。
[0018]以上所述的【具体实施方式】，对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明，所应理解的是，以上所述仅为本发明的【具体实施方式】而已，并不用于限定本发明的保护范围，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1.一种冰冻切片免疫组化染色操作方法，其特征在于，包括染色步骤:冰冻组织切片3—5um，室温放置30分钟，3-8°C丙酮固定10-12分钟，然后用PBS清洗15分钟，采用过氧化氢孵育5—10分钟。2.根据权利要求1所述的一种冰冻切片免疫组化染色操作方法，其特征在于:所述染色具体操作方法为将冰冻切片4um，在室温下放置30分钟后依次采用4°C丙酮固定10分钟，PBS缓冲液以每次5分钟，共三次对冰冻切片进行清洗，最后采用可消除内氧化物酶活性的过氧化氢孵育5分钟。3.根据权利要求1所述的一种冰冻切片免疫组化染色操作方法，其特征在于:所述染色具体操作方法为将冰冻切片5um，在室温下放置30分钟后依次采用8°C丙酮固定12分钟，PBS缓冲液清洗冰冻切片15分钟，最后采用可消除内氧化物酶活性的过氧化氢孵育10分钟。4.根据权利要求1所述的一种冰冻切片免疫组化染色操作方法，其特征在于:所述染色具体操作方法为将冰冻切片3um，在室温下放置30分钟后依次采用8°C丙酮固定11分钟，PBS缓冲液清洗冰冻切片15分钟，最后采用可消除内氧化物酶活性的过氧化氢孵育8分钟。5.根据权利要求1所述的一种冰冻切片免疫组化染色操作方法，其特征在于:所述冰冻切片切完后放置的温度为-80°C或-20°C。
【文档编号】G01N1/30GK105865879SQ201610334604
【公开日】2016年8月17日
【申请日】2016年5月19日
【发明人】欧阳小峰, 刘叶, 谷和林, 李军秀
【申请人】四川金域医学检验中心有限公司