组合物、糖链试样的制备方法和糖链的分析方法

组合物、糖链试样的制备方法和糖链的分析方法
【专利摘要】本发明的组合物含有具有用于捕捉糖链的官能团的聚合物颗粒，且通过下述式(F1)算出的质量的变化率大于90％小于112％。变化率(％)＝A/B×100…(F1)[式(F1)中，A表示在相对湿度50％、25℃的环境下进行4小时静置处理后的上述组合物的质量，B表示上述静置处理前的上述组合物的质量]。
【专利说明】
组合物、糖链试样的制备方法和糖链的分析方法
技术领域
[0001 ]本发明涉及组合物、糖链试样的制备方法和糖链的分析方法。
【背景技术】
[0002] 糖链、糖蛋白、糖肽、肽、寡肽、蛋白质、核酸、脂质等的生物体高分子在医学、细胞 工程、器官工程等的生物技术领域中担当重要的角色，阐明基于这些物质的生物体反应的 控制机制关系到生物技术领域的发展。
[0003] 糖链为葡萄糖、半乳糖、甘露糖、岩藻糖、木糖、N-乙酰葡糖胺、N-乙酰半乳糖胺、唾 液酸等单糖和这些的衍生物通过糖苷键结合为链状的分子的总称。生物体高分子之中，糖 链具有非常丰富的多样性，逐渐发现其与天然存在的生物所具有的各式各样的功能，例如 细胞间信息传递、蛋白质的功能、相互作用的调整等息息相关。
[0004] 多数情况下糖链在生物体内作为与蛋白质、脂质等结合的复合糖质存在。作为具 有糖链的生物体高分子，例如可列举有助于细胞的稳定化的植物细胞的细胞壁的蛋白多 糖、影响细胞的分化、增殖、黏着、移动等的糖脂质、以及参与细胞间相互作用、细胞识别的 糖蛋白等。这些生物体高分子所含的糖链与该生物体高分子一边相互代行、辅助、放大、调 节或阻碍功能，一边控制高度精密的生物体反应的机制正逐渐被阐明。如果能够明确上述 糖链与细胞的分化增殖、细胞黏着、免疫和细胞的癌化之间的关系，则可以期待将该糖链工 程与医学、细胞工程或器官工程密切关联，实现新的发展。
[0005] 糖蛋白医药品中，多数情况下其糖链在生物活性表达等中担当重要的角色。因此， 作为糖蛋白医药品的品质管理的参数，糖链的评价极其重要。特别是对于抗体医药品，已有 其糖链结构影响抗体依赖性细胞毒性(ADCC活性)的报告，糖链结构解析的重要性提升。
[0006] 因此，近年来，要求对糖链结构进行迅速、简便并且高精度解析的方法，通过高效 液相色谱法(HPLC)、核磁共振法、毛细管电泳法(CE法）、质谱分析法、凝集素芯片检测法等 多种多样的方法，进行了糖链解析。
[0007] 为了利用这些各种方法对糖链进行解析，需要预先对生物体试样中所包含的蛋白 质、肽、脂质、核酸等和糖链进行分离、纯化。这些糖链的纯化、标记化花费时间和工时，难以 一次制备多种多量的试样。
[0008] 作为解决该问题的技术，已有关于利用聚合物颗粒的糖链试样的制备方法的报 告，该聚合物颗粒具有酰肼基、氨基氧基等用于捕捉糖链的官能团（专利文献1)。
[0009] 现有技术文献
[0010] 专利文献
[0011] 专利文献1:国际公开第2008/018170号

【发明内容】

[0012] 发明所要解决的课题
[0013] 还考虑到运输制品时，制品常常被暴露于超过50°C的温度条件下。因此本发明的 发明人对于具有用于捕捉糖链的官能团的聚合物颗粒的高温条件下的品质稳定性进行了 研究。其结果发现，在60°C这样的高温条件下，聚合物颗粒发生凝集。由于该凝集影响该聚 合物颗粒的性能、操作性，因此需要抑制该凝集。
[0014] 于是，本发明的目的在于提供一种聚合物颗粒，其在具有用于捕捉糖链的官能团 的聚合物颗粒中，抑制了高温条件下的凝集。
[0015] 用于解决课题的方法
[0016] [1]-种组合物，其含有具有用于捕捉糖链的官能团的聚合物颗粒，且通过下述式 (F1)算出的质量的变化率大于90%小于112%。
[0017] 变化率（％)=A/BX100...(F1)
[0018] [式(F1)中，A表示在相对湿度50%、25°C的环境下进行4小时静置处理后的上述组 合物的质量，B表示上述静置处理前的上述组合物的质量。]
[0019] [2]如[1]所述的组合物，其中，通过下述式(F2)算出的平均粒径的变化率为90% 以上120%以下。
[0020] 变化率（％)=C/DX100."(F2)
[0021] [式(F2)中，C表示将上述组合物在干燥条件下以60°C进行3天保温处理后，使其悬 浮在水中，用激光衍射/散射式粒度分析仪测定得到的上述组合物中的聚合物颗粒的平均 粒径，D表示使上述保温处理前的上述组合物悬浮在水中，用激光衍射/散射式粒度分析仪 测定得到的上述组合物中的聚合物颗粒的平均粒径。]
[0022] [3]如[1]或[2]所述的组合物，其中，含有上述聚合物颗粒的组合物还含有表面活 性剂。
[0023] [4]如[3]所述的组合物，其中，上述聚合物颗粒由上述表面活性剂所包覆。
[0024] [5]如[3]或[4]所述的组合物，其中，上述表面活性剂为山梨糖醇酐脂肪酸酯或阴 离子性表面活性剂。
[0025] [6]如[1]至[5]中任一项所述的组合物，其中，上述聚合物颗粒的平均粒径为0.05 Mi以上ΙΟΟΟμηι以下。
[0026] [7]如[1]至[6]中任一项所述的组合物，其中，上述官能团为酰肼基或氨基氧基。
[0027] [8]如[1]至[7]中任一项所述的组合物，其中，上述聚合物颗粒具有下述式（1)所 示的交联型聚合物结构，
[0029][式（1)中，R1、R2表示可以由-0-、-S-、-ΝΗ-、-CO-、-C0NH-中断的碳原子数1以上20 以下的烃链，R3、R4、R5表示H、CH3或碳原子数2以上5以下的烃链，m: η = 99:1~70:30 ]。
[0030] [9]如[8]所述的组合物，其中，上述交联型聚合物结构如下述式(2)所示，
[0032] [式（2)中，m:n = 99:l ~70:30]。
[0033] [ 10]糖链试样的制备方法，包括：
[0034] (a)混合含有糖链的试样和[1]至[9]中任一项所述的组合物，使上述糖链和上述 组合物中的聚合物颗粒结合的工序；
[0035] (b)清洗与上述糖链结合的上述聚合物颗粒的工序;和
[0036] (c)使上述糖链从与上述糖链结合的上述聚合物颗粒游离的工序。
[0037] [ 11 ]试样中的糖链的分析方法，包括：
[0038] (a)混合含有糖链的试样和[1]至[9]中任一项所述的组合物，使上述糖链和上述 组合物中的聚合物颗粒结合的工序；
[0039] (b)清洗与上述糖链结合的上述聚合物颗粒的工序；
[0040] (c)使上述糖链从与上述糖链结合的上述聚合物颗粒游离的工序;和 [0041 ] (d)对游离的上述糖链进行分析的工序。
[0042] (1)一种聚合物颗粒，该聚合物颗粒具有用于捕捉糖链的官能团，并且由表面活性 剂所包覆。
[0043] (2)如（1)所述的聚合物颗粒，其中，用于捕捉糖链的官能团为酰肼基或氨基氧基。
[0044] (3)如(2)所述的聚合物颗粒，其中，聚合物颗粒具有下述(式1)所示的交联型聚合 物结构，
[0046] (Ri、R2为可以由-0-、-S-、-NH-、-⑶-、-C0NH-中断的碳原子数1~20的烃链，R3、R4、 R5表示H、CH3或碳原子数2~5的经链。m、n表示单体单元数）。
[0047] (4)如(3)所述的聚合物颗粒，其中，聚合物颗粒具有下述(式2)所示的交联型聚合 物结构，
[0049] (m、n表示单体单元数）。
[0050] (5)如（1)至(4)中任一项所述的聚合物颗粒，其中，表面活性剂为山梨糖醇酐单硬 脂酸酯、山梨糖醇酐三硬脂酸酯或月桂基硫酸钠。
[0051] (6) -种方法，其特征在于，该方法为抑制聚合物颗粒在高温条件下凝集的方法， 该聚合物颗粒具有用于捕捉糖链的官能团，将该聚合物颗粒用表面活性剂包覆。
[0052] (7) -种方法，其特征在于，该方法为降低聚合物颗粒的吸湿性的方法，该聚合物 颗粒具有用于捕捉糖链的官能团，将该聚合物颗粒用表面活性剂包覆。
[0053] (8)如(6)或(7)所述的方法，其中，用于捕捉糖链的官能团为酰肼基。
[0054] (9)如（8)所述的方法，其中，聚合物颗粒具有下述(式1)所示的交联型聚合物结 构，
[0056] (h、R2表示可以由-0-、-S-、-NH-、-C0-、-⑶NH-中断的碳原子数1~20的烃链，R 3、 R4、R5表示Η、CH3或碳原子数2~5的经链。m、η表示单体单元数）。
[0057] (10)如(9)所述的方法，其中，聚合物颗粒具有下述(式2)所示的交联型聚合物结 构，
[0059] (m、n表示单体单元数）。
[0060] (11)如(6)至（10)中任一项所述的方法，其中，表面活性剂为山梨糖醇酐单硬脂酸 酯、山梨糖醇酐三硬脂酸酯或月桂基硫酸钠。
[0061 ] (12) 一种糖链试样的制备方法，包括：
[0062] (a)使含有糖链的试样与（1)至（5)中任一项所述的聚合物颗粒接触，将该糖链捕 捉于该聚合物颗粒的工序；
[0063] (b)清洗捕捉了糖链的聚合物颗粒的工序;和
[0064] (c)使糖链从捕捉了糖链的聚合物颗粒游离的工序。
[0065] (13) -种试样中的糖链的分析方法，包括：
[0066] (a)使含有糖链的试样与（1)至（5)中任一项所述的聚合物颗粒接触，将该糖链捕 捉于该聚合物颗粒的工序；
[0067] (b)清洗捕捉了糖链的聚合物颗粒的工序；
[0068] (c)使糖链从捕捉了糖链的聚合物颗粒游离的工序;和
[0069] (d)对游离的糖链进行分析的工序。
[0070] 发明的效果
[0071] 根据本发明，对于具有用于捕捉糖链的官能团的聚合物颗粒，能够在不降低其糖 链捕捉能力的条件下，抑制高温条件下的凝集。
【附图说明】
[0072]图1是表示从实施例1、4和比较例1、2中得到的HPLC图谱求得的峰总面积的图表。 [0073]图2是表示以通过实施例1、4和比较例1、2得到的HPLC图谱检测的各峰的面积比率 的图表。
[0074]图3是表示糖链捕捉性能的研究结果的图表。
【具体实施方式】 [0075]《组合物》
[0076] 在一个实施方式中，本发明提供含有具有用于捕捉糖链的官能团的聚合物颗粒、 且由下述式(F1)计算而得的质量的变化率大于90%小于112%的组合物。式(F1)中，A表示 在相对湿度50%、25°C的环境下进行4小时静置处理后的上述组合物的质量，B表示上述静 置处理前的上述组合物的质量。
[0077] 变化率（％)=A/BX100."(F1)
[0078] 发明人发现对于由上述式(F1)计算而得的质量的变化率在上述范围内的组合物， 组合物中的聚合物颗粒的高温条件下的凝集被抑制，从而完成了本发明。
[0079] 由上述式(F1)计算而得的质量的变化率可以为例如大于95%小于112%、例如大 于100%小于112%、例如大于105%小于112%、例如大于90 %小于110%、例如大于95%小 于110%、例如大于100%小于110%、例如大于105%小于110%。
[0080] 对于在质量的变化率在上述范围内的组合物中，高温条件下的聚合物颗粒的凝集 得以抑制的理由，发明人如下推测。即，能够与以酰肼基、氨基氧基为代表的糖链反应的官 能团大多为亲水性的。于是，这些具有用于捕捉糖链的官能团的聚合物颗粒容易吸收空气 中的水分。可推测，被聚合物颗粒吸收的水分之中，一部分水分子吸附在聚合物颗粒表面， 在高温下的保存中，聚合物颗粒经该水分子通过氢键彼此凝集。因此想到通过将颗粒的吸 湿量、特别是表面的水分子的吸附量降低，能够抑制凝集。
[0081 ]另外，作为用于实现在上述质量的变化率的范围内的构成的一例，可列举上述组 合物含有表面活性剂，进而优选表面活性剂包覆聚合物颗粒。其中，所谓"包覆"是指在聚合 物颗粒的表面的至少一部分附着有表面活性剂。
[0082]作为上述的"聚合物颗粒"，能够适合使用固体颗粒、凝胶颗粒。如果使用这种聚合 物颗粒，将糖链捕捉于聚合物颗粒之后，通过离心分离、过滤等的方法，能够容易地回收该 聚合物颗粒。另外，还可以将聚合物颗粒填充在柱中使用。特别是从连续操作化的观点考 虑，填充在柱中使用的方法变得重要。通过作为反应容器使用过滤板(例如，Millipore公司 制的Multiscreen Solvinert Filter Plate)，能够同时处理多个样品，例如，与以凝胶过 滤为代表的基于柱操作的以往的纯化方法相比，纯化的处理量大幅度提高。另外，如果作为 该聚合物颗粒使用磁性体珠子，则能够利用磁力在容器壁面等集聚珠子，因此，能够容易地 进行珠子的清洗。
[0083]聚合物颗粒的形状没有特别限定，优选球状或与其类似的形状。聚合物颗粒为球 状时，平均粒径优选为0.05μηι以上ΙΟΟΟμηι以下，更优选为0.05μηι以上200μηι以下，进一步优 选为0.1Μ1以上200μπι以下，最优选为Ο.?μπι以上100μπι以下。平均粒径小于下限值的情况下， 将聚合物颗粒填充在柱中使用时，透液性变差，因此需要施加大的压力。另外，通过离心分 离、过滤回收聚合物颗粒也变得困难。若平均粒径超过上限值，则聚合物颗粒与试样溶液的 接触面积变小，糖链捕捉的效率降低。另外，难以用吸移管等将聚合物颗粒吸上来。
[0084] 上述的组合物优选为通过下述式(F2)算出的组合物中的聚合物颗粒的平均粒径 的变化率是例如90%以上120%以下、例如95%以上110%以下、例如95%以上105%以下。 式(F2)中，C表示将组合物在干燥条件下以60°C进行3天保温处理后，使其悬浮在水中，用激 光衍射/散射式粒度分析仪测定得到的组合物中的聚合物颗粒的平均粒径，D表示使保温处 理前的组合物悬浮在水中，用激光衍射/散射式粒度分析仪测定得到的组合物中的聚合物 颗粒的平均粒径。
[0085] 变化率（％)=C/DX100."(F2)
[0086] 其中，所谓"干燥条件下"，例如也可以是将对象的组合物以约23°C进行12小时以 上真空干燥之后，与硅胶干燥剂一同封入铝袋而密闭的状态。将这样密闭的组合物以60°C 进行3天保温处理，进行上述的测定即可。
[0087] 作为聚合物颗粒中的"用于捕捉糖链的官能团"，优选为酰肼基或氨基氧基。这些 官能团能够与糖链的醛基反应，通过酰肼键或肟键捕捉糖链。在本发明中，特别优选酰肼 基。
[0088] 具有酰肼基的聚合物颗粒如果满足上述式(F1)则没有限定，优选为具有交联型聚 合物结构的颗粒，其中，该交联型聚合物结构具有下述式(1)所示的结构。
[0090] 式（1)中，R1、R2表示可以由-0-、-s-、-NH-、-CO-、-C0NH-中断的碳原子数1以上20以 下的烃链，R 3、R4、R5表示H、CH3或碳原子数2以上5以下的烃链。另外，m、n表示单体单元数，m 与11之比为111:11 = 99:1~70:30。
[0091] 上述的交联型聚合物结构优选为下述式(2)所示的结构。
[0093] 式（2)中，m、n表示单体单元数，m与η之比为m:n = 99:l~70:30。
[0094] 作为制备具有上述结构的聚合物颗粒的方法，如本实施例所记载，可以为利用悬 浮聚合反应的方法，也可以为利用反相悬浮聚合反应的方法。基本的反应工序例如记载于 国际公开第2008/018170号公报。
[0095] 在一个实施方式中，本发明的聚合物颗粒如上述记载，其特征在于由表面活性剂 所包覆。由此，能够显著降低聚合物颗粒的吸湿性，另外，能够显著地抑制高温条件下的聚 合物颗粒的凝集。因此，在一个实施方式中，本发明提供:一种降低具有用于捕捉糖链的官 能团的聚合物颗粒的吸湿性的方法，其特征在于，使该聚合物颗粒和表面活性剂共存;和一 种抑制具有用于捕捉糖链的官能团的聚合物颗粒在高温条件下的凝集的方法，其特征在 于，使该聚合物颗粒和表面活性剂共存。评价本发明的聚合物颗粒的凝集时的所谓"高温条 件"，典型地为60 °C。
[0096] 所谓使聚合物颗粒和表面活性剂共存，是指在表面活性剂对聚合物颗粒彼此的接 触产生影响的状态下，使聚合物颗粒和表面活性剂共同存在。例如，可以使表面活性剂附着 在聚合物颗粒的表面，也可以由表面活性剂包覆聚合物颗粒。
[0097] 作为与聚合物颗粒共存的表面活性剂，只要对聚合物颗粒赋予上述特性，则没有 特别限制。可以适当选自非离子表面活性剂、阴离子表面活性剂、阳离子面活性剂、两性表 面活性剂等各式各样的种类的表面活性剂。从基于表面活性剂的处理后的聚合物颗粒的操 作性考虑，优选表面活性剂在常温下为固体。
[0098] 作为优选的表面活性剂，可列举例如：山梨糖醇酐单硬脂酸酯、山梨糖醇酐三硬脂 酸酯、山梨糖醇酐单油酸酯、山梨糖醇酐单异硬脂酸酯、山梨糖醇酐单月桂酸酯、山梨糖醇 酐单棕榈酸酯、山梨糖醇酐倍半油酸酯、山梨糖醇酐三油酸酯、五-2-乙基己酸二甘油山梨 糖醇酐、四-2-乙基己酸二甘油山梨糖醇酐等山梨糖醇酐脂肪酸酯类;聚氧化乙烯(Ρ0Ε)-山 梨糖醇酐单油酸酯、Ρ0Ε-山梨糖醇酐单硬脂酸酯、Ρ0Ε-山梨糖醇酐单油酸酯、Ρ0Ε-山梨糖醇 酐四油酸酯等Ρ0Ε-山梨糖醇酐脂肪酸酯类;甘油单棉籽油脂肪酸酯、甘油单芥酸酯、甘油倍 半油酸酯、甘油单硬脂酸酯、甘油单油酸酯等甘油脂肪酸酯类;Ρ0Ε-甘油单硬脂酸酯、Ρ0Ε-甘油单异硬脂酸酯、Ρ0Ε-甘油三异硬脂酸酯等Ρ0Ε-甘油脂肪酸酯类;Ρ0Ε-单油酸酯、Ρ0Ε-二 硬脂酸酯、Ρ0Ε-单二油酸酯、乙二醇二硬脂酸酯等Ρ0Ε-脂肪酸酯类;Ρ0Ε-月桂基醚、Ρ0Ε-油 基醚、Ρ0Ε-硬脂基醚、Ρ0Ε-二十二烷基醚、P0E-2-辛基十二烷基醚、Ρ0Ε-胆留烷醇醚等Ρ0Ε-烷基醚类;普鲁洛尼克等普鲁洛尼克型类表面活性剂;P0E-P0P-2-癸基十四烷基醚、Ρ0Ε- POP-单丁基醚、Ρ0Ε-POP-氢化羊毛脂、Ρ0Ε-POP-甘油基醚等Ρ0Ε-聚氧化丙烯(POP)-烷基 醚类;TETR0NIC等四Ρ0Ε-四POP-乙二胺缩合物类;Ρ0Ε-蓖麻油、Ρ0Ε-固化蓖麻油、Ρ0Ε-固化 蓖麻油单异硬脂酸酯、Ρ0Ε-固化蓖麻油三异硬脂酸酯、Ρ0Ε-固化蓖麻油单焦谷氨酸单异硬 脂酸二酯、Ρ0Ε-固化蓖麻油马来酸等Ρ0Ε-蓖麻油衍生物或Ρ0Ε-固化蓖麻油衍生物;Ρ0Ε-山 梨糖醇蜂蜡等Ρ0Ε-蜂蜡一羊毛脂衍生物;Ρ0Ε-丙二醇脂肪酸酯、Ρ0Ε-烷基胺、Ρ0Ε-脂肪酰 胺、蔗糖脂肪酸酯、Ρ0Ε-壬基苯甲醛缩合物、烷基乙氧基二甲胺氧化物、磷酸三油脂、聚甘油 倍半辛酸酯、聚甘油二辛酸酯、聚甘油单月桂酸酯、聚甘油单硬脂酸酯、聚甘油单油酸酯、聚 甘油二硬脂酸酯、聚甘油二油酸酯等聚甘油脂肪酸酯；甲基聚硅氧烷一十六烷基甲基聚硅 氧烷一聚(氧化乙烯一氧化丙烯）甲基聚硅氧烷共聚物等改性有机硅；固化蓖麻油衍生物、 甘油烷基醚、癸基葡糖苷等非离子性表面活性剂；月桂基硫酸钠、硬脂酰硫酸钠、肉豆蔻基 硫酸钠、硬脂酸钠、月桂酸钠、肉豆蔻酸钠、硬脂酰磺酸钠、月桂基磺酸钠、二辛基磺化琥珀 酸钠等阴离子性表面活性剂;硬脂基三甲基氯化铵、月桂基氯化吡啶鑰等阳离子性表面活 性剂;包括2-^烷基-N，N，N-(羟乙基羧甲基)-2-咪唑啉钠等咪唑啉系两性表面活性剂和 月桂基二甲基氨基乙酸甜菜碱、椰油酰胺丙基甜菜碱、月桂基甜菜碱等烷基甜菜碱、酰胺甜 菜碱、磺化甜菜碱、椰油基甜菜碱等甜菜碱系两性表面活性剂的各种两性表面活性剂，这些 可以使用1种或2种以上。
[0099] 其中，从处理后的操作性的好坏程度和吸湿抑制效果的平衡考虑，特别优选山梨 糖醇酐单硬脂酸酯、山梨糖醇酐三硬脂酸酯、月桂基硫酸钠。
[0100]作为降低具有用于捕捉糖链的官能团的聚合物颗粒的吸湿性的方法和抑制具有 用于捕捉糖链的官能团的聚合物颗粒的凝集的方法中的聚合物颗粒，可列举与上述的含有 聚合物颗粒和表面活性剂的组合物中的聚合物颗粒相同的颗粒。即，用于捕捉糖链的官能 团优选为酰肼基，聚合物颗粒优选具有下述式(1)所示的交联型聚合物结构。
[0102] 式（1)中，R\R2表示可以由-0-、-S-、-NH-、-C0-、-C0NH-中断的碳原子数1以上20以 下的烃链，R 3、R4、R5表示H、CH3或碳原子数2以上5以下的烃链，m: η = 99:1~70:30。
[0103] 上述的交联型聚合物结构特别优选为下述式(2)所示的结构。
[0105]式（2)中，m:n = 99:l ~70:30。
[0106]《组合物的制造方法》
[0107]在一个实施方式中，本发明提供上述的组合物的制造方法，其具备将具有用于捕 捉糖链的官能团的聚合物颗粒与含有表面活性剂和溶剂的液体混合的混合工序;和除去上 述溶剂的干燥工序。
[0108] 〈混合工序和干燥工序〉
[0109] 聚合物颗粒通过表面活性剂的包覆如本实施例所记载，能够通过将聚合物颗粒分 散在表面活性剂的溶液中后，除去溶液，使其干燥，从而简便地实施。
[0110] 在本实施方式的制造方法中，表面活性剂优选为山梨糖醇酐脂肪酸酯或阴离子性 表面活性剂。
[0111] 含有表面活性剂和溶剂的液体的表面活性剂溶液的浓度可以为〇. 〇1 %以上l〇w/ V%以下，也可以为0.1 %以上5%以下。
[0112] 作为含有表面活性剂和溶剂的液体中的溶剂，从优选后续容易除去的溶剂的观点 出发，优选沸点为130°c以下的溶剂，可列举例如：水；甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇等的醇;戊 烷、己烷、环己烷等的烃；乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯等的酯；二乙醚、四氢呋喃等的醚 等。溶剂既可以单独使用1种，也可以混合2种以上使用。
[0113] 〈聚合物颗粒合成工序〉
[0114] 在本实施方式的制造方法中，聚合物颗粒可以通过聚合物颗粒合成工序制造，该 聚合物颗粒合成工序为如下工序:将(A1)含有聚合性基团的羧酸酯单体或(A2)含有聚合性 基团和由保护基团[P]所保护的肼基(Hydrazyl)或氧氨基的单体与（B)交联剂聚合，合成 (C)上述聚合物颗粒。从提高聚合物颗粒的收率的观点出发，聚合物颗粒合成工序优选在油 包水滴型乳剂中进行，但是也可以在水包油滴型乳剂中进行。
[0115][含有聚合性基团的羧酸酯单体(A1)]
[0116]作为本实施方式的制造方法中使用的含有聚合性基团的羧酸酯单体(Al)(以下， 也称为"单体(A1)"。），可列举下述式(3)所示的单体。
[0118] [式(3)中，R11表示可以由选自-0-、-S-、-NH-、-CO-和-CONH-中的至少一种所中断 的碳原子数1以上20以下的烃链，R 12表示H、CH3或碳原子数2以上5以下的烃链。]
[0119] 式(3)中，作为R11，可列举下述式(4)或(5)所示的基团。下述式中，a、b和d表示1以 上5以下的整数，c表示1以上10以下的整数。
[0121]作为上述式(3)的化合物，可列举下述式(6)所示的化合物。
[0123] 聚合反应前的反应溶液中的单体(A1)的含量相对于溶剂100mL为例如5mmol以上 50mmo 1以下、例如5mmo 1以上30mmo 1以下、例如lOmmo 1以上20mmo 1以下。单体(A1)可以单独 使用1种或混合2种以上使用。
[0124] 使用单体(A1)进行本实施方式的制造方法时，在聚合反应后，进行对所得到的(C) 聚合物颗粒赋予酰肼基的工序。将通过聚合反应得到的(C)聚合物颗粒用肼溶液进行处理， 由此进行对(C)聚合物颗粒赋予酰肼基的工序。肼溶液中的肼浓度为10体积百分比以上、30 体积百分比以上、80体积百分比以上、90体积百分比以上或98体积百分比以上。
[0125] [含有聚合性基团和由保护基团[P]所保护的肼基或氧氨基的单体(A2)]
[0126] 本实施方式的制造方法所使用的含有聚合性基团和由保护基团[P]所保护的肼基 或氧氨基的单体(A2)(以下，也称为"单体(A2)"）含有聚合性基团，并且含有由保护基团[P] 所保护的肼基或氧氨基。作为单体(A2)，可列举下述式(7)或(8)所示的单体。
[0128] [式(7)和(8)中，R13表示可以由选自-0-、-S-、-NH-、-C0-和-C0NH-中的至少一种所 中断的碳原子数1以上20以下的烃链，R 14表示H、CH3或碳原子数2以上5以下的烃链，[P]表示 保护基团。]
[0129] 式(7)中，作为R13可列举下述式(9)或（10)所示的基团。下述式中，e、f和h表示1以 上5以下的整数，g表示1以上10以下的整数。
[0131] 式(8)中，作为R13可列举下述式(11)或（12)所示的基团。下述式中，i和k表示1以上 5以下的整数，j表示1以上10以下的整数。
[0133]作为式(7)或(8)所示的化合物，例如，分别可列举下述式（13)或（14)所示的化合 物。
[0135] 聚合反应前的反应溶液中的单体(A2)的含量相对于溶剂100mL为例如5mmol以上 50mmo 1以下、例如5mmo 1以上30mmo 1以下、例如1 Omm ο 1以上20mmo 1以下。
[0136] 作为保护基团[P]，可列举例如9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)、叔-丁氧基羰基(Boc)、 节氧基羰基(Cbz)、2,2,2_三氯乙氧基羰基(Troc)、稀丙氧基羰基(Alloc)、4_甲氧基三苯甲 基(Mmt)、氨基、碳原子数3到20个的烷基、9-芴乙酰基、1-芴羧酸基、9-芴羧酸基、9-芴酮-1-羧酸基、苄氧基羰基、咕吨基(Xan)、三苯甲基(Trt)、4-甲基三苯甲基(Mtt)、4-甲氧基2,3， 6-三甲基-苯磺酰基(Mtr)、均三甲苯-2-磺酰基(Mts)、4，4-二甲氧基二苯甲基(Mbh)、对甲 苯磺酰基(Tos)、2，2，5，7，8-五甲基色满-6-磺酰基(Pmc)、4-甲基苄基(MeBz 1)、4-甲氧基苄 基(MeOBzl)、苄氧基(BzlO)、苄基(Bzl)、苯甲酰基(Bz)、3_硝基-2-吡啶亚磺酰基(Npys)、1_ (4,4_二甲基-2,6-二氧代亚环己基）乙基(Dde)、2,6-二氯苄基（2,6-DiCl-Bzl)、2-氯苄氧 基羰基(2-C1-Z)、2_溴苄氧基羰基(2-Br-Z)、苄氧基甲基(Bom)、环己氧基(cHxO)、叔丁氧基 甲基(Bum)、叔丁氧基（tBuO)、叔丁基（tBu)、乙酰基(Ac)、三氟乙酰基（TFA)邻溴苄氧基羰 基、叔丁基二甲基甲硅烷基、2-氯苄(Cl-z)基、环己基、环戊基、异丙基、三甲基乙酰基、四氢 吡喃-2-基、三甲基甲硅烷基等。
[0137] 单体(A2)例如为下述式(15)所示的化合物。
[0139] 利用单体(A2)进行本实施方式的制造方法时，在聚合反应后，将所得到的(C)聚合 物颗粒的保护基团[P]脱保护。脱保护可以通过根据保护基团的种类的公知的方法进行。
[0140] [交联剂(B)]
[0141] 作为交联剂(B)，能够适合使用多官能团的化合物，该化合物与羧酸酯单体进行共 聚，可列举：
[0142] (1)多元醇的二或三（甲基)丙烯酸酯类，例如，多元醇为乙二醇、丙二醇、三羟甲基 丙烷、甘油、聚氧基乙二醇、聚氧基丙二醇、聚甘油等的化合物、
[0143] (2)在上述（1)中，不饱和酸为（甲基)丙烯酸以外的酸，例如为马来酸、富马酸等的 化合物，
[0144] (3)双丙烯酰胺类，例如，N，N'_亚甲基双丙烯酰胺等，
[0145] (4)使聚环氧化合物与（甲基)丙烯酸反应而得的二或三（甲基)丙烯酸酯类，
[0146] (5)使聚异氰酸酯与（甲基)丙烯酸羟基酯反应而得的二（甲基)丙烯酸氨基甲酸酯 类，例如聚异氰酸酯为亚苄基二异氰酸酯、六亚甲基二异氰酸酯等的化合物，或
[0147] (6)多元烯丙基化合物，例如，烯丙基淀粉、烯丙基纤维素、邻苯二甲酸二烯丙酯、 四烯丙氧基乙烷、季戊四醇三烯丙基醚、三羟甲基丙烷三烯丙基醚、二乙二醇二烯丙基醚、 偏苯三酸三烯丙酯等。
[0148] 交联剂(B)也可以为例如二（甲基)丙烯酸乙二醇酯、二（甲基)丙烯酸丙二醇酯或 N，N'_亚甲基双（甲基)丙烯酰胺。
[0149] 聚合反应前的反应溶液中的(B)交联剂的含量相对于单体(A1或A2)为例如lmol% 以上30mol%以下、例如3mol%以上20mol%以下、例如3mol%以上15mol%以下。
[0150] 向聚合反应体系添加交联剂(B)的时机没有特别限定，可以在聚合前、聚合中、聚 合后的任意时间点添加。
[0151] [聚合反应(油包水滴型乳剂中的聚合)]
[0152] 本实施方式的制造方法中，所谓"油包水滴型乳剂中的聚合"，是指反相悬浮聚合。 所谓反相悬浮聚合，是使含有水溶性单体、根据需要的其他单体、交联剂、聚合引发剂等的 水相在含有对于聚合非活性的疏水性有机溶剂的油相中分散或悬浮，进行油包水滴型的悬 浮聚合的方法。聚合反应可以使混合物分散在有机溶剂中，形成油包水滴型乳剂，在油包水 滴型乳剂中进行，其中，该混合物包含(A1)含有聚合性基团的羧酸酯单体或(A2)含有聚合 性基团和由保护基团[P]所保护的肼基或氧氨基的单体、(B)交联剂、水和聚合引发剂。 [0153](有机溶剂）
[0154] 有机溶剂是对于聚合非活性的疏水性有机溶剂。有机溶剂用于使包含(A1)含有聚 合性基团的羧酸酯单体或(A2)含有聚合性基团和由保护基团[P]所保护的肼基或氧氨基的 单体、(B)交联剂、水和聚合引发剂的混合物分散，因此也可以称为有机分散介质。作为能够 用于本实施方式的制造方法的有机溶剂，可列举脂肪族烃、脂环族烃、芳香族烃、脂肪族醇、 脂肪族酮、脂肪族酯类等。作为脂肪族烃，可列举正戊烷、正己烷、正庚烷等碳原子数5以上 的脂肪族烃。作为脂环族烃，可列举环戊烷、甲基环戊烷、环己烷、甲基环己烷等碳原子数5 以上的脂环族烃。作为芳香族烃，可列举苯和甲苯、二甲苯等苯衍生物等。作为脂肪族醇，可 列举正丁醇、正戊醇等碳原子数4以上或4以上6以下的脂肪族醇等。作为脂肪族酮，可列举 甲基乙基酮等碳原子数4以上或4以上6以下的脂肪族酮等。作为脂肪族酯类，可列举乙酸乙 酯等碳原子数4以上或4以上6以下的脂肪族酯类等。能够用于本实施方式的制造方法的有 机溶剂可以单独使用1种或混合2种以上使用。
[0155] 有机溶剂的使用量没有特别限制，可以根据单体(A1或A2)的量等适当设定。相对 于上述单体(A1或A2) 100质量份的有机溶剂的使用量为例如500质量份以上5000质量份以 下、例如500质量份以上3000质量份以下。
[0156] (聚合引发剂）
[0157] 作为聚合引发剂，如果能够用于本体系中，则没有特别限制，可列举水溶性的自由 基聚合引发剂等。作为聚合引发剂，可列举(1)过氧化氢、（2)过硫酸钠、过硫酸钾、过硫酸铵 等过硫酸盐、（3)高氯酸钾、高氯酸钠等高氯酸盐、（4)氯酸钾、溴酸钾等卤酸盐、（5)叔丁基 过氧化氢、异丙苯过氧化氢、二烷基过氧化物（二-叔丁基过氧化物、叔丁基枯基过氧化物 等)等的过氧化物类、（6)甲基乙基酮过氧化物、甲基异丁基酮过氧化物等酮过氧化物、（7) 过氧化乙酸叔丁酯、过氧化异丁酸叔丁酯、过氧化特戊酸叔丁酯等烷基过氧化酯、（8)偶氮 二异丁腈、2,2'_偶氮双(N，N'_二亚甲基异丁基脒)二盐酸盐等偶氮化合物等。
[0158] 上述聚合引发剂的使用量可以根据聚合的条件适当设定，相对于单体(A1或A2) 100质量份，为例如0.005质量份以上20质量份以下、例如0.01质量份以上10质量份、例如 0.02质量份以上10质量份以下、例如0.05质量份以上5质量份以下。另外，上述聚合引发剂 的添加方法没有特别限制，可以与单体(A1或A2)分别添加到溶剂中，也可以预先添加到上 述单体(A1或A2)的溶液中，制备聚合引发剂含有液，将其添加到溶剂中。
[0159] (分散稳定剂）
[0160] 进行聚合时，优选在溶剂中含有分散稳定剂。作为分散稳定剂，可列举HLB为例如3 以上10以下、例如3以上9以下的分散稳定剂等。
[0161] 在有机溶剂中进行聚合反应的情况下，优选油溶性的分散稳定剂，例如，可列举山 梨糖醇酐脂肪酸酯（山梨糖醇酐单硬脂酸酯、山梨糖醇酐单月桂酸酯、脱水山梨糖醇、山梨 糖醇酐单油酸酯、山梨糖醇酐三硬脂酸酯等）、蔗糖脂肪酸酯（蔗糖和硬脂酸、棕榈酸、月桂 酸、油酸等脂肪酸的单、二或三酯等)等。
[0162] 分散稳定剂可以单独使用1种或混合2种以上使用。
[0163] 分散稳定剂的使用量没有特别限制，可以根据聚合的条件适当选择。相对于单体 (A1或A2) 100质量份，分散稳定剂的使用量为例如0.1质量份以20质量份以下、例如0.1质量 份以上15质量份以下、例如0.1质量份以10质量份以下。
[0164] 反相悬浮聚合反应例如如下进行：一边在反应槽中使％气体通气，一边使将混合 物分散在有机溶剂中得到的油包水滴型乳剂悬浮，一边进行聚合，其中，该混合物包含(A1) 含有聚合性基团的羧酸酯单体或(A2)含有聚合性基团和由保护基团[P]所保护的肼基或氧 氨基的单体、（B)交联剂、水、聚合引发剂。油包水滴型乳剂的形成和悬浮可以同时，也可以 先进行油包水滴型乳剂的形成。另外，各成分可以在聚合反应前混合全量，也可以一边搅拌 一部分或全部，一边添加混合。聚合反应条件中，温度为例如50 °C以上90 °C以下、例如60 °C 以上80 °C以下，时间为例如0.5小时以上24小时以下、例如1小时以上20小时以下。
[0165] [聚合反应(水包油滴型乳剂中的聚合)]
[0166] 聚合反应可以如下进行:使混合物在水中分散，形成水包油滴型乳剂，在水包油滴 型乳剂中进行，其中，该混合物包含(A1)含有聚合性基团的羧酸酯单体或(A2)含有聚合性 基团和由保护基团[P]所保护的肼基或氧氨基的单体、(B)交联剂、有机溶剂和聚合引发剂。
[0167] 在水包油滴型乳剂中进行聚合反应的情况下，例如如下进行即可：一边在反应槽 中向溶剂中通N2气体并搅拌溶剂，一边加入包含(A1)含有聚合性基团的羧酸酯单体或(A2) 含有聚合性基团和由保护基团[P]所保护的肼基或氧氨基的单体、（B)交联剂、有机溶剂和 聚合引发剂的混合物，形成单体液滴，例如在50 °C以上90 °C以下、例如60 °C以上80 °C以下、 例如0.5小时以上24小时以下、例如1小时以上20小时以下进行反应。
[0168] (聚合引发剂）
[0169] 作为聚合引发剂可列举自由基聚合引发剂，在能够达成本发明的目的的范围内没 有特别限定，例如，主要可以例示2,2'_偶氮二异丁腈(AIBN)、2,2'_偶氮双-(2-甲基丙腈）、 2，2'-偶氣双-(2，4_二甲基戊臆）、2，2'-偶氣双_(2_甲基丁臆）、1，1 '-偶氣双-(环己臆）、2， 2偶氣双-(2，4_二甲基_4_甲氧基戊臆）、2，2偶氣双-(2，4_二甲基戊臆)等偶氣系聚合 引发剂。另外，有机过氧化物系聚合引发剂也可以适用于本发明。作为有机过氧化物系聚合 引发剂，具体可以例示过氧化特戊酸叔丁酯、叔丁基过氧化2乙基-己酸酯、枯基过氧化2-乙 基己酸酯等过氧化酯类;过氧化二_3,5,5_三甲基己酰、过氧化二月桂酰等过氧化二酰基等 的二酰基过氧化物类。自由基聚合引发剂可以单独使用1种，也可以适当混合多种使用。
[0170] 上述聚合引发剂的使用量可以根据聚合的条件适当设定，相对于单体(A1)或(A2) 100质量份，为例如0.005质量份以上20质量份以下、例如0.01质量份以上10质量份以下、例 如0.02质量份以上10质量份以下、例如0.05质量份以上5质量份以下。另外，上述聚合引发 剂的添加方法没有特别限制，可以与单体(A1)或(A2)分别添加到溶剂中，也可以预先添加 到上述单体(A1或A2)的溶液中，制备聚合引发剂含有液，将其添加到溶剂中。
[0171] (分散稳定剂）
[0172] 在水中进行聚合反应的情况下，作为分散稳定剂，可列举聚乙烯醇、甲基纤维素、 乙基纤维素、羟甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟丁基甲基纤维素、羟乙基纤维素、羧甲基 纤维素、氨基甲基羟丙基纤维素、氨基乙基羟丙基纤维素等纤维素衍生物类、淀粉、西黄蓍 胶、果胶、动物胶(glue)、藻酸或其盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸或其盐、聚甲基丙烯 酸或其盐、聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酰胺、乙酸乙烯酯与马来酸、马来酸酐、丙烯酸、甲基丙 烯酸、衣康酸、富马酸、巴豆酸等不饱和酸的共聚物、苯乙烯与上述不饱和酸的共聚物、乙烯 醚与上述不饱和酸的共聚物以及上述共聚物的盐类或酯类等。分散稳定剂可以单独使用1 种或混合2种以上使用。
[0173] 分散稳定剂的使用量没有特别限制，可以根据聚合的条件适当选择。相对于单体 (A1)或(A2H00质量份，分散稳定剂的使用量为例如0.1质量份以上20质量份以下、例如0.1 质量份以上15质量份以下、例如0.1质量份以上10质量份以下。
[0174] [聚合物颗粒(C)]
[0175] 使用(A1)含有聚合性基团的羧酸酯单体进行聚合时，作为(C)聚合物颗粒，能够得 到具有羧酸酯的聚合物颗粒。因此，本实施方式的制造方法还可以称为"具有羧酸酯的聚合 物颗粒"的制造方法。
[0176] 进行对于如此获得的(C)聚合物颗粒赋予酰肼基的工序，由此，能够制造具有酰肼 基的聚合物颗粒。作为对于(C)聚合物颗粒赋予酰肼基的方法，可列举上述的方法。
[0177] 利用(A2)含有聚合性基团并含有由保护基团[P]所保护的肼基的单体进行聚合的 情况下，作为(C)聚合物颗粒，能够得到具有由保护基团[P]所保护的肼基的聚合物颗粒。因 此，本实施方式的制造方法还可以称为"具有由保护基团[P]所保护的肼基的聚合物颗粒" 的制造方法。
[0178] 将如此获得的(C)聚合物颗粒进行脱保护，由此，能够制造具有酰肼基的聚合物颗 粒。作为将(C)聚合物颗粒进行脱保护的方法，可列举上述的方法。
[0179] 利用(A2)含有聚合性基团并含有由保护基团[P]所保护的氧氨基的单体进行聚合 的情况下，作为(C)聚合物颗粒，能够得到具有由保护基团[P]所保护的氧氨基的聚合物颗 粒。因此，本实施方式的制造方法还可以称为"具有由保护基团[P]所保护的氧氨基的聚合 物颗粒"的制造方法。
[0180] 将如此获得的(C)聚合物颗粒进行脱保护，由此，能够制造具有氧氨基的聚合物颗 粒。作为将(C)聚合物颗粒进行脱保护的方法，可列举上述的方法。
[0181] 在其他实施方式中，本发明提供含有聚合物颗粒和表面活性剂的组合物，该聚合 物颗粒具有用于捕捉糖链的官能团。上述的聚合物颗粒优选由表面活性剂所包覆。
[0182] 根据本实施方式的组合物，能够不使具有用于捕捉糖链的官能团的聚合物颗粒的 糖链捕捉能力降低，而抑制高温条件下的凝集，另外，还能够降低吸湿性。
[0183] 上述的组合物通过下述式(F1)算出的质量的变化率可以为90%以下或112%以 上。式(F1)中，A表示在相对湿度50%、25°C的环境下进行4小时静置处理后的上述组合物的 质量，B表示上述静置处理前的上述组合物的质量。
[0184] 变化率（％)=A/BX100."(F1)
[0185] 在本实施方式的组合物中，作为聚合物颗粒、表面活性剂等，能够使用上述的聚合 物颗粒、表面活性剂。
[0186]《糖链试样的制备方法和分析方法》
[0187]在1个实施方式中，本发明提供利用上述的组合物的糖链试样的制备方法和试样 中的糖链的分析方法。令人惊讶的是，上述的组合物中的聚合物颗粒在与表面活性剂共存 的状态下也具有优异的糖链捕捉能力。因此，无需从组合物除去表面活性剂，而能够直接用 于糖链的捕捉，在便利性上也优异。
[0188]在本实施方式的方法中，首先，使含有糖链的试样与上述的组合物接触，使该糖链 和组合物中的聚合物颗粒结合(工序(a))。换句话说，将上述的糖链捕捉到上述的聚合物颗 粒。
[0189] "含有糖链的试样"例如能够从生物体试样制备得到。作为生物体试样，例如可列 举全血、血清、血浆、尿、唾液、细胞、组织、病毒、植物组织等。另外，在本发明中，可以使用经 纯化或未纯化的糖蛋白。试样还可以通过脱脂、脱盐、蛋白质分级、热改性等的方法进行前 处理。
[0190] 可以利用糖链游离方法，从上述生物体试样所包含的含有糖链的分子(例如，糖蛋 白）中使糖链游离。作为糖链游离方法，可以利用使用N-糖苷酶或0-糖苷酶的糖苷酶处理、 肼分解、碱处理的β脱离等的方法。进行N型糖链的分析的情况下，优选使用N-糖苷酶的方 法。在糖苷酶处理之前，也可以利用胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶等进行蛋白酶处理。
[0191]使如此制备的试样与本发明的聚合物颗粒接触，由此，能够将糖链捕捉于该聚合 物颗粒。在生物体内物质中，糖链是唯一具有醛基的物质。糖链在水溶液等的状态下以环状 的半缩醛型和非环状型的醛型平衡的状态存在。蛋白质、核酸、脂质等糖链以外的生物体内 物质中不包含醛基。因此，如果利用具有与醛基特异性反应并形成稳定的结合的酰肼基、氨 基氧基的聚合物颗粒，则能够选择性地仅捕捉糖链。
[0192]由聚合物颗粒捕捉糖链时的反应体系的pH优选为2以上9以下，更优选为2以上7以 下，进一步优选为2以上6以下。为了调整pH，可使用各种缓冲液。另外，作为捕捉糖链时的溶 剂，也可以使用酸和有机溶剂的混合溶剂。作为所使用的酸，没有特别限制，例如，适合使用 的酸优选为乙酸、甲酸、三氟乙酸、盐酸、柠檬酸、磷酸、硫酸，更优选为乙酸、甲酸、三氟乙 酸、磷酸，进一步优选为乙酸、三氟乙酸。作为有机溶剂，如果可溶解糖和上述的酸，则没有 限制，若捕捉时干燥固化，则捕捉效率上升的情况较多，因此，适合使用乙腈等相比之下低 沸点的有机溶剂。酸和有机溶剂的混合比率优选为0.1:99.9~10:90，更优选为0.5:99.5~ 5:95，最优选为1:99~5:95。捕捉糖链时的温度优选为4°C以上90 °C以下，更优选为30 °C以 上90 °C以下，进一步优选为30 °C以上80 °C以下，最优选为40 °C以上80 °C以下。反应时间可以 适当设定。也可以将聚合物颗粒填充于柱中，使试样溶液通过。
[0193] 接着，清洗与糖链结合的(捕捉了糖链的）聚合物颗粒(工序(b))。
[0194] 通过清洗捕捉了糖链的聚合物颗粒，能够除去被捕捉于聚合物颗粒的物质中糖链 以外的物质(非特异性吸附的物质）。
[0195] 作为除去糖链以外的物质的方法，可以利用如下的方法：用作为具有解离疏水键 的能力的离液剂试剂的胍水溶液清洗的方法；用纯水或水溶性缓冲液(例如磷酸缓冲液、 tri s缓冲液等)清洗的方法。作为清洗工序中的清洗条件，温度为4 °C以上40 °C以下，清洗时 间为10秒以上30分钟以下。作为清洗方法，可以将聚合物颗粒浸渍在清洗液中，重复更换清 洗液，由此进行清洗。
[0196] 具体而言，在离心管或试管中加入聚合物颗粒，加入清洗液，振荡之后，通过离心 操作使聚合物颗粒沉淀，除去上清，重复上述操作，由此进行清洗。例如，在离心管内加入聚 合物颗粒，加入清洗液，使聚合物颗粒自然沉降或通过离心分离强制性沉降之后，除去上 清，重复上述操作，由此能够进行清洗。上述清洗操作优选进行3次以上6次以下。利用磁性 珠子的情况下，不需要离心操作，因此简便。
[0197] 另外，也可以利用过滤试管，其为管状的容器，在底面部安装有液体能够透过而该 聚合物颗粒不能透过的孔径的过滤器。在该过滤试管中加入聚合物颗粒使用，由此，能够经 过滤器除去清洗所需的清洗液，不需要上述的离心操作后的上清除去的工序，能够实现操 作性的提尚。
[0198] 另外，市售有各种6~384孔的多孔板的底部安装有上述过滤器的产品，可以通过 利用这些板进行高处理量化。特别是96孔多孔板开发有溶液分注设备、抽吸除去系统和板 的搬运系统等，对于高处理量化最为适合。
[0199] 以连续式进行糖链捕捉反应的情况下，清洗处理还可以使清洗溶液通过柱，从糖 链捕捉反应连续地处理。另外，利用多孔板的情况下，也可以通过过滤操作或离心操作除去 捕捉了糖链的聚合物颗粒以外的物质。
[0200] 另外，聚合物颗粒上的剩余官能团例如可以利用乙酸酐等进行封端。
[0201 ]接着，使糖链从与糖链结合的(捕捉了糖链的）聚合物颗粒游离(工序(c))。
[0202]为了从聚合物颗粒切下糖链，优选进行酸处理。在酸处理中，可以利用酸和有机溶 剂的混合溶剂或者酸、水和有机溶剂的混合溶剂。用酸、水和有机溶剂的混合溶剂的情况 下，水的含有率优选为〇 . 1 %以上90 %以下，更优选0.1 %以上80 %以下，进一步优选为 0.1 %以上50 %以下。可以代替水，含有水性缓冲液。缓冲液的浓度优选为0 . ImM以上1M以 下，更优选为〇. ImM以上500mM以下，进一步优选为ImM以上100mM以下。反应溶液的pH优选为 2以上9以下，更优选为2以上7以下，进一步优选为2以上6以下。所使用的酸例如优选乙酸、 甲酸、三氟乙酸、盐酸、柠檬酸、磷酸、硫酸，更优选为乙酸、甲酸、三氟乙酸、磷酸，进一步优 选为乙酸、三氟乙酸。关于反应温度，优选为4 °C以上90 °C以下，优选为25 °C以上90 °C以下， 进一步优选为40°C以上90°C以下。反应时间为10分钟以上24小时以下，优选为10分钟以上8 小时以下，更优选为10分钟以上3小时以下。从高效进行使糖链游离的反应的观点出发，反 应优选在开放体系进行使溶剂完全蒸发。
[0203] 可以在从弱酸性到中性附近进行糖链的游离反应，因此，与以往的强酸性处理、例 如基于10%三氟乙酸处理的切出那样的强酸存在下的切出反应相比，能够抑制唾液酸残基 的脱离等糖链的水解等的发生。
[0204] 接下来，还可以将上述工序中得到的游离的糖链标记化。作为标记化的方法，可列 举还原的氨基化法和交换反应法。
[0205] 在还原的氨基化法中，通过具有氨基的化合物，将糖链标记化。在反应体系中，可 以利用酸和有机溶剂的混合溶剂或者酸、水和有机溶剂的混合溶剂。作为所使用的酸，没有 特别限制，可以适合使用的酸例如优选为乙酸、甲酸、三氟乙酸、盐酸、柠檬酸、磷酸、硫酸， 更优选为乙酸、甲酸、三氟乙酸、磷酸，进一步优选为乙酸、三氟乙酸。作为有机溶剂，如果能 够溶解上述的酸，则没有限制，可以适合使用二甲基亚砜等。酸和有机溶剂的混合溶剂的情 况下，酸和有机溶剂的混合比率优选为1:99~50:50，更优选为5:95~50:50，最优选为10: 90~50:50。另外，酸、水和有机溶剂的混合溶剂的情况下，与有机溶剂的比率无关，优选pH 测定时所得到的结果为酸性到中性的条件，优选pH为2以上9以下，更优选为2以上8以下，进 一步优选为2以上7以下。无论是酸和有机溶剂的混合溶剂的情况，还是酸、水和有机溶剂的 混合溶剂的情况，关于反应温度，优选为4 °C以上90 °C以下，优选为25 °C以上90 °C以下，进一 步优选为40 °C以上90 °C以下。氨基化合物的浓度优选为ImM以上10M以下，还原剂的浓度优 选为ImM以上10M以下。反应时间为10分钟以上24小时以下，优选为10分钟以上8小时以下， 更优选为10分钟以上3小时以下。
[0206] 其中，具有氨基的化合物优选具有紫外可见吸收特性或荧光特性，具体而言，优选 选自下述中的至少1种。
[0207] 8-氨基芘-1，3，6-三磺酸盐、8-氨基萘-1，3，6-三磺酸盐、7-氨基-1，3-萘二磺酸、 氨基-9( 10H)-卩丫啶酮、5-氨基焚光素、丹酰乙二胺、2-氨基吡啶、7-氨基-4-甲基香显素、 2-氨基苯甲酰胺、2-氨基苯甲酸、3-氨基苯甲酸、7-氨基-1-萘酚、3-(乙酰氨基)-6-氨基吖 啶、2-氨基-6-氰乙基吡啶、对氨基苯甲酸乙酯、对氨基苯甲腈和7-氨基萘-1，3-二磺酸。
[0208]特别是氨基化合物为2-氨基苯甲酰胺时的反应条件如下。在反应体系中，可以使 用酸和有机溶剂的混合溶剂或者酸、水和有机溶剂的混合溶剂。酸和有机溶剂的混合溶剂 的情况下，酸和有机溶剂的混合比率优选为1:99~50:50，更优选为5:95~50:50，最优选为 10:90~50:50。另外，酸、水和有机溶剂的混合溶剂的情况下，与有机溶剂的比率无关，优选 pH测定时所得到的结果为酸性到中性的条件，优选pH为2以上9以下，更优选为2以上8以下， 进一步优选为2以上7以下。关于反应温度为4 °C以上90 °C以下，优选为30 °C以上90 °C以下， 进一步优选为40 °C以上80 °C以下。氨基化合物的浓度为ImM以上10M以下，优选为10mM以上 10M以下，进一步优选为lOOmM以上1M以下。还原剂的浓度为ImM以上10M以下，优选为10mM以 上10M以下，进一步优选为lOOmM以上2M以下。反应时间为10分钟以上24小时以下，优选为10 分钟以上8小时以下，进一步优选为1小时以上3小时以下。
[0209] 另外，还原剂可以使用例如氰基硼氢化钠、甲基胺硼烷、二甲基胺硼烷、三甲基胺 硼烷、甲基吡啶硼烷、吡啶硼烷等，从反应性方面考虑，优选使用氰基硼氢化钠。
[0210] 之前的糖链的切下工序后，所得到的溶液中存在经标记的糖链和过剩量加入的未 反应的氨基化合物、还原剂，因此，优选进行除去这些剩余试剂的工序。利用基于硅胶色谱 柱的除去、基于凝胶过滤的除去、基于离子交换树脂除去的任意的方法均可，为了防止唾液 酸的离脱，使用的溶剂优选为中性。
[0211] 另外，在交换反应法中，清洗操作后，使具有氨基氧基的化合物作用，由此，通过 腙-肟交换反应(与糖链的醛基特异性反应的官能团为酰肼基的情况)或肟-肟交换反应(与 糖链的醛基特异性反应的官能团为氨基氧基的情况），糖链从聚合物颗粒被切下，同时被氨 基氧化合物标记化。因此，本标记方法的情况下，不需要通过酸处理将糖链从聚合物颗粒切 下的操作。
[0212] 具有氨基氧基的化合物优选含有以下部分，该部分包括精氨酸残基、色氨酸残基、 苯丙氨酸残基、酪氨酸残基、半胱氨酸残基和这些衍生物中的至少一种。
[0213] 作为含有这些的化合物的一例，可列举选自邻苄基羟胺;邻苯基羟胺;邻(2,3,4， 5,6_五氟苄基)羟胺;邻(4-硝基苄基)羟胺;2-氨基氧吡啶;2-氨基氧基甲基吡啶;4_[(氨基 氧乙酰基)氨基]苯甲酸甲酯;4-[(氨基氧乙酰基)氨基]苯甲酸乙酯;4-[(氨基氧乙酰基)氨 基]苯甲酸正丁酯；和N-氨基氧乙酰基-色氨酰基(精氨酰胺）中的物质或其盐，特别优选具 有下述式(16)或（17)所示的结构。
[0216]在交换反应时的反应体系中，可以利用酸和有机溶剂的混合溶剂或者酸、水和有 机溶剂的混合溶剂。酸和有机溶剂的混合溶剂的情况下，酸和有机溶剂的混合比率优选为 0.1:99.9~10:90,更优选为0.5:99.5~5:95,最优选为1:99~5:95。另外，酸、水和有机溶 剂的混合溶剂的情况下，与有机溶剂的比率无关，优选pH测定时所得到的结果为pH2以上7 以下，更优选为PH3以上6以下，最优选为pH3.5以上5.5以下。通过加入乙酸/乙腈溶液，能够 将反应液调整为上述的pH。交换反应时的温度优选为50°C以上95°C以下，更优选为60°C以 上90 °C以下，最优选为70 °C以上90 °C以下。交换反应时，通过将反应容器开放并进行加热操 作，一边使溶剂蒸发，一边进行反应，最终使其干燥固化，由此，能够高效地进行交换反应。 [0217]能够通过以上的工序制备糖链试样。在试样中的糖链的分析方法中，对通过上述 的糖链试样的制备方法游离的糖链进行分析(工序(d))。可以将经过上述的方法回收的糖 链溶液直接、或除去过剩包含的标记化合物之后，通过质谱分析(例如，MALDI-TOF MS)、色 谱法(例如，HPLC、HPAE-PAD)、电泳(例如，毛细管电泳)等公知的方法，进行糖链的分析(例 如，糖链的结构、量的分析）。在糖链的分析中，可以根据需要参照各种数据库（例如， GlycoMod、Glycosuite、SimGlycan(R)等）〇 [0218]实施例
[0219] 以下，基于实施例和比较例，更具体地说明本发明，但是本发明并不限定于以下的 实施例。
[0220] [实施例1]
[0221](含有聚合性基团的羧酸酯单体(A1)的合成）
[0222]通过以下的方案合成作为含有聚合性基团的羧酸酯单体的化合物(e)。
[0224] 将在100mL的氯仿中溶解甲基丙烯酸酐(MAH: 5g、0.03mo 1)得到的溶液，在冰浴上 滴加到在1 OOmL的氯仿中溶解25g的（亚乙二氧基)双（乙胺）（EDBEA: 25g，0.17mo 1)得到的溶 液中。向其封入氮，进行彻夜搅拌。将从得到的反应溶液使溶剂蒸发而得的残留物，注入硅 胶色谱柱(展开溶剂:氯仿9 0容积/甲醇10容积的混合溶剂），截取规定的组分(f r a c t i ο η)， 使溶剂从该组分蒸发，得到中间产物(c)。向将该中间产物(c) 5g(0.023mo 1)溶解于1 OOmL的 氯仿中得到的溶液，加入1.5当量的琥珀酸单甲酯和1.5当量的作为水溶性碳化二亚胺化合 物(WSC)的1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺，进行密封。向其封入氮，进行彻夜搅 拌。将从得到的反应溶液使溶剂蒸发而得的残留物，注入硅胶色谱柱(展开溶剂:氯仿90容 积/甲醇10容积的混合溶剂），截取规定的组分，使溶剂从该组分蒸发，得到含有聚合性基团 的羧酸酯单体(e)。另外，利用匪R、基质辅助激光解析电离飞行时间质谱分析器(MALDI- TOF-MS)，确认所得到的化合物(e)是目的化合物。
[0225](通过反相悬浮聚合反应的聚合物颗粒的合成）
[0226]在可密闭的聚合容器中装入40mL的含有0.2%山梨糖醇酐单硬脂酸酯的环己烷， 用氮吹扫(purge)体系中的氧。将包括2g的上述羧酸酯单体(e)(6mmol)、二甲基丙稀酸乙二 醇酯(E⑶MA:相对于甲基酯含有单体为5mol%)、1.5mL的纯水和0.0175g的过氧二硫酸钾 (相对于全部单体为lmol%)的混合物，一边进行氮吹扫，一边向上述聚合容器导入，分散在 含有山梨糖醇酐单硬脂酸酯的环己烷中。停止氮吹扫并密闭之后，一边搅拌，一边以70°C反 应16小时。
[0227] 将生成的聚合物颗粒通过离心分离回收，用乙醇和水清洗。
[0228] (酰肼基的导入）
[0229] 将聚合物颗粒500mg取至容器中，加入水合肼（原液、98体积％以上）4mL，进行搅 拌，在室温静置2小时。反应后，将水合肼除去，用甲醇清洗之后，用1M盐酸进行冲洗。之后进 一步用纯水清洗，得到具有酰肼基的聚合物颗粒。
[0230](通过表面活性剂的包覆）
[0231]将上述具有酰肼基的聚合物颗粒100mg在山梨糖醇酐单硬脂酸酯的2wt%环己烷 溶液lmL中分散之后，进行离心分离。之后，除去上清后进行真空干燥，通过表面活性剂包 覆，得到实施例1的聚合物颗粒(含有聚合物颗粒和表面活性剂的组合物）。
[0232][实施例2]
[0233]在实施例1中通过表面活性剂包覆时，代替山梨糖醇酐单硬脂酸酯的2wt%环己烷 溶液，使用山梨糖醇酐三硬脂酸酯的2wt%环己烷溶液，除此之外，与实施例1同样操作，得 到实施例2的组合物。
[0234] [实施例3]
[0235] 在实施例1中通过表面活性剂包覆时，代替山梨糖醇酐单硬脂酸酯的2wt%环己烷 溶液，使用月桂基硫酸钠的2wt %乙醇溶液，除此之外，与实施例1同样操作，得到实施例3的 组合物。
[0236] [实施例4]
[0237] (通过悬浮聚合反应的聚合物颗粒的合成）
[0238] 在可密闭的聚合容器中装入40mL的0.15 %聚乙烯醇水溶液，用氮吹扫体系中的 氧。将包括2g的上述羧酸酯单体(e)(6mmol)、二甲基丙烯酸乙二醇酯(EGDMA:相对于甲基酯 含有单体为5mol% )、1.5mL的氯仿和O.Ollg的偶氮二异丁腈(相对于全部单体为lmol%)的 混合物，一边进行氮吹扫，一边向上述聚合容器导入，分散在聚乙烯醇水溶液中。停止氮吹 扫并密闭之后，一边搅拌，一边以70°C反应16小时反应。将生成的聚合物颗粒通过离心分离 回收，用甲醇和水清洗。
[0239] (酰肼基的导入）
[0240] 将聚合物颗粒500mg取至容器中，加入水合肼（原液、98体积％以上）4mL，进行搅 拌，在室温静置2小时。反应后，将水合肼除去，用甲醇清洗之后，用1M盐酸进行冲洗。之后进 一步用纯水清洗，得到具有酰肼基的聚合物颗粒。
[0241](通过表面活性剂的包覆）
[0242]将上述具有酰肼基的聚合物颗粒100mg在山梨糖醇酐单硬脂酸酯的2wt%环己烷 溶液lmL中分散之后，进行离心分离。之后，除去上清后进行真空干燥，通过表面活性剂包 覆，得到实施例4的聚合物颗粒(含有聚合物颗粒和表面活性剂的组合物）。
[0243][实施例5]
[0244]在实施例4中通过表面活性剂包覆时，代替山梨糖醇酐单硬脂酸酯的2wt%环己烷 溶液，使用山梨糖醇酐三硬脂酸酯的2wt%环己烷溶液，除此之外，与实施例1同样操作，得 到实施例5的组合物。
[0245][实施例6]
[0246]在实施例4中通过表面活性剂包覆时，代替山梨糖醇酐单硬脂酸酯的2wt%环己烷 溶液，使用月桂基硫酸钠的2wt%甲醇溶液，除此之外，与实施例1同样操作，得到实施例6的 组合物。
[0247] [比较例1]
[0248] 将在实施例1中未经表面活性剂包覆的组合物设为比较例1的组合物。
[0249] [比较例2]
[0250] 将在实施例4中未经表面活性剂包覆的组合物设为比较例2的组合物。
[0251] 〈实验例1>
[0252] [ 60 °C保存前后的粒径的变化]
[0253]将实施例和比较例的组合物各50mg以23 °C进行12小时以上真空干燥。接着，将各 组合物放入塑料制容器中，进一步与硅胶干燥剂一同封入铝袋中。将其在60°C的烘箱内进 行3天保温处理。
[0254]利用日机装株式会社制激光衍射/散射式粒度分析仪MT3300,对以60°C进行了保 温处理的组合物的粒度分布进行测定，将组合物中的聚合物颗粒的平均粒径与60°C保存前 的测定结果比较。
[0255] 另外，基于下式(F2)计算平均粒径的变化率。式(F2)中，C表示保温处理后的组合 物中的聚合物颗粒的平均粒径，D表示保温处理前的组合物中的聚合物颗粒的平均粒径。
[0256] 变化率（％)=C/DX100."(F2)
[0257] [表1]
[0259] 在实施了表面活性剂处理的实施例中，60°C保温处理前后，均几乎没有粒径变化， 在未实施表面活性剂处理的比较例中，60°C保温处理后，粒径变大。即，可以认为通过表面 活性剂处理抑制了 60°C保温处理中的凝集。
[0260] 〈实验例2>
[0261] [60°C保温处理前后的酰肼基量的变化]
[0262] 对于实施例和比较例的组合物，利用2，4，6-三硝基苯磺酸(TNBS)，测定以60°C保 温处理前后的酰肼基量。即，将各组合物在TNBS水溶液中分散，从分散前后的345nm的吸光 度的差计算酰肼基量。测定结果表示如下。
[0263][表 2]
[0265] 单位:μπιο?/mg
[0266] 无论是在实施例还是比较例中，通过60°C保温处理，酰肼基量都没有发生变化。 即，与是否进行表面活性剂处理无关，表现出在60°C的酰肼基量的保存性。
[0267] 〈实验例3>
[0268] [聚合物颗粒的吸湿性评价]
[0269] 取一定量的实施例和比较例的组合物于塑料制容器中，进行大气开放(在相对湿 度50%、25°C的环境下静置），调查4小时后的质量的变化率，评价吸湿性。质量的变化率根 据下述式(F1)计算。式(F1)中，A表示在相对湿度50%、25°C的环境下进行4小时静置处理后 的组合物的质量，B表示静置处理前的组合物的质量。
[0270] 变化率（％)=A/BX100'"(F1)
[0271] 实验进行了多次。将代表性的实验结果示于表3和表4。
[0276] 其结果，虽然存在些许偏差，但与比较例的组合物相比，实施例的组合物表现出吸 湿更少(质量的变化率小）的结果。另外，比较例1中，随着吸湿，聚合物颗粒凝集、吸附于塑 料容器等、操作性变差，但进行了表面活性剂处理的实施例的组合物中，均未确认到如此的 现象。
[0277] 〈实验例4>
[0278] [来自牛血清的IgG的糖链分析]
[0279] 1生物体试样的预处理
[0280] 将来自牛血清的IgGlmg溶解于100mM碳酸氢铵50yL后，加入120mM DTT(二硫苏糖 醇）5yL，以60°C反应30分钟。反应终止后，加入123mM IAA(碘乙酰胺）10yL，在遮光下、室温 反应1小时。接着，用400U的胰蛋白酶进行蛋白酶处理，将蛋白质部分进行肽片段化。将反应 溶液在90°C处理5分钟后，进行通过5U的糖苷酶F的处理，使糖链从肽游离，得到预处理过的 生物体试样。
[0281] 2糖链捕捉工序(a)、清洗工序(b)
[0282] 向装有实施例和比较例的聚合物颗粒(组合物)各5mg的一次性柱中，加入预处理 过的生物体试样的悬浮物20yL和180yL的2 %乙酸/乙腈溶液，以80 °C反应1小时。反应在开 放体系中进行，以目测确认溶剂完全蒸发并组合物为干燥固化的状态。接着，用胍溶液、纯 水、甲醇、三乙胺溶液清洗聚合物颗粒后，添加10%乙酸酐/甲醇，在室温反应30分钟，将未 反应的酰肼基封端。封端后，用纯水清洗组合物。
[0283] 3糖链游离工序(c)
[0284] 接下来在该一次性柱中加入纯水20yL和2%乙酸/乙腈溶液180yL，以70°C反应1.5 小时。反应在开放体系中进行，以目测确认溶剂完全蒸发并组合物为干燥固化的状态。
[0285] 4标记化工序（d)
[0286] 另外，将2-氨基苯甲酰胺(2-AB)和氰基硼氢化钠以最终浓度分别成为0.35M、1M的 方式，溶解于30%乙酸/DMS0混合溶剂中，进行调整得到溶液，添加该溶液50yL，以60°C反应 2小时。
[0287] 上述糖链捕捉工序(a)、清洗工序(b)、糖链游离工序(c)和标记化工序(d)在作为 同一容器的一次性柱内进行。
[0288] 5剩余试剂除去工序
[0289] 将反应溶液50yL回收，以乙腈稀释为10倍之后，添加到填满硅胶（Iatrobeads、 6RS-8060、三菱化学yatoron制）的柱中，使标记糖链吸附于硅胶。用乙腈、乙腈/水混合溶液 (95:5)清洗柱之后，利用纯水50yL回收标记糖链。
[0290] 6标记化糖链的检测
[0291 ] 利用HPLC对所得到的标记糖链进行测定。利用氨基色谱柱（Shodex Asahipak NH2P-50)以激发波长330nm、荧光波长420nm测定。其结果，检出通过2AB所标记化的糖链。
[0292] 图1表示从实施例1、4和比较例1、2中得到的HPLC图谱求得的峰总面积。如图1所 示，任何一个组合物的峰总面积均为等同的大小。即，总糖链捕捉量均为等同。其他的实施 例也是同样的结果。
[0293] 图2表示以通过实施例1、4和比较例1、2中得到的HPLC图谱检测的主要的7个峰的 面积比率。横轴表示峰编号。如图2所示，可知任何一个组合物的各峰的面积比率均为等同， 能够以相同比率捕捉相同糖链。其他的实施例中也是同样的结果。
[0294] 由上可知表面活性剂并不阻碍糖链捕捉性能。
[0295] 〈实验例5>
[0296] [加速试验]
[0297] 取一定量的实施例4和比较例2的组合物于塑料制容器中，在约23°C进行12小时以 上真空干燥之后，与硅胶干燥剂一同封入铝袋中，以密闭的状态在37°C保存3个月。从阿伦 尼乌斯作图法(Arrhenius Plot)的结果可知，该处理相当于以4°C保存2.8年。
[0298] 将这些组合物分散于水中，用吸移管抽吸的结果，相对于比较例2的组合物在吸移 管的前端有聚合物颗粒堵塞，实施例4的组合物中没有确认到这种现象。
[0299] 接着，如上述同样操作，测定这些颗粒的粒度分布，并且在静置处理的前后比较平 均粒径的结果，在比较例2的组合物中的聚合物颗粒，从68μπι大幅增加至133μπι，进行凝集， 相对于此，在实施例4的组合物中的聚合物颗粒，限于从68μηι到85μηι的变化。
[0300] 另外，对于静置处理后的实施例4的组合物、以及进行上述静置处理的期间以4°C 保存的实施例4的组合物，求得酰肼基量的结果，均与刚制造好后相同，没有确认到有差异。
[0301] 另外，利用O.Uig的麦芽七糖，与实验例4同样操作，研究糖链捕捉性能。图3是表示 糖链捕捉性能的研究结果的图表。如图3所示，在静置处理的前后，没有确认到从HPLC图谱 求得的峰总面积变化。该结果表示静置处理后的组合物维持了糖链捕捉性能。
[0302]从以上的结果可以得知，实施例的组合物在维持糖链捕捉性能的状态下，比以往 更能够抑制凝集。
[0303] 工业上的可利用性
[0304]本发明的聚合物颗粒在糖链捕捉能力之外，品质稳定性和操作性也优异。不仅是 糖链研究，还能够用于来自天然物的糖链回收、糖链标准物质的制造，进而，还能应用于基 于糖链分析的疾病标志物的探索、基于糖链分析的诊断等医疗的领域中。
【主权项】
1. 一种组合物，其特征在于： 其含有聚合物颗粒，该聚合物颗粒具有用于捕捉糖链的官能团，该组合物通过下述式 (F1)算出的质量的变化率大于90%小于112%， 变化率（％ ) =A/BX 100··· (F1) 式(F1)中，A表示在相对湿度50%、25°C的环境下进行4小时静置处理后的所述组合物 的质量，B表示所述静置处理前的所述组合物的质量。2. 如权利要求1所述的组合物，其特征在于： 通过下述式(F2)算出的平均粒径的变化率为90 %以上120 %以下， 变化率（％ ) =C/D X 100··· (F2) 式(F2)中，C表示将所述组合物在干燥条件下以60°C进行3天保温处理后，使其悬浮在 水中，用激光衍射/散射式粒度分析仪测定得到的所述组合物中的聚合物颗粒的平均粒径， D表示使所述保温处理前的所述组合物悬浮在水中，用激光衍射/散射式粒度分析仪测定得 到的所述组合物中的聚合物颗粒的平均粒径。3. 如权利要求1或2所述的组合物，其特征在于： 含有所述聚合物颗粒的组合物还含有表面活性剂。4. 如权利要求3所述的组合物，其特征在于： 所述聚合物颗粒由所述表面活性剂所包覆。5. 如权利要求3或4所述的组合物，其特征在于： 所述表面活性剂为山梨糖醇酐脂肪酸酯或阴离子性表面活性剂。6. 如权利要求1至5中任一项所述的组合物，其特征在于： 所述聚合物颗粒的平均粒径为〇. 〇5μηι以上ΙΟΟΟμηι以下。7. 如权利要求1至6中任一项所述的组合物，其特征在于： 所述官能团为酰肼基或氨基氧基。8. 如权利要求1至7中任一项所述的组合物，其特征在于： 所述聚合物颗敕县有下沭忒（η所示的夺3#型聚合物结核I,式（1)中，R\R2表示可以由-0-、-S-、-NH-、-C0-、-C0NH-中断的碳原子数1以上20以下的 烃链，R3、R4、R5表示H、CH3或碳原子数2以上5以下的烃链，m: η = 99:1~70:30。9. 如权利要求8所述的组合物，其特征在于： 所述交联型聚合物结构如下述式(2)所示，式（2)中，m:n = 99:l ~70:30。10. -种糖链试样的制备方法，其特征在于，包括： (a) 混合含有糖链的试样和权利要求1至9中任一项所述的组合物，使所述糖链和所述 组合物中的聚合物颗粒结合的工序； (b) 清洗与所述糖链结合的所述聚合物颗粒的工序;和 (c) 使所述糖链从与所述糖链结合的所述聚合物颗粒游离的工序。11. 一种试样中的糖链的分析方法，其特征在于，包括： (a) 混合含有糖链的试样和权利要求1至9中任一项所述的组合物，使所述糖链和所述 组合物中的聚合物颗粒结合的工序； (b) 清洗与所述糖链结合的所述聚合物颗粒的工序； (c) 使所述糖链从与所述糖链结合的所述聚合物颗粒游离的工序;和 (d) 对游离的所述糖链进行分析的工序。
【文档编号】G01N30/88GK105874330SQ201580003628
【公开日】2016年8月17日
【申请日】2015年1月13日
【发明人】松元孝行
【申请人】住友电木株式会社