一种载有镜检浮载剂的线虫玻片的制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种载有镜检浮载剂的线虫玻片制备方法，通过本方法制备的线虫玻片中加载有由二甲基亚砜、甘油、氢氧化甲、三乙醇胺、96％体积百分比浓度的酒精、40％体积百分比浓度的甲醛溶液、无菌蒸馏水配制的浮载液，由于所载浮载液的渗透，提高了虫体的膨胀度，由于相比蒸馏水作为镜检介质的浮载液的折射率更高且更接近线虫虫体自身的折射率，增加了显微镜的分辨率和线虫虫体的透明度，从而改善了对线虫细微特征的观察效果。
【专利说明】
一种载有镜检浮载剂的线虫玻片的制备方法
技术领域
[0001]本发明涉及线虫玻片的制作方法，具体涉及一种载有镜检浮载剂的线虫玻片制备方法。
【背景技术】
[0002]线虫(nematode)是一种低等无脊椎动物，广泛分布于陆地、海洋和湖泊之中。据保守估计，全世界线虫种类超过50万种，线虫中的一些种类具有寄生性，按照寄主种类可分为动物寄生类和植物寄生类。线虫通过其对寄主的危害，从而引起经济损失，有些种类则直接危害人类。近年来，随着国际间贸易往来的日益频繁，线虫病害传播的机会大大增加，使得线虫成为世界各国广泛关注的对象。如我国2007年公布的对外植物检疫性有害生物名录中，有20种(属)的线虫为检疫性线虫。对线虫进行分类鉴定是研究其致病机理的基础，目前在线虫分类鉴定领域使用的线虫鉴定方法主要有形态学鉴定方法和分子生物学鉴定方法。虽然近些年来分子生物学的蓬勃发展使线虫分类鉴定进入了新的层次，但分子鉴定发展历史还不长，其鉴定体系尚未完善，同时分子生物学鉴定需要的技术要求较高，需要特定的仪器设备才能开展。因此可预见的一段时期内，利用显微镜等简单仪器进行的形态学鉴定依然是线虫分类鉴定的主要技术手段。利用显微镜对线虫分类鉴定和形态研究，一般首先要制作线虫玻片，目前线虫临时玻片制作一般直接用水做浮载剂。在利用显微镜进行线虫分类鉴定时的一般方法是，将线虫虫体置放于载玻片中央的浮载剂中，加盖盖玻片后进行显微镜镜检观察。观察的要点是线虫虫体各种微小特征机构，包括消化系统、生殖系统和体表系统的各结构形状、大小、数量等。其中部分结构特征大小仅2 μ m-10 μ m，观察时受到显微镜分辨率和样品自身结构的影响，这些构造点的观察较为困难，从而影响鉴定的准确性。解决的办法通常是提高显微镜的分辨率及降低样品自身结构的影响两种途径。
【发明内容】
[0003]本发明的目的在于提供一种载有浮载剂的线虫玻片制备方法。通过增加显微镜镜检时介质的折射率，从而提高分辨率，同时增加线虫虫体自身透明度和膨胀度，从而改善镜检时对线虫细微特征的观察效果。
[0004]本发明解决的技术问题是一种载有镜检浮载剂的线虫玻片的制备方法，步骤如下:
[0005]a、量取50ml无菌蒸懼水倒入容器,放置于加热板上，加热至60°C保持5分钟；
[0006]b、向步骤a所述无菌蒸馏水中加入0.4mL 二甲基亚砜溶液，搅拌溶解；
[0007]C、向步骤b所述溶液中加入20mg氢氧化甲，搅拌至全部溶解；
[0008]d、向步骤c所述溶液中加入3.5mL三乙醇胺，搅拌至全部溶解；
[0009]e、向步骤d所述溶液中加入1mL甘油溶液,搅拌至全部溶解；
[0010]f、向步骤e所述溶液在加热板上保温10分钟后，关闭加热板，冷却30分钟；
[0011 ] g、向步骤f所述溶液中加入4mL96%的乙醇溶液，搅拌至全部溶解；
[0012]h、向步骤g所述溶液中加入加入3mL 4%的甲醛溶液，即得到浮载液；
[0013]g、用移液枪将10 μ L步骤g所述溶液滴加于载玻片中央；
[0014]1、用线虫挑针挑取线虫若干条，置于步骤g所述液滴中；
[0015]k、在步骤i所述溶滴上加盖盖玻片，并使用凡士林封闭盖玻片四周，得到载有浮载剂的线虫玻片。
[0016]与现有技术相比，本发明优点在于:
[0017](I)由于甘油等物质的高折射率，加入甘油后的浮载液折射率高于蒸馏水，增加了作为显微镜镜检时介质的浮载液的折射率，从而提高了显微镜观察时的分辨率，可以分辨更为细微的虫体特征；
[0018](2)由于相比蒸馏水作为镜检介质的浮载液的折射率更高且更接近线虫虫体自身的折射率，增加了线虫虫体的透明性，降低了线虫自身结构对观察效果的影响，浮载液的渗透提高了线虫虫体的膨胀率，从而增强对细微特征的辨识。
【附图说明】
[0019]图1为本发明一种载有镜检浮载剂的线虫玻片制备方法的流程图；
[0020]图示中标识 slOU sl02、sl03、sl04、sl05、sl06、sl07、、sl08、sl09、sllO 为流程的各步骤。
【具体实施方式】
[0021]下面结合附图和具体实施例对本发明的具体技术方案做进一步的详细描述。
[0022]图1为本发明的一种载有镜检浮载剂的线虫玻片制备方法的流程图，如图所示，本发明包括以下步骤:
[0023]步骤SlOl，量取50ml无菌蒸馏水倒入容器，放置于加热板上，加热至60°C保持5分钟；
[0024]步骤S102，向无菌蒸馏水中加入0.4mL 二甲基亚砜溶液，并搅拌至全部溶解；
[0025]步骤sl03，向加入二甲基亚砜溶液的无菌蒸馏水中加入20mg氢氧化甲，并搅拌至全部溶解；
[0026]步骤S104，向加入氢氧化甲的二甲基亚砜水溶液中加入3.5mL三乙醇胺，并搅拌至全部溶解；
[0027]步骤sl05，量取1mL甘油溶液，加入sl04步骤所述的溶液中，并搅拌至全部溶解；
[0028]步骤sl06，将sl05步骤所述的溶液在加热板上保温10分钟后，关闭加热板，冷却30分钟；
[0029]步骤sl07，在sl06步骤所述的溶液中加入4mL96%体积浓度百分比的乙醇溶液，搅拌至全部溶解；
[0030]步骤sl08，在sl07步骤所述的溶液中加入3mL 40%体积浓度百分比的甲醛溶液，即得到浮载液；
[0031]步骤sl09，用移液枪将10 μ L所述浮载液滴加于载玻片中央；用线虫挑针挑取线虫若干条，置于液滴中；
[0032]步骤sllO，在步骤sl09所述液滴上加盖盖玻片，并用凡士林封闭盖玻片四周，得到载有浮载剂的线虫玻片。
[0033]以上所述，仅为本发明的较佳实施例而已，并非用于限定本发明的保护范围。
【主权项】
1.一种载有镜检浮载剂的线虫玻片的制备方法，其特征在于步骤如下: a、量取50ml无菌蒸馏水倒入容器，放置于加热板上，加热至60°C保持5分钟； b、向步骤a所述无菌蒸馏水中加入0.4mL 二甲基亚砜溶液，搅拌溶解； C、向步骤b所述溶液中加入20mg氣氧化甲，搅拌至全部溶解； d、向步骤c所述溶液中加入3.5mL三乙醇胺,搅拌至全部溶解； e、向步骤d所述溶液中加入1mL甘油溶液,搅拌至全部溶解； f、向步骤e所述溶液在加热板上保温10分钟后，关闭加热板，冷却30分钟； g、向步骤f所述溶液中加入4mL96%的乙醇溶液，搅拌至全部溶解； h、向步骤g所述溶液中加入加入3mL4%的甲醛溶液，即得到浮载液； g、用移液枪将10 μ L步骤g所述溶液滴加于载玻片中央； 1、用线虫挑针挑取线虫若干条，置于步骤g所述液滴中； k、在步骤i所述溶滴上加盖盖玻片，并使用凡士林封闭盖玻片四周，得到载有浮载剂的线虫玻片。
【文档编号】G01N1/30GK105890957SQ201410535886
【公开日】2016年8月24日
【申请日】2014年10月13日
【发明人】边勇, 刘若思, 郑春生, 汪万春, 高文娜, 吕玉峰, 江丽辉
【申请人】中华人民共和国北京出入境检验检疫局