一种快速检测膀胱癌的试纸的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种快速检测膀胱癌的试纸，本试纸是一种可同时检测核基质蛋白22(NMP22)、膀胱肿瘤抗原(BTA stat)与癌胚抗原相关细胞黏附分子(CEACAM1)三种膀胱癌标志物的联合试纸，它包括三通道底板、加样垫、金标垫、硝酸纤维膜层、吸水纸层，所述的三通道底板上依次覆盖加样垫、金标垫、硝酸纤维膜层、吸水纸层，所述的金标垫中含有抗NMP22、BTA、CEACAM1蛋白单克隆金标抗体。其中三通道底板通过三条微细管道实现标本分流，保证三种标记物之间检测相互独立。本发明试纸检测快速、灵敏度高、特异性强、稳定性好、操作简便，而且结果判断直观可靠、易于掌握。既可以用于在高危人群中的筛查，又可以用于膀胱癌术后病人的随访，应用范围比较广泛。
【专利说明】
一种快速检测膀胱癌的试纸
技术领域
[0001]本发明是一种试纸，具体说是一种可快速诊断膀胱癌的试纸，本试纸是一种同时检测核基质蛋白22(NMP22)、癌胚抗原相关细胞黏附分子(CEACAM1)与膀胱肿瘤抗原(BTAstat)三种膀胱癌标志物的联合试纸。
【背景技术】
[0002]目前膀胱癌的诊断，尤其是术后复发的监测，主要以尿脱落细胞检查和膀胱镜活检为主，但尿脱落细胞学检查受影响因素多，阳性率较低；膀胱镜虽然是最可靠的诊断方法，但属于侵入性操作，有一定的创伤和并发症，不易被病人接受和坚持。
[0003]研究表明，NMP22属于核基质蛋白家族中的一种，又称有丝分裂期蛋白。在DNA的复制、转录以及RNA的加工处理和调控基因表达等方面均起到重要作用。近年来研究表明NMP22是膀胱癌的一种肿瘤标记物，特别是对表浅型膀胱癌的诊断具有较高的敏感性。
[0004]CEACAM1是一种跨膜糖蛋白，是癌胚抗原家族成员。有研究发现，膀胱肿瘤分期越高CEACAM1检出率越高，肌层浸润性膀胱癌患者尿中检出率可达100%，且浓度明显升高。因此CEACAM1可用于鉴别浸润性与非浸润性膀胱癌。
[0005]膀胱粘膜上皮细胞下的基底膜主要由胶原IV、Laminin和糖蛋白构成，在接触相中，肿瘤分泌内源性基底膜蛋白与基底膜表面受体结合，释放出蛋白水解酶(胶原酶或Laminase)破坏基底膜。含基本组分的基底膜破坏碎片进入膀胱腔内，聚集成高分子复合物，而BTA检测正是测定出尿中这些复合物的存在，研究表明，BTA在膀胱新发、复发肿瘤监测上的作用明显优于尿细胞学检查。
[0006]胶体纳米金免疫层析技术(GICA)是一种将胶体金免疫技术和色谱层析技术相结合的固相膜免疫分析技术。该技术是将特异性的抗原或抗体先固定于硝酸纤维膜上，在干燥的硝酸纤维素膜的一端加入液体样品(如血液，尿液等)后，样品由于毛细管的虹吸作用，样品会带着胶体金垫上的金标抗体或抗原会沿着硝酸纤维膜向前移动，当移动到固定有抗原或抗体的区域时，则会发生抗原抗体反应使胶体金在这一带聚集而显出紫红色，从而实现特异性的免疫诊断。
[0007]目前膀胱癌的诊断主要依靠尿脱落细胞检查和膀胱镜活检，虽有已有中国专利公开了一些用于筛查膀胱癌的试纸，但其准确度不是很高，特别是对表浅膀胱癌的诊断，此外对于膀胱癌的分期也无法做出判断，因此本发明旨在采用三种标志物联合，从而提高对浅表型膀胱癌的的诊断的灵敏性，并可对浸润性与非浸润性膀胱癌做出判断，初步了解临床分期，有助于医生选择合理的处理方案，也可用于术后病人的监测，减少有创性检测的次数，如膀胱镜的检查。
【发明内容】
[0008]本发明目的是针对现有技术的不足，提供一种三种膀胱癌标志物检测的联合应用技术。
[0009]本发明的第二个目的是提供一种快速诊断膀胱癌的试纸。
[0010]为实现上述目的，本发明采用的技术方案是:三种膀胱癌标志物NMP22、CEACAMUBTA在制备诊断膀胱癌的医疗器械中的应用。
[0011]所述的医疗器械是诊断试纸或试剂盒，所述的诊断样品是尿液。
[0012]为实现上述第二个目的，本发明采用的技术方案是提供一种快速检测膀胱癌的试纸，所述的试纸由三通道底板、加样垫、胶体金垫、硝酸纤维膜层、吸水纸层组成。
[0013]所述的三通道底板是一种可以通过微细管道很精确的将尿液标本分流到不同的试纸PVC底板，很好的保证了三套检测系统的独立性。
[0014]所述的胶体金垫中含有胶体金与抗NMP22、抗CEACAM1、抗BTA单克隆抗体结合的金标抗体复合物。
[0015]所述的胶体金垫由玻璃纤维和固定其上的金标抗体组成。
[0016]所述的加样垫由吸水性玻璃纤维层组成。
[0017]所述的硝酸纤维膜上至少有一条测试线，检测的阈值为尿NMP22、CEACAMK BTA浓度为 20_100ng/ml。
[0018]所述的试纸上至少有一条质控线，其显色表示试纸有效。
[0019]所述的测试线分别采用的是抗NMP22、抗CEACAM1、抗BTA的多隆抗体，所述的质控线是抗NMP22、抗CEACAMlJjt BTA单克隆抗体的二抗。
[0020]本发明的益处是:
[0021]本发明提供了一种核基质蛋白22(NMP22)、癌胚抗原相关细胞黏附分子(CEACAM1)与膀胱肿瘤抗原(BTA stat)三种膀胱癌标志物在膀胱癌检测中的应用，为膀胱癌的大规模的人群筛查、膀胱癌术后病人的监测提供了简便、可靠、廉价的方法，克服了尿脱落细胞检查敏感性不足和膀胱镜检查有创性的缺点，特别是提高对浅表型膀胱癌诊断的敏感性，并可对浸润性与非浸润性膀胱癌做出判断，初步了解临床分期，有助于医生选择合理的处理方案。
[0022]本发明采用了三通道底板，可以很精确的将尿液标本分流到不同的试纸，很好的保证了三套检测系统的独立性，从而实现了三种肿瘤标志物的联合检测，提高了对膀胱癌诊断的敏感性和特异性，并可对肿瘤的分期做出了初步判断。
[0023]本发明的试纸，使用时快速，稳定，操作简单，敏感性特异性高，并且价格低廉，结果判断直观，有助于病人掌握并实现对病情的自查或自我监测。
[0024]本发明采用了三种肿瘤标志物联合监测，提高了对膀胱癌诊断的敏感性和特异性，特别是提高了对浅表性膀胱癌诊断的敏感性，并可对肿瘤的分期做出了初步判断，既可以用于高危人群的筛查，又可用于膀胱癌术后病人的随访，应用广泛。
【附图说明】
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[0025]图1:一种快速检测膀胱癌的试纸的结构示意图
[0026]图2:—种快速检测膀胱癌的试纸的纵切面结构图
[0027]图3:—种快速检测膀胱癌的试纸的检测结果阳性示意图
[0028]图4:一种快速检测膀胱癌的试纸的检测结果阴性示意图
[0029]图5:—种快速检测膀胱癌的试纸的失效示意图
[0030] 附图标记:1-三通道底板2-加样垫3-检测区4-质控区5-金标垫6_硝酸纤维膜7-吸水纸
【具体实施方式】
[0031 ] I，快速检测膀胱癌的试纸的制备
[0032]附图2是快速检测膀胱癌的试纸的纵切面结构示意图，该试纸由三通道底板1，及三通道底板上依次覆盖的加样垫2、金标垫5、硝酸纤维膜6、吸水纸7。所述的三通道底板I是含有三条微细管道的PVC底板，加样垫2的材料是吸水性玻璃纤维制成，金标垫5是将三种金标抗体复合物溶液喷涂于玻璃纤维膜上构成，其宽度为l_2cm，喷涂量为3ul/cm。硝酸纤维素膜6上的距离金标垫Icm处，三个肿瘤标志物系统分别喷涂有抗NMP22、抗CEACAM1、抗BTA的多隆抗体构成检测区3，宽度为0.2-lcm，喷涂量为2ul/cm。距离检测区l-2cm处，三个肿瘤标志物系统都喷涂有抗NMP22、抗CEACAM1、抗BTA单克隆抗体的二抗构成质控区4，宽度为0.2-lcm,喷涂量为2ul/cm。将上述加样垫、金标垫、硝酸纤维膜、吸水纸依次相互叠加一部分组装在三通道底板上即制成快速检测膀胱癌的试纸。
[0033]2，快速检测膀胱癌的试纸的具体使用方法
[0034]取30-60ul的待检尿液标本加入到加样垫2处，10_20min分钟后观察结果。
[0035]3，检测结果的判断
[0036]阳性结果:如图2所示，三个肿瘤标志物检测区3有I个或多个出现紫红色条带，质控区4三个条带均出现紫红色条带。若BTA条带出现紫红色条带则表明此患者出现新发或复发膀胱癌，若NMP22条带出现紫红色则表明此患者膀胱癌是表浅型的，若CEACAM1出现紫红色条带则表示此患者患有浸润性膀胱癌。
[0037]阴性结果:如图3所示，三个肿瘤标志物检测区3均未出现紫红色条带，质控区4三个条带均出现紫红色条带。
[0038]无效结果:如图5所示，三个肿瘤标志物检测区3均未出现紫红色条带，同时质控区4三个条带也均未出现紫红色条带。
[0039]4，检测原理
[0040]将尿液标本滴加在加样垫上，标本会向吸水纸方向移动，流经金标垫时金标抗体便会溶解，尿液标本中的肿瘤标志物便会和相应的金标抗体结合形成金标抗原抗体复合物，尿液标本继续向前流动，流经检测区时金标抗原抗体复合物会与检测区的相应的抗肿瘤标志物的多克隆抗体结合聚集而显色，表明患者有患膀胱癌的可能，根据显色标志物的不同及标志物的意义，可大致判断患者膀胱癌的分期，流经质控区时，金标抗原抗体复合物与二抗结合而显色，表示试纸有效，如果质控区不显色表明检测无效。
【主权项】
1.三种膀胱癌肿瘤标志物NMP22、CEACAMUBTA在制备诊断膀胱癌的医疗器械中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述的医疗器械是检测试纸或试剂盒，所述的诊断标本为尿液。3.一种快速诊断膀胱癌的试纸由三通道底板、加样垫、胶体金垫、硝酸纤维膜层、吸水纸层组成。4.根据权利要求3所述的三通道底板可以通过三条微细管道很精确的将尿液标本分流到不同的试纸PVC底板，三套检测系统相互独立性。5.根据权利要求3所述的胶体金垫中含有胶体金与抗NMP22、抗CEACAMljABTA单克隆抗体结合的金标抗体复合物。6.根据权利要求3、5所述的胶体金垫由玻璃纤维和固定其上的金标抗体组成。7.根据权利要求3所述的加样垫由吸水性玻璃纤维层组成。8.根据权利要求3所述的硝酸纤维膜上至少有一条测试线，检测的阈值为尿NMP22、CEACAM1、BTA 浓度为 20_100ng/ml。9.根据权利要求8所述的测试线分别采用的是抗NMP22、抗CEACAMljABTA的多隆抗体。10.根据权利要求8所述的质控线是抗NMP22、抗CEACAMljABTA单克隆抗体的二抗。11.根据权利要求10所述的试纸上至少有一条质控线，其显色表示试纸有效。
【文档编号】G01N33/68GK105891500SQ201510023306
【公开日】2016年8月24日
【申请日】2015年1月16日
【发明人】刘晓强, 刘莉, 陈业刚, 王尚任, 杨永姣
【申请人】刘晓强, 刘莉, 陈业刚, 王尚任, 杨永姣