一种利用罗丹明类荧光探针检测三价铬离子的方法
【专利摘要】本发明提供了一种利用罗丹明类荧光探针检测三价铬离子的方法，其特征在于，包括：配制不同浓度的三价铬离子溶液，静置，在激发波长为560nm的条件下，检测发射波长为582nm的荧光强度，以铬离子的浓度为横坐标，荧光强度为纵坐标作图，得到线性关系曲线；将罗丹明类荧光探针溶液加入到NaOH/NaH2PO4缓冲溶液中得到含有荧光探针的缓冲体系，加入待测的三价铬离子溶液，静置，在激发波长为560nm的条件下，检测发射波长为582nm的荧光强度，根据步骤4中得到的线性关系曲线，计算铬离子的浓度。本发明荧光探针能选择性识别三价铬离子，并且不受其它常见离子的干扰、荧光强度高、荧光强度高。
【专利说明】
一种利用罗丹明类荧光探针检测三价铬离子的方法
技术领域
[0001] 本发明属于荧光探针材料检测方法领域，特别涉及一种利用罗丹明类荧光探针检 测三价铬离子的方法。
【背景技术】
[0002] 铬是一种自然界中常见的元素，在地球上分布广泛。常见的铬元素化合物的化合 价主要是+3、+6价，它在保证人类健康、调节植物生长、促进工业发展等方面具有极其重要 的作用。在人类健康方面，三价铬是平衡人体和动物饮食的主要元素，人体和动物体每天大 概需求50-200iig。并且，三价铬在糖类、蛋白质、脂肪和核酸的新陈代谢中起着至关重要的 作用。首先，铬元素可以抑制突变，有一定的防癌作用；其次，铬元素可以调节糖代谢，一定 程度上可以预防糖尿病;再者，铬元素可以调节脂肪代谢，可以降低胆固醇和甘油三脂的含 量。在调节植物生长方面，微量的铬会使得植物体内酶的活性得到提高，可以提高植物的光 合作用，增强植物对疾病的抵抗能力进而提高农作物的产量。在工业方面，铬是工业生产过 程中是必不可或缺的，比如皮革制造、镀层、木材防腐剂、颜料等，其中三价铬广泛应用金属 材料、金属加工材料、金属材料的热处理等行业，三价铬含量对镀层质量至关重要。目前，我 国地表中水中三价铬的含量为〇.5mg/L，该含量可以满足人体中正常铬的需求量，过量的铬 离子对人体健康会造成伤害。随着人们生活水平的提高，在装饰建筑材料的大量使用，使越 来越多的铬暴露在环境中，这对环境是一种负担，同时对人类健康也是存在一种潜在的威 胁。因此，一种具有良好选择性、方便、快速检测铬离子的方法对于环境的保护和监测显得 尤为重要。
[0003] 传统的三价铬离子的检测需要借助大型仪器，多数使用伏安法、原子吸收光谱法、 表面等离子体增强共振散射以及最近比较受关注的比色法等，虽然这些方法可以用来检测 三价铬离子，但是由于仪器体积庞大而受到限制。例如硫酸亚铁铵滴定法可以用来检测三 价铬离子，但是由于样品中含有大量的钒对体系产生很大的影响，因此限制此方法的使用。 常见的二苯碳酰二肼分光光度法具有设备简单、精密、检测线低而被广泛使用，但是该法需 要使用加热来煮沸消解，从而易引起爆沸，煮沸水样的体积难以把握，从而影响检查的准确 性和灵敏度。电感耦合法等离子炬为激发光源的一类光谱分析方法，已在常规分析中广泛 使用，具有分析速度快、精密度高等优点，但在分析过程中样品需要消解，而且需要借助大 型仪器，不利于实时监测。而荧光探针法主要是荧光探针物质与重金属离子发生络合作用， 通过肉眼可以观察到颜色的变化，具有简单、快速、灵敏度高等优点。
【申请人】申请的中国专 利201510869087.0"检测汞离子的反应型罗丹明类荧光探针及其制备与应用"，在乙腈溶液 中，使用荧光光谱法，在激发波长为560nm，检测发射波长为580nm，检测汞离子的浓度在 0.89-60iiM的范围达到一个很好地线性，采用荧光探针法检测汞离子溶液，可实现对汞离子 的实时和快速的检测，在环境检测方面有较好的应用前景。中国专利201310410725.3 "利用 Y _聚谷氨酸稳定的金纳米颗粒检测三价铬离子的方法"，在硼氢化钠溶液中加入不同浓度 的三价铬离子，Y _聚谷氨酸稳定的金纳米颗粒对三价铬离子有较好的灵敏性和选择性。
[0004] 罗丹明B类荧光染料是一种很好的生物荧光物质，具有良好的光物理性质，其吸收 和发射都在长波处（>550nm)，荧光量子产率高，摩尔消光系数大，背景干扰小等优点，因此 在发展荧光探针方面具有重要应用前景。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种罗丹明类荧光探针检测三价铬离子的新方法，该方法操 作简单、检测快速且灵敏度高，能进行溶液中三价铬离子的高灵敏识别。
[0006]为了达到上述目的，本发明提供了一种罗丹明类荧光探针在检测三价铬离子含量 中的应用。
[0007]优选地，所述的罗丹明类荧光探针的结构式为：
[0009] 本发明还提供了一种利用罗丹明类荧光探针检测三价铬离子的方法，其特征在 于，包括：
[0010] 步骤1:配制罗丹明类荧光探针溶液；
[0011] 步骤2:配制三价铬离子溶液；
[0012] 步骤3:配制pH=6 ? 0~7 ? 0的NaOH/NaH2P〇4缓冲溶液；
[0013] 步骤4:分别将步骤1得到的罗丹明类荧光探针溶液加入到步骤3得到的NaOH/ NaH2P04缓冲溶液中得到多个含有荧光探针的缓冲体系，分别加入不同体积的步骤2所得的 三价铬离子溶液，得到不同浓度的三价铬离子溶液，静置，在激发波长为560nm的条件下，检 测发射波长为582nm的荧光强度，以铬离子的浓度为横坐标，荧光强度为纵坐标作图，得到 线性关系曲线；
[0014] 步骤5:将步骤1得到的罗丹明类荧光探针溶液加入到步骤3得到的NaOH/NaH2P〇4缓 冲溶液中得到含有荧光探针的缓冲体系，加入待测的三价铬离子溶液，静置，在激发波长为 560nm的条件下，检测发射波长为582nm的荧光强度，根据步骤4中得到的线性关系曲线，计 算铬离子的浓度。
[0015]优选地，所述的步骤1中的罗丹明类荧光探针的结构式为：
[0017]优选地，所述的步骤1中的罗丹明类荧光探针溶液的配制方法包括:称取一定摩尔 量的罗丹明类荧光探针在乙腈溶剂中配置成l〇〇mL浓度为lxl(T3M的荧光探针溶液，然后取 lmL上述的浓度为lxl(T3M的荧光探针溶液加入到lOmL容量瓶中，然后用乙腈溶剂定容、摇 匀，得到1x10、的荧光探针溶液，取lmL上述的浓度为1x10、的荧光探针溶液加入到10mL 容量瓶中，然后用乙腈溶剂定容、摇匀，得到lxl〇_ 5M的罗丹明类荧光探针溶液。
[0018] 更优选地，所述的乙腈溶剂的纯度为95~98wt%。
[0019]优选地，所述的步骤2中的三价铬离子溶液的配制方法包括:称取一定摩尔量的三 价铬化合物在乙腈溶剂中配置成l〇〇mL浓度为lxl(T3M的三价铬离子溶液，然后取lmL上述的 浓度为lx 1(T3M的三价铬离子溶液加入到1 OmL的容量瓶中，然后用乙腈溶剂定容、摇匀，得到 浓度为1x10_4M的三价铬离子溶液，然后取lmL上述的浓度为lxl(T 4M的三价铬离子溶液加入 到lOmL的容量瓶中，然后用乙腈溶剂定容、摇匀，得到浓度为lxl(T5M的三价铬离子溶液。 [0020]更优选地，所述的三价铬化合物的纯度为95~98wt%。
[0021]优选地，所述的步骤3中的Na0H/NaH2P04缓冲溶液的配制方法包括:称取氢氧化钠 配制0. lmol/L的氢氧化钠溶液，称取磷酸二氢钠0.68g，加入0. lmol/L的氢氧化钠溶液 29 ? lmL，用水稀释至100mL，得到pH=6 ? 0~7 ? 0的NaOH/NaH2P〇4缓冲溶液。
[0022] 更优选地，所述的磷酸二氢钠的纯度为95~98wt%，所述的氢氧化钠的纯度为95 ~98wt%。
[0023]优选地，所述的步骤4中的罗丹明类荧光探针溶液的用量为10此，所述的步骤5中 的罗丹明类荧光探针溶液的用量为1〇此。
[0024]优选地，所述的罗丹明类荧光探针对三价铬离子溶液的检测限达l.OyM。
[0025]本发明的罗丹明类的荧光探针在乙腈溶液中与三价铬离子发生络合，颜色由无色 变成红色，使用荧光光谱法，在激发波长为560nm，检测其发射波长为582nm，此荧光探针的 荧光强度随着三价铬离子浓度的增加而增加的特性，进行的高灵敏度检测。在三价铬离子 的浓度为1. 〇_55yM的范围内，荧光探针的荧光强度变化值与三价铬离子的浓度成良好的线 性关系，相关系数为0.952。
[0026] 与现有技术相比，本发明的有益效果为：
[0027] (1)本发明荧光探针能选择性识别三价铬离子，并且不受其它常见离子的干扰、荧 光强度高。
[0028] (2)采用本发明所制备的荧光探针进行三价铬离子的检测，检测过程简单方便、灵 敏度高、检测线低，可实现对三价铬离子的快速灵敏检测。
[0029] (3)该探针适用于pH值范围为7.0-11.0,这个范围可以满足绝大多数生物样品的 要求，该探针的灵敏度高检测线可达到1. 〇yM。
[0030] (4)本发明方法操作简单、检测快速、灵敏度高且选择性好，该荧光探针对三价铬 离子有很好的选择性，在环境检测方面具有较好的使用效果。
【附图说明】
[0031] 图1为荧光探针加入三价铬离子前后的紫外变化图谱;在图1中，横坐标为紫外吸 收波长(nm)，纵坐标为吸光度。
[0032] 图2为荧光探针加入三价铬离子前后的荧光变化图谱;在图2中，横坐标为荧光发 射波长(nm)，纵坐标为荧光强度。
[0033]图3为浓度为10yM在乙腈溶液中对不同的金属离子(Fe3+、Co2+、Ni 2+、Sr2+、Ba2+、Mn2 +、21!2+、？132+办2+说2+)选择干扰性检测的荧光响应图；在图3中，横坐标为不同的金属离子， 纵坐标为荧光强度。
[0034]图4为浓度为10yM在乙腈溶液中对三价铬离子的荧光光谱响应图；在图4中，横坐 标为焚光发射波长(nm)，纵坐标为焚光强度。
[0035]图5为浓度为60yM与三价铬离子络合比的Job-Plot曲线;横坐标为c [ Cr3+] /c [ Cr3+ +探针]，纵坐标为荧光F-F〇，其中F、F〇是在560nm的荧光发射强度。
[0036]图6为浓度为1 OyM在不同溶剂（甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、DMF)中对三价铬离子的荧 光响应谱图；横坐标为不同的溶剂，纵坐标为荧光强度。
[0037]图7为浓度为50yM的探针溶液使用磷酸二氢钠/氢氧化钠缓冲溶液配置了 一系列 不同pH的缓冲溶液，然后向探针溶液中加入一定量的三价铬离子，检测荧光强度横坐标为 焚光发射波长(nm)，纵坐标为焚光强度。
[0038]图8所示，10yM探针在乙腈溶液中加入0到1000yM的Cr3+离子的荧光发射光谱图，当 其达到1. OyM和55yM之间有良好的线性，线性相关系数达到0.952，其最低检测限为1. OyM。 横坐标为Cr3+的浓度，纵坐标为探针的相对荧光强度F/F〇,然后所做出的线性关系曲线(l x = 560nm) 〇
【具体实施方式】
[0039] 下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明 而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人 员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定 的范围。以下各实施例中所用的乙腈溶剂的纯度为99wt %，磷酸二氢钠的纯度为98wt %，所 述的氢氧化钠的纯度为98wt%。
[0040] 以下实施例中的罗丹明类荧光探针的结构式为式（1)，其合成方法记载在中国专 利201510869087.0"检测汞离子的反应型罗丹明类荧光探针及其制备与应用"中的实施例1 中。
[0041 ] 实施例1
[0042] (1)将罗丹明类荧光探针溶于在乙腈溶剂中，配成10iiM荧光探针溶液，将硝酸铬溶 于乙腈溶剂中，配制成10yM三价铬离子溶液，将lmL 10yM荧光探针溶液加入到lmL 10yM三 价铬离子溶液中，测试加入三价铬离子溶液前后荧光探针溶液的紫外变化图谱，结果如图1 所示。
[0043] (2)将罗丹明类荧光探针溶于在乙腈溶剂中，配成10iiM荧光探针溶液，将硝酸铬溶 于乙腈溶剂中，配制成10yM三价铬离子溶液，将lmL 10yM荧光探针溶液加入到lmL 10yM三 价铬离子溶液中，测试加入三价铬离子溶液前后荧光探针溶液的荧光激发和发射变化图 谱，结果如图2所示。
[0044] (3)将罗丹明类荧光探针溶于在乙腈溶剂中，配成lOiiM荧光探针溶液，分别将 ?6(：13、(：〇(：12、附(：12、3^：12、8&(：12、]?11(：12、211(：12、？13(勵3)2、〇&(：12、〇(1(：12溶于乙腈溶剂中，配成 1 OyM 的 Fe3+、Co2+、Ni2+、Sr2+、Ba 2+、Mn2+、Zn2+、Pb2+、Ca2+和 Cd2+金属离子溶液，将荧光探针溶于 乙腈溶剂中，配制成l〇yM三价铬离子溶液，进行选择干扰性检测，具体步骤为：分别将lmL 10yM 荧光探针溶液与 lmL 10yM 的？63+、(：〇2+、附2+、3￥+、83 2+、]?112+、2112+、？132+、03 2+和〇12+离子溶 液混合，在激发波长为560nm的条件下，检测发射波长为582nm的荧光强度;将lmL 10yM荧光 探针溶液与〇.5mL 10yM三价铬离子溶液混合后，再分别与0.5mL 10yM的Fe3+、Co2+、Ni2+、Sr2 +』&2+蠢2+、2112+、？13 2+、0&2+和0(12+离子溶液混合，在激发波长为56011111的条件下，检测发射波 长为582nm的焚光强度;结果如图3所不。
[0045] (4)基于Stern-Volmer理论，考察罗丹明类荧光探针溶液对于Cr3+离子进行检测时 的线性范围和实际最低检测浓度。
[0046] 将罗丹明类荧光探针溶于在乙腈溶剂中，配制成荧光探针溶液，分别将此荧光探 针溶于乙腈溶剂中，配制成三价铬离子溶液，依次在OyM、1 yM、2yM、3yM、4yM、5yM、6yM、7yM、8 yM、9虚和10虚荧光探针溶液中按体积比1:1加入10虚、9虚、8虚、7虚、6處、5虚、4處、3yM、2y M、lyM和OyM三价铬离子溶液，通过进行荧光测试其谱图变化，激发波长为560nm，发射波长 为582nm，然后根据荧光强度的最大变化值作图并作出络合比的Job-Plot曲线；横坐标为c [Cr 3+]/c[Cr3++探针]，纵坐标为荧光F-F〇,其中F、F〇是在560nm的荧光发射强度。焚光探针溶 液在560nm的激发光激发下，荧光强度很弱，随着铬离子的加入，荧光强度不断增强，根据 Stern-Volmer 方程：
[0047] F/Fo=l+KsvCq
[0048] 其中Fo和F分别表示加入Cr3+离子前后所测得的罗丹明类荧光探针的荧光强度，Ksv 是增强常数，Cq为的Cr3+离子浓度。RHPT增强程度与Cr3+离子呈现良好的线性关系，如图5所 不。
[0049] (5)将罗丹明类荧光探针分别溶于甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、DMF溶剂中，配成lOiiM荧 光探针溶液，将硝酸铬溶于乙腈溶剂中，配制成l〇yM三价铬离子溶液，将lmL 10yM荧光探针 溶液加入到lmL 10yM三价铬离子溶液中，激发波长为560nm，发射波长为582nm，结果如图6 所示。
[0050] (6)将罗丹明类荧光探针溶于在乙腈溶剂中，配成50iiM荧光探针溶液，将硝酸铬溶 于乙腈溶剂中，配制成10yM三价铬离子溶液，分别在lmL 50yM荧光探针溶液加入lmL pH为 0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、11.0、12.0 的磷酸二氢钠 / 氢氧化钠缓冲 溶液，再加入lmL 10yM三价铬离子溶液，激发波长为560nm，发射波长为582nm，检测加入铬 离子溶液前后的荧光强度，结果如图7。
[0051] (7)将罗丹明类荧光探针溶于在乙腈溶剂中，配成50iiM荧光探针溶液，将硝酸铬溶 于乙腈溶剂中，配制成0~l〇〇yM三价铬离子溶液，取lmL的罗丹明类荧光探针依次加入不同 浓度的三价铬离子溶液，激发波长为560nm，发射波长为582nm，检测加入铬离子溶液前后的 荧光强度，当其到达5yM和55yM之间有良好的线性，线性相关系数达到0.981，其最低检测限 为l.OyM，结果如图8,其中荧光检测仪器中狭缝宽度的设置也会使检测限的高低发生相对 变化。
[0052] 实施例2
[0053] 一种利用罗丹明类荧光探针检测三价铬离子的方法，具体步骤为：
[0054]步骤1:配制罗丹明类荧光探针溶液:称取一定摩尔量的罗丹明类荧光探针在乙腈 溶剂中配置成100mL浓度为lxl(T3M的荧光探针溶液，然后取lmL上述的浓度为lxl(T3M的荧 光探针溶液加入到10mL干燥的容量瓶中，然后用乙腈溶剂定容、摇匀，得到lxl(T 4M的荧光探 针溶液，取lmL上述的浓度为lxl(T4M的荧光探针溶液加入到10mL干燥的容量瓶中，然后用乙 腈溶剂定容、摇勾，得到1x10_5M的罗丹明类焚光探针溶液；
[0055]步骤2:配制三价铬离子溶液:称取一定摩尔量的三价铬化合物硝酸铬在乙腈溶剂 中配置成l〇〇mL浓度为lxl(T3M的三价铬离子溶液，然后取lmL上述的浓度为lxl(T3M的三价 铬离子溶液加入到10mL的干燥的容量瓶中，然后用乙腈溶剂定容、摇匀，得到浓度为lxl(T 4M 的三价铬离子溶液，然后取lmL上述的浓度为1x1(T4M的三价铬离子溶液加入到10mL的干燥 的容量瓶中，然后用乙腈溶剂定容、摇匀，得到浓度为lxl(T 5M的三价铬离子溶液；
[0056] 步骤3:配制pH=7.0的NaOH/NaH2P〇4缓冲溶液:称取氢氧化钠配制0. lmol/L的氢氧 化钠溶液，称取磷酸二氢钠〇 . 68g，加入0 . lmol/L的氢氧化钠溶液29 . lmL，用水稀释至 100mL，得到 pH=7.0的NaOH/NaH2P〇4 缓冲溶液。
[0057] 步骤4:分别将步骤1得到的罗丹明类荧光探针溶液10uL加入到步骤3得到的NaOH/ NaH2P〇4缓冲溶液10uL中得到多个含有荧光探针的缓冲体系，分别加入0uL、10uL、20uL、 30uL、40uL、50uL、60uL、70uL、80uL，、90uL、100uL的步骤2所得的三价铬离子溶液，得到不同 浓度的三价铬离子溶液，使用乙腈溶液进行定容，静置lmin，在激发波长为560nm的条件下， 检测发射波长为582nm的荧光强度，以铬离子的浓度为横坐标，荧光强度为纵坐标作图，得 到线性关系曲线y = 1.0597+0.02253x;
[0058] 步骤5:将步骤1得到的罗丹明类荧光探针溶液10uL加入到步骤3得到的NaOH/ NaH2P〇4缓冲溶液10uL中得到含有荧光探针的缓冲体系，加入待测的三价铬离子溶液10uL， 静置lmin，在激发波长为560nm的条件下，检测发射波长为582nm的荧光强度，根据步骤4中 得到的线性关系曲线，计算铬离子的浓度为l.〇xl(T 6M。
[0059] 实施例3
[0060] -种利用罗丹明类荧光探针检测三价铬离子的方法，具体步骤为：
[0061]步骤1 :配制罗丹明类荧光探针溶液：所述的罗丹明类荧光探针参照 201510869087.0"检测汞离子的反应型罗丹明类荧光探针及其制备与应用"的合成方法。所 述的的罗丹明类荧光探针溶液的配制方法为:称取一定摩尔量的罗丹明类荧光探针在乙腈 溶剂中配置成100mL浓度为lxl(T 3M的荧光探针溶液，然后取lmL上述的浓度为lxl(T3M的荧 光探针溶液加入到10mL干燥的容量瓶中，然后用乙腈溶剂定容、摇匀，得到lxl(T 4M的荧光探 针溶液，取lmL上述的浓度为lxl(T4M的荧光探针溶液加入到10mL干燥的容量瓶中，然后用乙 腈溶剂定容、摇勾，得到lxl〇_ 5M的罗丹明类焚光探针溶液；
[0062]步骤2:配制三价铬离子溶液:称取一定摩尔量的三价铬化合物硝酸铬在乙腈溶剂 中配置成l〇〇mL浓度为lxl(T3M的三价铬离子溶液，然后取lmL上述的浓度为lxl(T3M的三价 铬离子溶液加入到10mL的干燥的容量瓶中，然后用乙腈溶剂定容、摇匀，得到浓度为lxl(T 4M 的三价铬离子溶液，然后取lmL上述的浓度为1x1(T4M的三价铬离子溶液加入到10mL的干燥 的容量瓶中，然后用乙腈溶剂定容、摇匀，得到浓度为lxl(T 5M的三价铬离子溶液；
[0063] 步骤3:配制pH=7.0的NaOH/NaH2P〇4缓冲溶液:称取氢氧化钠配制0. lmol/L的氢氧 化钠溶液，称取磷酸二氢钠〇 . 68g，加入0 . lmol/L的氢氧化钠溶液29 . lmL，用水稀释至 100mL，得到 pH=7.0的NaOH/NaH2P〇4 缓冲溶液。
[0064] 步骤4:分别将步骤1得到的罗丹明类荧光探针溶液10uL加入到步骤3得到的NaOH/ NaH2P〇4缓冲溶液10uL中得到10个含有荧光探针的缓冲体系，分别加入10，20，30，40，50，60， 70，80，90，100yL的步骤2所得的三价铬离子溶液，得到不同浓度的三价铬离子溶液，使用乙 腈溶剂进行定容至2mL，静置lmin，在激发波长为560nm的条件下，检测发射波长为582-584nm的荧光强度，结果如图4所示。（图4中的小图是罗丹明类的荧光探针加入到0~lOOyM 的三价铬离子中荧光强度表化的线性曲线图，而在5~55yM有较好的线性变化。）
[0065] 从荧光光谱可得知荧光探针的荧光强度随着三价铬离子浓度的增加而增加，到最 后趋于稳定，且荧光强度的增强值与三价铬离子浓度有良好的线性关系，R 2 = 〇. 981。
[0066] 本发明利用荧光探针，进行三价铬离子的高灵敏检测，荧光探针的荧光强度变化 值与三价铬离子浓度有良好的线性关系，相关系数为R 2 = 〇.952,对三价铬离子的检测线可 达到l.OiiM。本发明方法操作简单、灵敏度高、检测快速且选择型好，可对混合样品中的三价 铬离子进行在线原位快速灵敏检测。
[0067] 尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列 运用，它完全可以被适用于各种本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易的实施 另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围要求所限定的一般概念下，本发明并不限 于特定的细节和这里示出与描述的实施例。
【主权项】
1. 一种罗丹明类巧光探针在检测=价铭离子含量中的应用。2. -种利用罗丹明类巧光探针检测=价铭离子的方法，其特征在于，包括： 步骤1:配制罗丹明类巧光探针溶液； 步骤2:配制=价铭离子溶液； 步骤3:配制pH=6.0~7.0的化OH/Na出P化缓冲溶液； 步骤4:分别将步骤1得到的罗丹明类巧光探针溶液加入到步骤3得到的化OH/化出Kk缓 冲溶液中得到多个含有巧光探针的缓冲体系，分别加入不同体积的步骤2所得的=价铭离 子溶液，得到不同浓度的S价铭离子溶液，静置，在激发波长为560nm的条件下，检测发射波 长为58化m的巧光强度，W铭离子的浓度为横坐标，巧光强度为纵坐标作图，得到线性关系 曲线； 步骤5:将步骤1得到的罗丹明类巧光探针溶液加入到步骤3得到的化OH/化出P〇4缓冲溶 液中得到含有巧光探针的缓冲体系，加入待测的=价铭离子溶液，静置，在激发波长为 560nm的条件下，检测发射波长为58化m的巧光强度，根据步骤4中得到的线性关系曲线，计 算铭离子的浓度。3. 如权利要求2所述的利用罗丹明类巧光探针检测=价铭离子的方法，其特征在于，所 述的步骤1中的罗丹明类巧光探针的结构式为：4. 如权利要求1所述的利用罗丹明类巧光探针检测=价铭离子的方法，其特征在于，所 述的步骤1中的罗丹明类巧光探针溶液的配制方法包括:称取一定摩尔量的罗丹明类巧光 探针在乙腊溶剂中配置成IOOmL浓度为IxlCT3M的巧光探针溶液，然后取ImL上述的浓度为 1 Xl(T3M的巧光探针溶液加入到IOmL容量瓶中，然后用乙腊溶剂定容、摇匀，得到1 Xl(T4M的 巧光探针溶液，取ImL上述的浓度为IxlCT4M的巧光探针溶液加入到IOmL容量瓶中，然后用乙 腊溶剂定容、摇匀，得到IxlCT5M的罗丹明类巧光探针溶液。5. 如权利要求1所述的利用罗丹明类巧光探针检测=价铭离子的方法，其特征在于，所 述的步骤2中的=价铭离子溶液的配制方法包括:称取一定摩尔量的=价铭化合物在乙腊 溶剂中配置成IOOmL浓度为IxlCT3M的S价铭离子溶液，然后取ImL上述的浓度为IxlCT3M的 S价铭离子溶液加入到IOmL的容量瓶中，然后用乙腊溶剂定容、摇匀，得到浓度为IxlCT4M的 =价铭离子溶液，然后取ImL上述的浓度为IxlO-4M的=价铭离子溶液加入到IOmL的容量瓶 中，然后用乙腊溶剂定容、摇匀，得到浓度为IxlCT5M的=价铭离子溶液。6. 如权利要求1所述的利用罗丹明类巧光探针检测=价铭离子的方法，其特征在于，所 述的步骤3中的化OH/Na出Kk缓冲溶液的配制方法包括:称取氨氧化钢配制0.1mol/L的氨氧 化钢溶液，称取憐酸二氨钢0.68旨，加入0.1111〇1几的氨氧化钢溶液29.11111^，用水稀释至 IOOmL，得到抑=6.0~7.0的NaOH/Na出P〇4缓冲溶液。7. 如权利要求1所述的利用罗丹明类巧光探针检测=价铭离子的方法，其特征在于，所 述的步骤4中的罗丹明类巧光探针溶液的用量为lOiiL，所述的步骤5中的罗丹明类巧光探针 溶液的用量为10化。8. 如权利要求1所述的利用罗丹明类巧光探针检测=价铭离子的方法，其特征在于，所 述的罗丹明类巧光探针对=价铭离子溶液的检测限达l.OyM。
【文档编号】G01N21/64GK105911039SQ201610259469
【公开日】2016年8月31日
【申请日】2016年4月22日
【发明人】光善仪, 徐曼曼, 赵刚, 徐洪耀
【申请人】东华大学