气-质联用测定罗汉果中有机磷农药残留的方法
【专利摘要】本发明公开了一种气?质联用测定罗汉果中有机磷农药残留的方法，包括如下步骤：（1）称取罗汉果药材粉末，经超声提取、洗涤、脱色、浓缩、定容制得提取液；（2）经气相色谱?质谱联用对提取液进行测定检测过程，本方法可以实现罗汉果中11种有机磷农药残留的同时测定，且准确度高、检测速度快、重现性好，具有较强的实用价值。
【专利说明】
气-质联用测定罗汉果中有机磷农药残留的方法
技术领域
[0001] 本发明涉及农药残留检测领域，特别是一种气-质联用测定罗汉果中有机磷农药 残留的方法。
【背景技术】
[0002] 目前市场出售的中药材多数为人工种植，在种植过程农药的使用也不可避免的会 造成中药材的污染，其中，有机磷农药是我国使用最多、应用最广的一类人工合成的磷酸酯 类农药，我国使用的有机磷农药已有30多种，为减少中药材中农药残留对人体的负面影响， 对中药材中有机磷农药残留检测方法的建立是非常有必要的。
[0003] 罗汉果为广西地道药材，主产于广西永福、临桂和龙胜等县。罗汉果性凉味甘，具 有清热凉血，祛火止咳、润肠通便、抗炎镇痛、抑菌等功效，在广西作药用历史已久，也是广 西特色大宗中药材。目前已有采用气相色谱法对罗汉果中有机磷农药残留量进行了分析的 报道，气相色谱法虽然灵敏度较高，但易受杂质干扰，给定性、定量带来一定的困难。气质联 用法既具有气相色谱高效分离效果，又具有质谱准确鉴定化合物结构的特点，可达到同时 准确快速测定样品中微量的多种残留农药及其衍生物，因此，极有必要建立一种气-质联用 对罗汉果中有机磷农药残留进行检测的方法。
[0004] 公开号为CN101082604A的发明专利申请，公开了一种纺织品中有机磷农药残留的 检测方法，该发明利用SPME技术，在模拟人体环境下利用人工汗液对生态纺织品中的有机 磷农药残留进行提取和富集，随后与气相色谱一质谱联用法进行测定。该方法快速，简单， 选择性好，授权公告号为CN104458931B的发明专利，公开了一种板蓝根药材的检测方法，其 中包括利用气相色谱一质谱进行检测板蓝根药材中农药残留的方法，该方法操作简便快 速，成本低廉。但是，上述文献记载中均没有公开采用气相色谱一质谱联用法来检测罗汉果 中有机磷农药残留的方法。
【发明内容】
[0005] 本发明提供了一种气-质联用测定罗汉果中有机磷农药残留的方法，可准确、快速 地测定罗汉果中微量的有机磷农药残留。
[0006] 为实现上述目的，本发明的技术方案为： 一种气-质联用测定罗汉果中有机磷农药残留的方法，包括以下步骤： (1) 样品前处理;按照石油醚和丙酮体积比3~1:1配制提取溶剂，称取罗汉果药材粗粉 ，加入提取溶剂，置冰浴中超声提取5~20 min，滤过，得滤液，滤渣及滤器用提取溶剂洗涤， 得洗涤液，合并滤液和洗涤液，滤过，浓缩至干，丙酮定容溶解，得提取液备用； (2) 将提取液用气相色谱_质谱测定有机磷农药残留的含量。
[0007] 优选的，所述步骤(2)中，气相色谱-质谱的测定条件为： 气相色谱： 进样口温度:210~230 °C; 载气:氦气； 进样方式:分流进样，分流比1:1; 色谱柱温度:程序升温； 质谱： 接口温度：270~290 °C; 电离方式:EI; 电离能量:70 eV; 离子源温度:220~230 °C。
[0008] 以上所述的气相色谱-质谱的测定条件中，更优选的技术方案为： 气相色谱： 色谱柱:AgilengtHP-5MS 石英毛细管柱（30 mX0.25 mm，0.25 mi); 进样口温度:220 °C; 载气:氦气，纯度彡99 ? 999%，流速3 mL/min; 进样量：1.0此； 进样方式:分流进样，分流比1:1; 色谱柱温度:初始温度150 °C，保持6 min，以20 °C/min升至200 °C，保持4 min，再以 20 °C/min 升至220 °C，保持 10 min; 柱流速率：1.46 mL/min。
[0009] 质谱： 接口温度：280 °C; 电离方式:EI; 电离能量:70 eV; 离子源温度:230 °C; 溶剂延迟时间：1.5 min。
[0010] 优选的，所述步骤(1)中，石油醚和丙酮体积比2:1配制提取溶剂。
[0011] 优选的，所述步骤（1)中，滤液和洗涤液合并后还进行了脱色处理再浓缩，脱色处 理的步骤为:将滤液和洗涤液置于容器中，加入活性炭，放置3~10 min，振摇脱色，滤过，得 二次滤液，用提取溶剂洗涤滤渣及滤器，得二次洗涤液，合并二次滤液和二次洗涤液，滤过。 更优选的，加入的活性炭为0.2g。
[0012]优选的，所述步骤(1)中，浓缩的方式为:在40°C水浴减压浓缩。
[0013]优选的，所述有机磷农药包括甲胺磷、敌敌畏、氧化乐果、甲拌磷、乐果、二嗪农、甲 基对硫磷、对硫磷、马拉对硫磷、水胺硫磷、喹硫磷。
[0014] 优选的，所述罗汉果粗粉为80~300目。
[0015] 以上所述的技术方案，其有益效果在于:前处理操作简便、快速，检测过程可以实 现罗汉果中11种有机磷农药残留的同时测定，且准确度高、检测速度快、重现性好，具有较 强的实用价值。
【附图说明】
[0016] 图1是有机磷标准溶液的总离子流典型色谱图。
[0017] 图2是加样回收试验中加入浓度为0.125 yg/L有机磷对照品溶液的标准工作溶液 的色谱图。
【具体实施方式】
[0018] 以下结合具体实施例对本发明作进一步说明，但本发明的保护范围不限于以下实 施例。
[0019] (1)样品前处理;按照石油醚和丙酮体积比2:1配制提取溶剂，称取罗汉果药材粗 粉2 g，置100 mL锥形瓶中，加入提取溶剂，置冰浴中超声提取10 min，滤过，滤渣及滤器用 提取溶剂10 mL洗涤，合并滤液，置于50 mL烧杯中，加入0.2g活性炭，放置5 min，振摇数次 脱色，直至颜色变浅，滤过，用提取溶剂洗涤滤渣及滤器，合并滤液，浓缩至近干，丙酮定容 至10 mL溶解，得提取液备用； (2) 有机磷对照品储备液的制备：取有机磷对照品，用丙酮定容配置成50iig/mL的有机 磷标准溶液，精密量取有机磷标准溶液0.4 mL，置于20 mL容量瓶中，用丙酮稀释至刻度，作 为有机磷对照品储备液，有机磷对照品储备液的质量浓度为1 yg/mL，置4 °C冰箱待用； (3) 气相色谱-质谱条件的设定； 气相色谱条件： 色谱柱:AgilengtHP-5MS 石英毛细管柱（30 mX0.25 mm，0.25 mi); 进样口温度:220 °C; 载气:氦气，纯度彡99 ? 999%，流速3 mL/min; 进样量：1.0此； 进样方式:分流进样，分流比1:1; 色谱柱温度:初始温度150 °C，保持6 min，以20 °C/min升至200 °C，保持4 min，再以 20 °C/min 升至220 °C，保持 10 min; 柱流速率：1.46 mL/min。
[0020] 质谱条件： 接口温度：280 °C; 电离方式:EI; 电离能量:70 eV; 离子源温度:230 °C; 溶剂延迟时间：1.5 min。
[0021 ] (4)有机磷标准溶液的总离子流典型色谱图的制作 在测定过程中，定量方法为峰面积外标法;数据采集方式为全扫描模式(Scan)，扫描范 围m/z 45~500 amu，选用选择离子扫描模式(SIM)测定;使用步骤(3)获得的有机磷标准 溶液的总离子流典型色谱图如图1所示，其中每个峰分别表示：1_甲胺磷、2-敌敌畏、3-氧化 乐果、4-甲拌磷、5-乐果、6-二嗪农、7-甲基对硫磷、8-对硫磷、9-马拉对硫磷、10-7K胺硫磷、 11-喹硫磷。由图中可见，被测的各化合物在同一进样系统中可以得到有效地分离，且出峰 较快，峰形较好。
[0022]有机磷农药残留中各化合物保留时间、定量离子和定性离子见表1: 表1有机磷农药残留的保留时间和特征离子
(5 )在气相色谱-质谱中制作标准曲线 分别精确吸取一定体积的有机磷对照品储备液于10 mL容量瓶中，用丙酮稀释至刻度 并摇匀得到10、50、100、250、500、750 yg/L的一系列不同浓度的有机磷对照品溶液的标准 工作溶液。采用步骤(3)所述的气相色谱-质谱条件对上述有机磷对照品溶液的标准工作溶 液进行测定，每个浓度平行3份，进样1 yL，以得到的各农药残留对照品定量离子的色谱 峰面积为纵坐标(Y)，对应的农药残留浓度为横坐标(X，iig/L)作图，绘制标准曲线。
[0023] (6)按照步骤(3)所述的气相色谱-质谱条件，通过步骤(5)中在气相色谱-质谱中 生成的标准曲线，对提取液进行检测分析，得到检测结果。
[0024] 上述方法可用于包括甲胺磷、敌敌畏、氧化乐果、甲拌磷、乐果、二嗪农、甲基对硫 磷、.对硫磷、马拉对硫磷、水胺硫磷、喹硫磷在内的11中有机磷农药残留的定性和定量检 测 。
[0025] 以下对本发明的测定方法能较好的检测罗汉果中有机磷农药残留进行进一步验 证。
[0026] I.线性范围和检测限 按照步骤(5)的方法绘制标准曲线，得到线性关系见表2,由此可见11种有机磷农药残 留测定标准曲线的线性关系良好，相关系数(r)为0.9991~0.9999。以样品中组分在仪器上 产生3倍信噪比S/N =3:1所对应的分析物浓度计为方法的检出限(L0D)，以样品中组分在仪 器上产生10倍信噪比S/N=10:1所对应的分析物浓度计为方法的定量限（L0Q)，11种有机磷 的L0D为0.432~3.901yg/L，L0Q为1.441~13.001yg/L，可见采用本方法检测罗汉果中11种 有机磷农药均有较好的线性关系及较高的灵敏度。
[0027]表2 11种有机磷农药线性范围及定量限（/2=3) n.精密度试验
以质量浓度为500 yg/L混合标准品溶液，采用步骤(3)所述的气相色谱-质谱条件进行 分析，连续进样6次，以峰面积计算，测得各种农药的RSD为1.54%~3.83%，结果表明仪器 精密度良好。
[0028] m.重复性试验 准确称取9份罗汉果药材粉末各2.0 g，以步骤(1)所述方法制备提取液，采用步骤(3) 所述的气相色谱-质谱条件进行测定，结果表明，甲胺磷、敌敌畏、氧化乐果、甲拌磷、乐果、 二嗪农、甲基对硫磷、对硫磷、马拉对硫磷、水胺硫磷、喹硫磷的平均RSD分别为1.83%、 1 ? 54%、1 ? 62%、3 ? 27%、3 ? 41%、3 ? 10%、2 ? 78%、2 ? 70%、2 ? 27%、3 ? 83%和 3 ? 23%，结果表明方法重现 性良好。
[0029] IV.加样回收试验 准确称取同一罗汉果药材粉末9份，分3水平加入浓度分别为0.125 yg/L、0.25 yg/L、 0.375 iig/L有机磷对照品溶液的标准工作溶液，每水平重复3次，混匀后自然晾干，以步骤 (1)所述方法制备提取液，采用步骤(3)所述的气相色谱-质谱条件进行测定，计算回收率， 结果见表3和图2，表3结果表明，11种有机磷的加样平均回收率为83.3~112.4%，相对标准 偏差为1.45~8.28%，本测定方法的准确度和精密度能满足测定的需要。图2为加入浓度为 0.125 yg/L的有机磷对照品溶液的标准工作溶液所获得的其中一个色谱图，由色谱图可见 11种有机磷色谱峰均可较好地分离出来。
[0030]表3 罗汉果药材粉末中3个加标水平下11种有机磷农药回收率和精密度(/3=3)
【主权项】
1. 一种气-质联用测定罗汉果中有机磷农药残留的方法，其特征在于包括以下步骤： (1) 样品前处理；按照石油醚和丙酮体积比3~1:1配制提取溶剂，称取罗汉果药材粗粉 ，加入提取溶剂，置冰浴中超声提取5~20 min，滤过，得滤液，滤渣及滤器用提取溶剂洗涤， 得洗涤液，合并滤液和洗涤液，滤过，浓缩至干，丙酮定容溶解，得提取液备用； (2) 将提取液用气相色谱-质谱测定有机磷农药残留的含量。2. 根据权利要求1所述的气-质联用测定罗汉果中有机磷农药残留的方法，其特征在 于： 所述步骤(2)中，气相色谱-质谱的测定条件为： 气相色谱： 进样口温度:210~230 °C; 载气:氦气； 进样方式:分流进样，分流比1:1; 色谱柱温度:程序升温； 质谱： 接口温度：270~290 °C; 电离方式:EI; 电离能量:70 eV; 离子源温度:220~230 °C。3. 根据权利要求1所述的气-质联用测定罗汉果中有机磷农药残留的方法，其特征在 于： 所述步骤(2)中，气相色谱-质谱的测定条件为： 气相色谱： 色谱柱:AgilengtHP-5MS 石英毛细管柱（30 mX0.25 mm，0.25 μπι); 进样口温度:220 °C; 载气:氦气，纯度彡99 · 999%，流速3 mL/min; 进样量：1.0 yL; 进样方式:分流进样，分流比1:1; 色谱柱温度:初始温度150 °C，保持6 min，以20 °C/min升至200 °C，保持4 min，再以 20 °C/min 升至220 °C，保持 10 min; 柱流速率：1.46 mL/min; 质谱： 接口温度：280 °C; 电离方式:EI; 电离能量:70 eV; 离子源温度:230 °C; 溶剂延迟时间：1.5 min。4. 根据权利要求1所述的气-质联用测定罗汉果中有机磷农药残留的方法，其特征在 于： 所述步骤(1)中，石油醚和丙酮体积比2:1配制提取溶剂。5. 根据权利要求1所述的气-质联用测定罗汉果中有机磷农药残留的方法，其特征在 于： 所述步骤（1)中，滤液和洗涤液合并后还进行了脱色处理再浓缩，脱色处理的步骤为： 将滤液和洗涤液置于容器中，加入活性炭，放置3~10 min，振摇脱色，滤过，得二次滤液，用 提取溶剂洗涤滤渣及滤器，得二次洗涤液，合并二次滤液和二次洗涤液，滤过。6. 根据权利要求5所述的气-质联用测定罗汉果中有机磷农药残留的方法，其特征在 于： 所述步骤(1)中，加入的活性炭为0.2g。7. 根据权利要求1所述的气-质联用测定罗汉果中有机磷农药残留的方法，其特征在 于： 所述步骤(1)中，浓缩的方式为:在40°C水浴减压浓缩。8. 根据权利要求1所述的气-质联用测定罗汉果中有机磷农药残留的方法，其特征在 于： 所述有机磷农药包括甲胺磷、敌敌畏、氧化乐果、甲拌磷、乐果、二嗪农、甲基对硫磷、对 硫磷、马拉对硫磷、水胺硫磷、喹硫磷。9. 根据权利要求1所述的气-质联用测定罗汉果中有机磷农药残留的方法，其特征在 于： 所述罗汉果粗粉为80~300目。
【文档编号】G01N30/02GK105911166SQ201610227280
【公开日】2016年8月31日
【申请日】2016年4月13日
【发明人】梁成钦, 陈旭, 付明磊, 周先丽, 黄晓, 罗琴, 苏小建, 程柳, 文君
【申请人】桂林医学院