一种测定水中阿维菌素残留的方法

文档序号:10551613阅读:887来源:国知局
一种测定水中阿维菌素残留的方法
【专利摘要】本发明公开了一种测定水中阿维菌素残留的方法,它是将样品经0.22μm的滤膜过滤后,用含有70μL三氯甲烷的1.0mL丙酮萃取,氮气吹干,再用50.0μL甲醇溶解,取20μL进行色谱分析,采用甲醇∶水(80∶20)作为流动相,245 nm紫外检测器检测阿维菌素残留。结果表明:在10~500μg/mL之间线性良好,相关系数=0.999。添加浓度为0.1,1.0,5.0μg/mL时,阿维菌素的平均回收率分别为92.51%、95.03%、82.84%,按信噪比10倍计算,检出限为0.1μg/mL。说明采用本发明的方法净化水中阿维菌素快速、环保。
【专利说明】
一种测定水中阿维菌素残留的方法
技术领域
[0001] 本发明属于仪器检测技术领域,涉及作为农药,兽药的杀虫剂残留检测的方法,更 具体的说是一种阿维菌素水中残留的检测方法。
【背景技术】
[0002] 阿维菌素(Abamectin,ABA)是由日本北里大学和美国默克公司首先开发的一类十 六元大环内酯类化合物,对螨类和昆虫具有胃毒和触杀作用,是一种高效、广谱的抗生素类 杀虫、杀螨剂,在农作物和家畜中应用广泛。然而,阿维菌素的急性经口毒性很高,对大鼠 的致死中量值为10.6~11.3 mg/ kg,对哺乳动物的繁殖能力具有潜在的毒性。我国农业 部规定:牛肉组织中阿维菌素的最高残留限量(MRL)为50~100 yg/ kg,羊肉组织中阿维菌 素的MRL为25~50 yg/kg。阿维菌素作为农药使用时,可能会被雨水冲刷入水中;作为兽药使 用时,动物粪便中的药物也可以被雨水冲刷入水中,造成水污染。水中阿维菌素会造成地下 水或者农作物用水的污染。因此,监测水中阿维菌素残留对保障人类健康和保护环境至关 重要。
[0003] 近年来,对阿维菌素在农作物及畜产品中残留的分析方法研究众多,但国内关于 液相色谱微萃取提取、净化水中阿维菌素的前处理方法未见报道。以往阿维菌素残留的提 取及净化方法有机试剂使用多,不仅对分析者身体健康有害,还易造成污染,试验将分散液 相微萃取净化与高效液相色谱-紫(HPLC-UV)检测方法相结合,建立了一种测定水中阿维菌 素残留的方法。此方法有机试剂使用少,快速、环保。

【发明内容】

[0004] 本发明公开了一种测定水中阿维菌素残留的方法,其特征在于按如下的步骤进 行: (1) 标准溶液的配制: 1) 储备液:取阿维菌素100 mg,放入10 mL容量瓶,加甲醇定容,配成10 mg/mL的阿维菌 素溶液; 2) 工作液:用甲醇将阿维菌素储备液稀释,配制成10, 50,100, 200, 500 yg/mL浓度 的标准溶液; (2) 方法: 1) 色谱条件:Eclipse plus Ci8色谱柱3.5 _,4.6 mmX 100 mm,流动相为甲醇:水的 体积比为80:20,流速为1.0 mL/min,检测波长为245 nm,柱温为35 °C,进样量为20此,定 量方法采用外标法; 2) 线性试验:分别取10,50,100,200,500 yg/mL浓度的标准工作液20此,进行HPLC分 析,每个浓度进样3次,以阿维菌素工作液浓度为横坐标,各浓度对应的色谱峰面积的平均 值为纵坐标作标准曲线,进行线性相关性统计分析。
[0005] 3)水样品前处理: 水样经0.22 ym的滤膜过滤,取5.0 mL过滤水样置于15 mL带塞的锥形离心管中,将含 有70.0此三氯甲烷的1.0 mL丙酮通过微量进样器快速注入离心试管中,然后涡旋10 s,混 合液从水相被萃取到氯仿溶液中,静置10 min,分散在水相中的萃取溶剂氯仿沉积到试管 底部,用微量进样器吸取萃取溶剂至10 mL离心管中,再向过滤水样中加入含有70此三氯 甲烷的1 mL丙酮,涡旋10 s,静置10 min,取下层萃取溶剂,合并萃取溶液,氮气吹干,再用 50此甲醇溶解,涡旋30 s,取20此进行色谱分析; 取6个空白水样,前处理后进行HPLC测定,按10倍信噪比(S/ N =10)进行计算,本方 法对阿维菌素在水中的检测限为0.1 yg/mL。
[0006] 本发明所述测定水中阿维菌素残留的方法,其中的水样品包括河水、自来水、井 水、湖水。
[0007] 本发明更加详细的步骤如下: 1材料 1.1仪器 高效液相色谱仪,配手动进样器和紫外检测器(型号为Agilent-1260),由安捷伦科技 有限公司生产;Eclipse plus Cis色谱柱(3.5 wn,4.6 mmXlOO mm),由安捷伦科技有限公 司生产;微型旋涡混合仪(型号为WH-2),由上海沪西分析仪器厂生产;超纯水制作系统(型 号为UL UPURE),由四川优普超纯科技有限公司生产。 1.2试剂 阿维菌素标准品,由美国Sigma-Alorich公司生产;甲醇(色谱纯),由天津康巢生物医 药有限公司生产;丙酮(分析纯)、三氯甲烷(分析纯),由利安隆博华医药化学有限公司(天 津)生产 河水,取自天津市海河;湖水,取自天津市水上公园;自来水,取自天津农学院兽医学实 验室;井水,取自天津市宝坻区郝各庄镇。所有水样在分析前先过0.22 ym滤膜,除去颗粒 物。
[0008] 1.3标准溶液的配制 储备液:取阿维菌素100 mg,放入10 mL容量瓶,加甲醇定容,配成10 mg/mL的阿维菌素 溶液。
[0009] 工作液:用甲醇将阿维菌素储备液稀释,配制成10, 50, 100, 200, 500 iig/mL浓 度的标准溶液。
[0010] 2 方法 2.1色谱条件 Eclipse plus Cis色谱柱(3.5 ym,4.6 mmXlOO mm),流动相为甲醇:水(80:20),流速 为1.0 mL/min,检测波长为245 nm,柱温为35 °C,进样量为20此,定量方法采用外标法。
[0011] 2.2线性试验 分别取10,50,100,200,500邱/11^浓度的标准工作液20此,进行冊^:分析。每个浓度 进样3次。以阿维菌素工作液浓度为横坐标,各浓度对应的色谱峰面积的平均值为纵坐标 作标准曲线,进行线性相关性统计分析。
[0012] 2.3样品前处理 水样经0.22 ym的滤膜过滤,取5.0 mL过滤水样置于15 mL带塞的锥形离心管中,将含 有70.0 iiL三氯甲烷的1.0 mL丙酮通过微量进样器快速注入离心试管中,然后涡旋10 s,混 合液从水相被萃取到氯仿溶液中,静置10 min,分散在水相中的萃取溶剂氯仿沉积到试管 底部,用微量进样器吸取萃取溶剂至10 mL离心管中,再向过滤水样中加入含有70此三氯 甲烷的1 mL丙酮,涡旋10 s,静置10 min,取下层萃取溶剂,合并萃取溶液。氮气吹干,再用 50此甲醇溶解,涡旋30 s,取20此进行色谱分析。
[0013] 2.4添加回收率试验 样品处理同2.3所述,水中阿维菌素的添加浓度分别为0.1,1.0,5.0邱/!^,同一天内 重复测定5次,计算日内变异系数;连续测定3 d,计算日间变异系数。
[0014] 3结果与分析 3.1线性试验 在10~500 yg/mL浓度范围内线性良好,线性方程为7= 1 667.0;r+ 127.0,线性回归 系数(?2) =0.999。标准曲线见图1。
[0015] 3.2液相微萃取条件的分析 采用分散液相微萃取法对水中阿维菌素进行前处理净化,分别采用四氯化碳、三氯甲 烷、二氯甲烷作为萃取剂发现,只有采用三氯甲烷作为萃取试剂回收率最高。
[0016] 以三氯甲烷作为萃取剂,分别采用丙酮、甲醇、乙醇、乙腈作为分散剂发现,三氯甲 烷和甲醇、乙醇不能形成乳浊液,丙酮和乙腈作为分散剂时相比较,丙酮的萃取效果最好, 回收率最高。
[0017] 确定丙酮与三氯甲烷作为萃取剂和分散剂后,对丙酮和三氯甲烷的比例进行了多 次试验,首先确定1 mL丙酮的萃取效果最好,分别采用含有50 yL、70 yL、100 yL、200 yL三 氯甲烷的1 mL丙酮作为萃取剂对标准溶液进行萃取,试验结果表明:含有50此三氯甲烷的 1 mL丙酮对阿维菌素的萃取效果不好,回收率低;含有70 yL、100 yL、200 yL三氯甲烷的1 mL丙酮对阿维菌素的萃取效果良好,而且更高含量三氯甲烷的丙酮溶液进行萃取,效果也 不增加,因此确定采用含有70 yL三氯甲烷的1 mL丙酮作为萃取剂,效果良好,经济环保。
[0018] 分别米用3 000 r/min离心5 min、3 000 r/min离心 10 min,静置5 min、10 min、 15 min以促进萃取过程,结果表明,静置5 min萃取效率低,3 000 r/min离心5 min、3 000 r/min离心10 min,静置10 min、15 min的萃取效率相同,本方法采用静置10 min。
[0019] 3.3方法的灵敏度 取6个空白水样,经2.3处理后进行HPLC测定,按10倍信噪比(S/ N =10)进行计算, 本方法对阿维菌素在水中的检测限为0.1 yg/mL,空白样品色谱见图2,0.1 yg/mL阿维菌素 类药物添加样品色谱见图3。在阿维菌素的保留时间位置均无杂峰干扰。
[0020] 3.4方法的检出限、回收率和精密度 阿维菌素从低到高3个浓度的样品添加回收率和日内变异系数见表1。平均回收率范围 为82.84%~95.03%,日内变异系数范围为3.78%~7.04%,日间变异系数范围为3.29%~4.29%, 回收率较高,重复性较好。
[0021] 3.5方法的可行性 为验证方法的可行性,将本方法应用于4种不同水样,即河水、自来水、井水、湖水中对 目标待测物进行测定,均未测出阿维菌素的残留,结果见表1。
[0022]表1添加回收率及精密度测定

【附图说明】: 图1为阿维菌素标准曲线; 图2为空白样品色谱结果; 图3为纯水中添加0.1 yg/mL阿维菌素的色谱结果。
[0023]
【具体实施方式】
[0024] 下面通过具体的实施方案叙述本发明。除非特别说明,本发明中所用的技术手段 均为本领域技术人员所公知的方法。另外,实施方案应理解为说明性的,而非限制本发明的 范围,本发明的实质和范围仅由权利要求书所限定。对于本领域技术人员而言,在不背离本 发明实质和范围的前提下,对这些实施方案中的物料成分和用量进行的各种改变或改动也 属于本发明的保护范围。
[0025] 实施例1 (1) 自来水样品前处理: 水样经0.22 ym的滤膜过滤,取5.0 mL过滤水样置于15 mL带塞的锥形离心管中,将含 有70.0此三氯甲烷的1.0 mL丙酮通过微量进样器快速注入离心试管中,然后涡旋10 s,混 合液从水相被萃取到氯仿溶液中,静置10 min,分散在水相中的萃取溶剂氯仿沉积到试管 底部,用微量进样器吸取萃取溶剂至10 mL离心管中,再向过滤水样中加入含有70此三氯 甲烷的1 mL丙酮,涡旋10 s,静置10 min,取下层萃取溶剂,合并萃取溶液,氮气吹干,再用 50此甲醇溶解,涡旋30 s,取20此进行色谱分析; (2) 色谱方法: 色谱条件:Eclipse plus Ci8色谱柱3.5 wii,4.6 mmX 100 mm,流动相为甲醇:水的体 积比为80:20,流速为1.0 mL/min,检测波长为245 nm,柱温为35 °C,进样量为20此,定量 方法米用外标法; 实施例2 (1) 农作物用水样品前处理: 水样经0.22 ym的滤膜过滤,取5.0 mL过滤水样置于15 mL带塞的锥形离心管中,将含 有70.0此三氯甲烷的1.0 mL丙酮通过微量进样器快速注入离心试管中,然后涡旋10 s,混 合液从水相被萃取到氯仿溶液中,静置10 min,分散在水相中的萃取溶剂氯仿沉积到试管 底部,用微量进样器吸取萃取溶剂至10 mL离心管中,再向过滤水样中加入含有70此三氯 甲烷的1 mL丙酮,涡旋10 s,静置10 min,取下层萃取溶剂,合并萃取溶液,氮气吹干,再用 50此甲醇溶解,涡旋30 s,取20此进行色谱分析; (2) 色谱方法: 色谱条件:£(:]^86口1118&8色谱柱3.5 11111,4.6 1]1111\10〇1111]1,流动相为甲醇:水的体 积比为80:20,流速为1.0 mL/min,检测波长为245 nm,柱温为35 °C,进样量为20此,定量 方法米用外标法; 实施例3 比较试验 结论:
(1)有机试剂用量小,环境友好;最大的特点就是有机试剂用量少,而且方法和方法不 同。
[0026] (2)前处理操作简单。
【主权项】
1. 一种测定水中阿维菌素残留的方法,其特征在于按如下的步骤进行: (1) 标准溶液的配制: 1) 储备液:取阿维菌素100 mg,放入10 mL容量瓶,加甲醇定容,配成10 mg/mL的阿维菌 素溶液; 2) 工作液:用甲醇将阿维菌素储备液稀释,配制成10, 50,100, 200, 500 yg/mL浓度 的标准溶液; (2) 方法: 1) 色谱条件:Eclipse plus Cis色谱柱3.5 μηι,4.6 mmX 100 mm,流动相为甲醇:水的体 积比为80:20,流速为1.0 mL/min,检测波长为245 nm,柱温为35 °C,进样量为20 yL,定量 方法米用外标法; 2) 线性试验:分别取10,50,100,200,500 yg/mL浓度的标准工作液20 yL,进行HPLC分 析,每个浓度进样3次,以阿维菌素工作液浓度为横坐标,各浓度对应的色谱峰面积的平均 值为纵坐标作标准曲线,进行线性相关性统计分析; 3) 水样品前处理: 水样经0.22 μπι的滤膜过滤,取5.0 mL过滤水样置于15 mL带塞的锥形离心管中,将含 有70.0 yL三氯甲烷的1.0 mL丙酮通过微量进样器快速注入离心试管中,然后涡旋10 s,混 合液从水相被萃取到氯仿溶液中,静置10 min,分散在水相中的萃取溶剂氯仿沉积到试管 底部,用微量进样器吸取萃取溶剂至10 mL离心管中,再向过滤水样中加入含有70 yL三氯 甲烷的I mL丙酮,涡旋10 s,静置10 min,取下层萃取溶剂,合并萃取溶液,氮气吹干,再用 50此甲醇溶解,涡旋30 s,取20 yL进行色谱分析; 取6个空白水样,前处理后进行HPLC测定,按10倍信噪比,S/ N =10进行计算,其中对 阿维菌素在水中的检测限为0.1 yg/mL。2. 权利要求1所述测定水中阿维菌素残留的方法,其中的水样品包括河水、自来水、井 水、农作物水、湖水。
【文档编号】G01N30/06GK105911184SQ201610246880
【公开日】2016年8月31日
【申请日】2016年4月20日
【发明人】张伟, 张鑫, 张欣达, 张超, 金天明
【申请人】天津农学院
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