铁(ii)离子检测剂以及使用其的检测方法【专利摘要】本发明提供一种能够用荧光检测快速且高灵敏度地检测铁(II)离子的铁(II)离子检测剂以及一种使用所述检测剂的铁(II)离子检测方法。本发明涉及一种铁(II)离子检测剂，其通过组合具有至少三个配位位置的化合物和由通式(I)表示的化合物(荧光探针)形成(式中，R1和R2是低级烷基等；R3和R4是氢原子等；R5是氢原子、羟基或由式(A)：?NR51R52表示的基团(式中，R51和R52是低级烷基等)；R6和R7是氢原子等；环A是芳环等；V是O或SiR10R11(R10和R11相同或不同，并且表示氢原子或低级烷基)；W是CH2、CO等；Z是O等；m和n相同或不同，并且是0或1)。本发明还涉及使用所述检测剂的铁(II)离子检测方法。【专利说明】铁（11)离子检测剂以及使用其的检测方法
技术领域：
[0001]本发明涉及一种Fe(II)离子检测剂。具体地，本发明涉及一种能够以高灵敏度选择性测量在试管中或在活细胞中的Fe(II)离子的Fe(II)离子检测剂。【
背景技术：
】[0002]铁是人体内最丰富的过渡金属物质，并参与多种生命现象，包括呼吸系统的氧传输和电子转移。然而，已提出铁在体内的异常水平与严重的疾病有关，例如癌症、阿尔茨海默氏病和帕金森氏病。特别是，代表体内大部分游离铁离子的Fe(II)离子已被怀疑会导致石棉癌或丙型肝炎，因为它们具有产生活性氧物质的巨大潜势（例如，专利文献1和2,以及非专利文献1至5)。如果开发出能够在活细胞或活组织中选择性检测Fe(II)离子，并同时敏锐地检测浓度变化的荧光探针，这将成为一种例如研究与Fe(II)离子相关的疾病和生命现象以及药物开发的极为重要的技术。[0003]近年来已经见证了用于标记生物分子、离子等的荧光探针的蓬勃发展。例如，已经报道了许多具有作为骨架结构的荧光团（诸如荧光素和罗丹明）的荧光探针(例如，专利文献3和4以及非专利文献6和7)。[0004]迄今为止报道的用于检测铁离子的荧光探针包括淬灭铁离子检测探针（例如，非专利文献8和9)。然而，由于其对铁离子的低检测灵敏度或选择性，难以使用该探针敏锐地检测浓度变化。[0005]专利文献5报道了用于测量铝离子和/或铁离子的荧光探针。然而，该探针的靶标是Fe(III)离子，而不是Fe(II)离子。而且，该探针对金属离子的选择性不能令人满意。[0006]为了解决上述问题，专利文献6报道了具有N-氧化物部分的Fe(II)离子检测荧光探针(例如，RhoNox-1;参见图1)。该荧光探针利用以下特点；即，N-氧化物部分与Fe(II)离子反应，从而进行脱氧反应，由此增加荧光。该响应于Fe(II)离子而产生荧光发射的荧光探针很有创意，与产生淬灭响应的传统荧光探针明显不同。该荧光探针还对Fe(II)离子具有优异的检测灵敏度和选择性。[0007]非专利文献10至12报道了对专利文献6所公开的荧光探针（例如，RhoNox-1)进行了改进的荧光探针。具体地，专利文献10至12的荧光探针是用羟基代替RhoNox-1的罗丹明骨架结构中的羧基而得到的化合物(例如，图1中的HMRhoNox-M和HMRhoNox-E)。[0008]引文列单[0009]专利文献[0010]专利文献1JP2011-79834A;[0011]专利文献2:US2009/137612A;[0012]专利文献3:W001/62755;[0013]专利文献4:W099/01447;[0014]专利文献5:JP2004-101389A;[0015]专利文献6:JP2013-193990A。[0016]非专利文献[0017]非专利文献1:Bartzokis,G.etal.InvivoevaluationofbrainironinAlzheimer'sdiseaseandnormalsubjectsusingMRI.Biol.Psychiatry35,480-487(1994)；[0018]非专利文献2:Cuajungco，M?P?etal?MetalchelationasapotentialtherapyforAlzheimer^disease.Ann.N.E.Acad.Sci.920:292-304(2000)；[0019]非专利文献3:Dexter，D?T?etal?IncreasedNigralIronContentandAlterationsinOtherMetalIonsOccurringinBraininParkinson'sDisease.J.Neurochem.52，1830-1836(1989);[0020]非专利文南犬4:Toyokuni，S.ElucidationofAsbestos-inducedCarcinogenesisandItsApplicationtoPreventiondiagnosisandTreatmentinRelationtoIron.Japan.J.ofLungCancer49(4),362-367(2009)；[0021]非专利文献5:NishinaS.，KorenagaM.，HidakaI?，ShinozakiA.，SakaiA.，GondoT.,TabuchiM.,KishiF.,HinoK.HepatitisCvirusproteinandironoverloadinducehepaticsteatosisthroughtheunfoldedproteinresponseinmice.LiverInt.30(5)683-92(2010)；[0022]非专利文南犬6:Kikuchi，K.，Komatsu，K.&Nagano，T.Zincsensingforcellularapplication.Currentopinioninchemicalbiology8，182-91(2004);[0023]非专利文献7:Que，E.L.，Domaille，D.W.&Chang，C.J.Metalsinneurobiology:probingtheirchemistryandbiologywithmolecularimaging.Chemicalreviews108,1517-49(2008)；[0024]非专利文南犬8:Fakih，S.etal.Targetingthelysosome:fluorescentiron(III)chelatorstoselectivelymonitorendosomal/lysosomallabileironpools.Journalofmedicinalchemistry51,4539-52(2008)；[0025]非专利文献9:Rauen，U.etal.AssessmentofChelatableMitochondrialIronbyUsingMitochondrion-SelectiveFluorescentIronIndicatorswithDifferentIron-BindingAffinities.ChemBioChem8,341-352(2007)；[0026]非专利文献10:日本化学生物学会第八次年会(2013)学会概要集159页；[0027]非专利文献11:第七次生物相关化学学术研讨会(2013)学会概要集101页；[0028]非专利文献12:日本化学会第93次春季年会(2013)学会概要集，发表序号2E3-49。【
发明内容】[0029]技术问题[0030]专利文献6报道了对Fe(II)离子具有优异的检测灵敏度和选择性的荧光探针。然而，对Fe(II)离子的响应速度不一定令人满意。为了开发探针在例如，临床诊断、检测试剂盒和自动分析仪中的应用，需要具有更快的荧光响应性能的Fe(II)离子检测剂。[0031]本发明的目的是提供一种能够比专利文献6中公开的荧光探针更灵敏、更快速地荧光检测Fe(II)离子的Fe(II)离子检测剂，并且提供一种使用该检测剂的检测方法。[0032]技术方案[0033]本发明人进行了广泛的研究以达到上述目的，结果发现，使氨基乙酸类螯合化合物，例如氮川三乙酸(NTA)和乙二胺四乙酸(EDTA)与专利文献6所公开的Fe(II)离子选择性荧光探针同时存在可显著提高该Fe(II)离子荧光探针荧光响应的响应速度和对比度。更具体地，发明人发现，专利文献6所公开的荧光探针对Fe(II)离子的荧光响应可更加灵敏。在上述发现的基础上发明人进行了进一步研究，完成了本发明。[0034]本发明提供下述Fe(II)离子检测剂。[0035]项目1[0036]-种Fe(II)离子检测剂，包括与具有至少三个配位位置的化合物组合的由式（I)表示的化合物(荧光探针）：[0038]其中，R1和R2相同或不同，并且表示低级烷基、羧基低级烷基、芳基或芳基低级烷基；[0039]R3和R4相同或不同，并且表示氢、卤素或低级烷基；[0040]R1和R2可与它们所连接的氮原子一起形成吡咯烷环、哌啶环、吗啉环或任选取代的哌嗪环；[0041]R1和R3可一起形成三亚甲基；[0042]R2和R4可一起形成三亚甲基；[0043]R5表示氢、任选受保护的羟基、低级烷氧基或由式(A):-NR51R52表示的基团，其中R51和R52相同或不同，并且表示低级烷基、羧基低级烷基、芳基或芳基低级烷基，或R51和R52可与它们所连接的氮原子一起形成吡咯烷环、哌啶环、吗啉环或任选取代的哌嗪环；[0044]R6和R7相同或不同，并且表示氢、卤素或低级烷基；[0045]当R5是由式(A)表示的基团时，R51和R6可一起形成三亚甲基，或R52和R7可一起形成三亚甲基；[0046]环A表示任选取代的芳环或任选取代的杂芳环；[0047]V表示0或SiR1%11，其中，R1()和R11相同或不同，并且表示氢或低级烷基；[0048]W表示CH2、C0或S(0)P;[0049]Z表示0或NR9，其中R9表示氢或烷基；[0050]m和n相同或不同，并且表示0或1;以及[0051]p表示1或2。[0052]项目2[0053]根据项目1所述的Fe(II)离子检测剂，其中，所述具有至少三个配位位置的化合物具有相同或不同的至少三个配位位置，所述至少三个配位位置选自由氨基、羟基、羧基、膦酸基和含氮杂芳环组成的组。[0054]项目3[0055]根据项目1或2所述的Fe(II)离子检测剂，其中，所述具有至少三个配位位置的化合物是亚氨基二乙酸（IDA)、氮川三乙酸(阶4)、叱叱1^少'-乙二胺四乙酸江0了4)、1，3-丙二胺四乙酸（PDTA)、二亚乙基三胺五乙酸（DTPA)、羟乙基乙二胺三乙酸(HEDTA)、三亚乙基四胺六乙酸(TTHA)、1，2-二氨基环己烷四乙酸(CyDTA)、乙二醇醚二胺四乙酸(GEDTA或EGTA)、N，N-双（2-羟基苄基）乙二胺二乙酸(HBED)、乙二胺二丙酸(EDDP)、乙二胺二乙酸(EDDA)、乙二胺二琥珀酸(EDDS)、1，3_二氨基-2-羟基丙烷四乙酸(DPTA-OH)、二羟乙基甘氨酸(DHEG)、六亚甲基二胺四乙酸（HDTA)、羟乙基亚氨基二乙酸（HIDA)、二氨基丙烷四乙酸（甲基-EDTA)、氮川三丙酸(NTP)、L-谷氨酸二乙酸(GLDA)、0,0'-双-2-氨基苯基-N，N，N'，N'_四乙酸(BAPTA)、乙二胺四（亚甲基膦酸）（EDTP0)、氮川三(亚甲基膦酸）（NTP0)、羟基亚乙基二膦酸(HEDP)、膦酰基丁烷三羧酸(PBTC)、三(2-吡啶基甲基)胺(TPA)、二甲基吡啶胺(DPA)、邻氨基苯酚-N，N，〇-三乙酸(APTRA)、卟啉或其衍生物、酞菁或其衍生物、1，4,7_三氮杂环壬烷(丁八〇~)、1，4,7，10-四氮杂环十二烷(0￥〇^"、1，4,8，11-四氮杂环十四烷(0￥〇^^)，或它们的盐。[0056]项目4[0057]根据项目1至3中任一项所述的Fe(II)离子检测剂，其中，式（I)中的环A由式(a)表示：[0059]其中，R8表示任选受保护的羟基、低级烷氧基、卤素、羧基、低级烷氧羰基、-N=C=〇、_N=C=S、磺基或活性酯基;q表示0、1、2或3;并且当q是2或3时，R8可相同或不同。[0060]项目5[0061]根据项目1至4中任一项所述的Fe(II)离子检测剂，其中，[0062]R1和R2相同或不同，并且表示6烷基；[0063]R1和R2可与它们所连接的氮原子一起形成吗啉环或任选取代的哌嗪环；[0064]R3和R4表示氢，或者[0065]R1和R3可一起形成三亚甲基；[0066]R2和R4可一起形成三亚甲基；[0067]R5表示任选受保护的羟基或由式(A):-NR51R52表示的基团；当R5是由式(A)表示的基团时，R51和R52相同或不同，并且表示烷基；[0068]R6和R7表示氢;或者[0069]R51和R6可一起形成三亚甲基；[0070]R52和R7可一起形成三亚甲基；[0071]q是0;W是CH2或C0;Z是0;m是0;并且n是0。[0072]项目6[0073]根据项目1至5中任一项所述的Fe(II)离子检测剂，其中，R1和R2相同或不同，并且表示烷基;R3和R4表示氢;R5表示任选受保护的羟基，或由式(A):_NR51R52表示的基团，当R5是由式(A)表示的基团时，R51和R52相同或不同，并且表示Cn烷基;R6和R7表示氢;q是0;W是CH2或CO;Z是0;m是0;并且n是0。[0074]项目7[0075]根据项目1至6中任一项所述的Fe(II)离子检测剂，其中，所述由式(I)表示的化合物(荧光探针)和所述具有至少三个配位位置的化合物混合在一起。[0076]项目8[0077]根据项目1至6中任一项所述的Fe(II)离子检测剂，所述Fe(II)离子检测剂是试剂盒的形式，该试剂盒包括容纳所述由式（I)表示的化合物（荧光探针）的容器和容纳所述具有至少三个配位位置的化合物的容器。[0078]项目9[0079]一种用于检测Fe(II)离子的方法，所述方法包括以下步骤：[0080](1)使含有Fe(II)离子的样品与根据项目1至8中任一项所述的铁(II)离子检测剂混合；以及[0081](2)测量所得到的混合物的荧光光谱。[0082]项目10[0083]一种用于增加Fe(II)离子检测灵敏度的方法，所述方法包括以下步骤：[0084](1)使含有Fe(II)离子的样品与根据项目1至8中任一项所述的铁(II)离子检测剂混合；以及[0085](2)测量所得到的混合物的荧光光谱。[0086]项目11[0087]一种用于制备Fe(II)离子检测剂的方法，所述方法包括以下步骤：[0088]使由式(I)表示的化合物(荧光探针)与具有至少三个配位位置的化合物混合，[0090]其中，R1和R2相同或不同，并且表示低级烷基、羧基低级烷基、芳基或芳基低级烷基；[0091]R3和R4相同或不同，并且表示氢、卤素或低级烷基；[0092]R1和R2可与它们所连接的氮原子一起形成吡咯烷环、哌啶环、吗啉环或任选取代的哌嗪环；[0093]R1和R3可一起形成三亚甲基；[0094]R2和R4可一起形成三亚甲基；[0095]R5可以是氢、任选受保护的羟基、低级烷氧基或由式(A):-NR51R52表示的基团，其中R51和R52相同或不同，并且表示低级烷基、羧基低级烷基、芳基或芳基低级烷基，或R51和R52可与它们所连接的氮原子一起形成吡咯烷环、哌啶环、吗啉环或任选取代的哌嗪环；[0096]R6和R7相同或不同，并且表示氢、卤素或低级烷基；[0097]当R5是由式(A)表示的基团时，R51和R6可一起形成三亚甲基，或R52和R7可一起形成三亚甲基；[0098]环A表示任选取代的芳环或任选取代的杂芳环；[0099]V表示0或SiR1%11，其中，R1Q和R11相同或不同，并且表示氢或低级烷基；[0100]W表示CH2、C0或S(0)P;[0101]Z表示0或NR9，其中R9表示氢或烷基；[0102]m和n相同或不同，并且表示0或1;以及[0103]p表示1或2。[0104]本发明的有益效果[0105]根据本发明的Fe(II)离子检测剂包括由式（I)表示的化合物（荧光探针)和具有至少三个配位位置的化合物。该检测剂能够比单独的荧光探针更灵敏、更快速地荧光检测Fe(II)呙子。[0106]具体地，上述荧光探针选择性地与Fe(II)离子反应，N-氧化物被还原并转变成氨基，从而发射出强的荧光。专利文献6(JP2013-193990A)指出，已经认识到上述荧光探针对于已经被螯合剂(例如2,2'_联吡啶)稳定的非活性Fe(II)离子是没有响应的(例如，专利文献6第[0024]和[0098]段和图7)。但是，与所预期的相反，已发现将具有至少三个配位位置的化合物加入上述荧光探针中使探针能够以更高的灵敏度更快速地荧光检测Fe(II)离子。例如，单独使用荧光探针测量所需一小时的时间段可以显著缩短到约5至10分钟（例如，测试例1以及图2的图表(e)和(f))[0107]根据本发明的Fe(II)离子检测方法仅是将廉价且容易获得的具有至少三个配位位置的化合物（例如NTA(氮川三乙酸）和乙二胺四乙酸(EDTA))与荧光探针混合，并且该方法可通过非常简单的操作来执行。因此，该方法是非常灵活的。[0108]根据本发明的Fe(II)离子检测剂能够用荧光显微镜等快速且高灵敏度地、选择性且定量地检测在试管或细胞中的Fe(II)离子的增加或减少。因此，该检测剂在阐明与铁相关的疾病的病理状况的研究中是非常有用的。该检测剂在需要快速检测的多种情况(例如临床实践和药物开发）中也是非常有用的。[0109]另外，Fe(II)离子在材料铁发生腐蚀的初始阶段起作用。因此，该检测剂也可用于查明海洋船只等中铁腐蚀机制的研究。更明确地，根据本发明的Fe(II)离子检测剂不仅有助于医疗科学而且有助于材料科学。【附图说明】[0110]图1:上部示出用于Fe(II)离子的含有N-氧化物的荧光探针分子结构，各自含有荧光团RhoNox-1、羟甲基罗丹明（HMRhoNox-M、HMRhoNox-E)或羟甲基对甲氨基酚(HMFluNox-M、HMFluNox-E)。下部示出在本说明书中使用的多齿配体化合物的结构和名称。[0111]图2:图表(a)至(d)示出当将硫酸亚铁（II)加入到多齿配体化合物存在的RhoNox-1中时观察到的荧光光谱的变化。图表(a)示出不存在多齿配体化合物的情况下荧光光谱的变化，图表(b)示出存在NTA的情况，图表(c)示出存在EDTA的情况，以及图表⑷示出存在TPA的情况。虚线表示不存在多齿配体化合物的情况下在1小时内观察到的荧光强度。图表(e)示出在光谱变化中575nm处的荧光强度随时间的变化;灰色圆：不存在多齿配体化合物；实心正方形:NTA;实心三角:EDTA;实心圆：TPA。图表(f)示出图表(e)中从0秒到900秒的部分的放大图。测量条件：测量用在50mMHEPES缓冲液（pH7.4)中的2福RhoNox-l、20yMFeSCk和200yM多齿配体化合物进行。激发波长:540nm。[0112]图3:图表(a)和(b)示出当将硫酸亚铁(II)加入到NTA存在的HMRhoNox-M中时观察到的荧光光谱的变化。图表(a):不存在NTA。图表(b):存在NTA。图表(c)示出在光谱变化中575nm处的荧光强度随时间的变化;灰色圆：不存在NTA;实心圆：NTA。图表(d)示出图表(c)中从0秒到900秒的部分的放大图。测量条件:测量用在50mMHEPES缓冲液(pH7.4)中的2yMHMRhoNox-M、20yMFeSCk和200yMNTA进行。激发波长：550nm。图表（e)和（f)示出当将硫酸亚铁（II)加入到NTA存在的HMFluNox-M中时观察到的荧光光谱的变化。图表（e):不存在NTA;图表(f):存在NTA。图表(g)在光谱变化中535nm处的荧光强度随时间的变化;灰色圆：不存在NTA;实心圆圈：存在NTA。图表(h)示出图表(g)中从0秒到900秒的部分的放大图。测量条件：测量用在50mMHEPES缓冲液（pH7.4)中的2yMHMFluNox-M、20yMFeSCk和200福NTA进行。激发波长:520nm〇[0113]图4:图表(a)示出FluNox-1的结构。图表(b)至（e)示出通过将金属化合物加入多齿配体化合物存在的FluNox-1中，并在30分钟后用酶标仪测量荧光强度而得到的结果。竖轴表示相对于标记"1"的荧光强度值，标记"1"表示当仅加入荧光探针时(在图中表示为"没有金属"）观察到的荧光强度。在图表（13)10六、（(：）抑^、（(1沾014和（6灯?4中，激发波长是490nm，测量波长是510nm至570nm。[0114]图5:图表(a)示出FluNox-2的结构。图表(b)至（e)示出通过将金属化合物加入多齿配体化合物存在的FluNox-2中，并在30分钟后用酶标仪测量荧光强度而得到的结果。竖轴表示相对于标记"1"的荧光强度值，标记"1"表示当仅加入荧光探针时(在图中表示为"没有金属"）观察到的荧光强度。在图表（13)10六、（(：）抑^、（(1沾014和（6灯?4中，激发波长是490nm，测量波长是510nm至570nm。[0115]图6:图表(a)示出RhoNox-1的结构。图表(b)至（e)示出通过将金属化合物加入多齿配体化合物存在的RhoNox-1中，并在30分钟后用酶标仪测量荧光强度而得到的结果。竖轴表示相对于标记"1"的荧光强度值，标记"1"表示当仅加入荧光探针时(在图中表示为"没有金属"）观察到的荧光强度。在图表（13)10六、（(：）抑^、（(1沾014和（6灯?4中，激发波长是525nm，测量波长是580至640nm。[0116]图7:图表(a)示出RhoNox-2的结构。图表(b)至（e)示出通过将金属化合物加入多齿配体化合物存在的RhoNox-2中，并在30分钟后用酶标仪测量荧光强度而得到的结果。竖轴表示相对于标记"1"的荧光强度值，标记"1"表示当仅加入荧光探针时(在图中表示为"没有金属"）观察到的荧光强度。在图表（13)10六、（(：）抑^、（(1沾014和（6灯?4中，激发波长是525nm，测量波长是580至640nm。[0117]图8:图表(a)示出RhoNox-3的结构。图表(b)至（e)示出通过将金属化合物加入多齿配体化合物存在的RhoNox-3中，并在30分钟后用酶标仪测量荧光强度而得到的结果。竖轴表示相对于标记"1"的荧光强度值，标记"1"表示当仅加入荧光探针时(在图中表示为"没有金属"）观察到的荧光强度。在图表（13)10六、（(：）抑^、（(1沾014和（6灯?4中，激发波长是525nm，测量波长是580至640nm。[0118]图9:图表(a)示出Si-RhoNox-1的结构。图表(b)示出通过将金属化合物加入TPA存在的Si-RhoNox-1中，并在30分钟后用酶标仪测量荧光强度而得到的结果。竖轴表示相对于标记"1"的荧光强度值，标记"1"表示当仅加入荧光探针时(在图中表示为"没有金属"）观察到的荧光强度。激发波长:625nm，测量波长:660至720nm〇[0119]图10:图表(a)至(f)示出通过将硫酸亚铁(II)加入多齿配体化合物存在的荧光探针中，并用荧光分光光度计测量荧光强度随时间的变化而得到的结果。竖轴表示相对于标记"1"的荧光强度值，标记"1"表示当仅加入荧光探针时观察到的荧光强度。在图表(a)FluNox-1、（b)FluNox_2、（c)RhoNox-l、（d)RhoNox_2、（e)RhoNox_3和（f)Si-RhoNox-l中，符号表示以下内容：灰色圆：不存在多齿配体化合物；实心三角：IDA;实心正方形:NTA;实心圆：EDTA;实心倒三角：TPA。激发波长：500nm(FluNox-l和FluNox-2)，530nm(RhoNox-l、RhoNox-2和RhoNox-3)和630nm(SiRhoNox_l)。测量波长：530nm(FluNox_l和FluNox-2)，570nm(RhoNox_l、RhoNox_2和RhoNox-3)和665nm(SiRhoNox_l)。【具体实施方式】[0120]在下文中更详细地描述本发明。[0121]1、本发明的Fe(II)离子检测剂[0122]本发明的Fe(II)离子检测剂包括与具有至少三个配位位置的化合物(其在下文可称为"多齿配体化合物"）组合的由式(I)表示的化合物(荧光探针）。[0123](i)由式(I)表示的化合物(荧光探针）[0124]由式（I)表示的化合物（荧光探针)含有N-氧化物位点，其选择性地与Fe(II)离子反应从而转变成氨基。因为所产生的含氨基化合物发射强的荧光，所以由式(I)表示的化合物能够高选择性且高灵敏性地检测Fe(II)(荧光特性）。因此，该化合物用作Fe(II)离子选择性荧光探针。[0125]本发明检测的目标Fe(II)离子不仅包括游离的Fe(II)离子，而且包括含有与配体类化合物(例如，柠檬酸、氨基酸和原卟啉IX)配位的Fe(II)离子的化合物。[0126]由R1、R2、R3、R4、R51、R52、R6或R7表示的"低级烷基"的实例包括直链或支链&―6烷基。具体实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、新戊基、正己基、异己基和3-甲基戊基。优选的实例包括Cm烷基（即，甲基、乙基、正丙基和异丙基），并且更优选的实例包括甲基和乙基。[0127]由R\R2、R51或R52表示的"羧基低级烷基"是由上述低级烷基的至少一个氢原子被羧基取代而形成的基团。实例包括具有1至3个(特别是1个)羧基的直链或支链烷基。具体实例包括羧甲基、2-羧乙基、3-羧丙基和4-羧丁基，优选2-羧乙基。[0128]由R\R2、R51或R52表示的"芳基"的实例包括单环或双环芳基。具体实例包括苯基、甲苯甲酰基(toluyl)、二甲苯基和萘基，优选苯基。[0129]由R\R2、R51或R52表示的"芳基低级烷基"是由上述低级烷基的至少一个氢原子被芳基取代而形成的基团。实例包括苯基-&-6烷基，例如苄基和苯乙基，优选苄基。[0130]由R3、R4、R6或R7表示的"卤素"的实例包括氟、氯、溴和碘。[0131]由R5表示的"低级烷氧基"的实例包括直链或支链Ch烷氧基。具体实例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、仲丁氧基、正戊氧基、新戊氧基、正己氧基、异己氧基和3-甲基戊氧基。[0132]在由R5表示的"任选受保护的羟基"中的保护基团的实例包括甲氧基甲基(M0M)、2_四氢吡喃基(THP)和乙酰基(Ac)。[0133]表述"R1和R2可与它们所连接的氮原子一起形成吡咯烷环、哌啶环、吗啉环或任选取代的哌嗪环"是指由下式(其中R1和R2如上所限定)表示的基团：[0135]优选是由下式表示的基团：[0137]其中X表示0、CH2或NR12,其中R12表示氢或烷基羰基。[0138]由R12表示的"烷基羰基"的实例包括C2-6烷基羰基。具体实例包括乙酰基、丙酰基、丁酰基和异丁酰基。优选的实例包括C2-3烷基羰基，例如乙酰基和丙酰基，并且更优选的实例包括乙酰基。[0139]表述"R1和R3可一起形成三亚甲基"（-CH2CH2CH2_;下文中同样适用）和/或表述"R2和R4可一起形成三亚甲基"是指由下式(其中R1、R2、R3和R4如上所限定)表示的基团：[0141]是由下式表示的基团：[0143]其中R\R2、R3和R4如上所限定。[0144]当R5是由式(A)表示的基团时，R51和R52可与它们所连接的氮原子一起形成吡咯烷环、哌啶环或吗啉环。这是指由下式(其中R51和R52如上所限定)表示的基团：[0146]优选是由下式表示的基团：[0148]其中Y表示0、CH2或NR13，其中R13表示氢或烷基羰基。[0149]由R13表示的"烷基羰基"的实例包括C2-6烷基羰基。具体实例包括乙酰基、丙酰基、丁酰基和异丁酰基。优选的实例包括C2-3烷基羰基，例如乙酰基和丙酰基。更优选的实例包括乙酰基。[0150]当R5是由式(A)表示的基团时，R51和R6可一起形成三亚甲基，和/或R52和R7可一起形成三亚甲基。这是指由下式(其中1?51、妒2、1?6、1?7和11如上所限定)表示的基团：[0152]是由下式表示的基团：[0154]其中R51、R52、R6和R7如上所限定。[0155]环A中"任选取代的芳环"的芳环的实例包括单环、二环或三环芳环。具体实例包括苯环、萘环、蒽环和菲环。该芳环的取代基的实例包括任选受保护的羟基、低级烷氧基、卤素、羧基、低级烷氧羰基、-N=C=0、-N=C=S、磺基和活性酯基。该芳环可具有1至3个这些取代基。[0156]环A中"任选取代的杂芳环"的杂芳环的实例包括含有选自由氧、氮和硫组成的组中的1至3个原子的单环、二环或三环杂芳环。实例包括噻吩环、呋喃环、吡咯环、咪唑环、吡啶环、吡嗪环、嘧啶环、哒嗪环、吲哚环、喹啉环、异喹啉环、酞嗪环、萘啶环、喹喔啉环、喹唑啉环和吖啶环。该杂芳环的取代基的实例包括任选受保护的羟基、低级烷氧基、卤素、羧基、低级烧氧羰基、4=0=0、4=0=3、磺基和活性酯基。该杂芳环可具有1至3个这些取代基。[0157]环A优选由式(a)表示：[0159]其中R8表示任选受保护的羟基、低级烷氧基、卤素、羧基、低级烷氧羰基、-N=C=〇、_N=C=S、磺基和活性酯基;q表示0、1、2或3;并且当q是2或3时，两个或三个R8可相同或不同。[0160]连接至环A(包括R8)的取代基"任选受保护的羟基"中的保护基的实例包括甲氧基甲基(M0M)、2_四氢吡喃基(THP)和乙酰基(Ac)。[0161]连接至环A(包括R8)的取代基"低级烷氧基"的实例包括直链或支链(^-6(特别是Cl-3)烷氧基。具体实例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基和异丙氧基。[0162]连接至环A(包括R8)的取代基"卤素"的实例包括氟、氯、溴和碘。[0163]连接至环A(包括R8)的取代基"低级烷氧羰基"的实例包括直链或支链(&-6烷氧）羰基，例如甲氧羰基、乙氧羰基、正丙氧羰基、异丙氧羰基和叔丁氧羰基。[0164]连接至环A(包括R8)的取代基活性酯基是其中羧基(-C00H)被高度反应性的活性酯基取代的基团。实例包括用N-羟基琥珀酰亚胺得到的活性酯基(例如，-C(=0)0Su:Su是琥珀酰亚胺基）、将羧酸转变成混合酸酐而形成的基团（例如，_C(=0)0C(=0)R:1?是&-6烧基），以及使用CDI得到的咪唑酰基（imidazolide)(例如，-C(=0)-Im:Im是1-咪唑基）。[0165]在式(a)中，q优选为0、1或2,更优选0或1，并且特别更优选0。当q是1时，R8键合至苯环的键合位点优选如下所示：[0167]其中R8、W和Z如上所限定。[0168]W是CH2、C0或S(0)P，优选CH2或⑶，更优选C0。[0169]Z是0或NR9,其中R9是氢或烷基，并且Z优选0。[0170]由R9表示的烷基的实例包括直链或支链Ch烷基，并且具体实例包括甲基、乙基、正丙基和异丙基。[0171]m是0或1，并且优选0。[0172]n是0或1，并且优选0。[0173]p是1或2,并且优选2。[0174]由式（I)表示的化合物的优选实例包括如下化合物，在这些化合物中，R1和R2相同或不同，并且表示Cm烷基;R1和R2可与它们所连接的氮原子一起形成吗啉环或任选取代的哌嗪环(优选任选取代的哌嗪环，并且更优选烷基羰基取代的哌嗪环）；R3和R4是氢，或者R1和R3可一起形成三亚甲基;R2和R4可一起形成三亚甲基;R5可以是任选受保护的羟基或由式(A):-NR51R52表示的基团；当R5是由式(A)表示的基团时，R51和R52相同或不同，并且表示烷基;R6和R7表示氢，或者R51和R6可一起形成三亚甲基;R52和R7可一起形成三亚甲基;q是0;W是CH2或CO;Z是0;m是0以及n是0。[0175]由式（I)表示的化合物的更优选实例包括如下化合物，在这些化合物中，R1和R2相同或不同，并且表示&-6烷基;R3和R4是氢，或者R1和R3可一起形成三亚甲基;R2和R4可一起形成三亚甲基;R5可以是任选受保护的羟基或由式(A):-NR51R52表示的基团；当R5是由式(A)表示的基团时，R51和R52相同或不同，并且表示烷基;R6和R7表示氢，或者R51和R6可一起形成三亚甲基;R52和R7可一起形成三亚甲基;q是0;W是CH2或CO;Z是0;m是0以及n是0。[0176]本发明中化合物的更加优选的实例包括由式（I)表示的化合物，其中，R1和R2相同或不同，并且表示Ch烷基;R3和R4是氢;R5可以是任选受保护的羟基或由式(A):-NR51R52表示的基团；当R5是由式(A)表示的基团时，R51和R52相同或不同，并且表示烷基;R6和R7是氛;R8是氛;q是〇;W是CH2或C0;Z是0;m是0以及n是0。[0177]本发明中化合物的更加特别优选的实例包括由式(IA)表示的化合物，[0179]其中W'表示CH2或C0;并且R1、R2、R3、R4、R51、R52、R6、R7和V如上所限定。[0180]V是0或SiR1QRn，并且优选和R11相同或不同，并且表示氢或低级烷基，优选低级烷基。R1()或R11的低级烷基的实例包括直链或支链烷基、优选Ch烷基。具体实例包括甲基、乙基、正丙基和异丙基。[0181]在这些化合物中，特别优选的化合物是其中V是0;妒、1?2、1?51和R52相同或不同，并且表示&-3烷基(更优选甲基或乙基，特别是更优选乙基）；并且R3、R2、R6和R7是氢的那些化合物。[0182]在由式（I)表示的化合物中，当基团R5包含给电子原子时，例如氮和氧，（例如，_NR51R52和羟基），咕吨骨架结构中苯环共辄体系中的双键因为给电子效应而可以移位，从而形成环打开的化合物。例如，当基团R5是_NR51R52时，环打开，从而产生由式（la)表示的化合物：[0184]其中1^、1?2、1?3、1?4、1?5、1?6、1?7、1?8丄胃、2、环八、111和11如上所限定。作为另一个实例，当基团R5是羟基时，环打开，从而产生由式(lb)表示的化合物：[0186]其中妒、1?2、1?3、1?4、1?5、1?6、1?7、1?8丄胃、2、环八、111和11如上所限定。[0187]当由式(I)表示的化合物和/或由式（la)表示的化合物溶解在介质(溶剂）中时，由式（I)表示的化合物和由式（la)表示的化合物通常处于平衡状态。平衡点因介质（溶剂）的极性、pH或其他因素而改变。因此，在本说明书中，由式(I)表示的化合物和由式(la)表示的化合物统称为"由式(I)表示的化合物"。[0188]由式(I)表示的化合物例如可通过下述方法制备。[0190]其中妒、护、1?3、1?4、1?5、1?6、矿、1?8、￥、￥、2、环4、111和11如上所限定。[0191]由式(II)表示的化合物容易获得，或者通过或参考已知的方法制备。[0192]在由式(II)表示的化合物中，其中W是C=0的化合物可商购，或可通过或参考例如Bioorg.Med.Chem.17(2009)6952-6958,Org.Lett.12(2007)496-499,Org.Lett.13(2010),6354-6357,Tetrahedron61(2005)3097-3105中公开的方法制备。[0193]在由式（II)表示的化合物中，其中W是CH2的化合物可通过或参考例如OrganicLetters2010,12,3219-21，J.Am.Chem.Soc.2011,133,12960-3中公开的方法制备。[0194]由式（I)表示的化合物可通过使由式（II)表示的化合物氧化（用于氧化氮原子的反应)来制备。例如，由式(I)表示的化合物可通过或参考专利文献6中公开的方法来制备。[0195]因为咕吨骨架结构中苯环共辄体系中的双键由于与R1和R2连接的氮原子的给电子效应而移位，从而打开环，所以作为起始原料的由式(II)表示的化合物可转变成由式(Ila)表示的化合物：[0197]其中妒、护、1?3、1?4、1?5、1?6、矿、1?8、￥、1、2、环4、111和11如上所限定。[0198]该化合物通常发射强的荧光。当由式(II)表示的化合物和/或由式(Ila)表示的化合物溶解在介质(溶剂）中时，由式（II)表示的化合物和由式（IIa)表示的化合物通常处于平衡状态。平衡点因介质（溶剂）的极性、pH或其他因素而改变。因此，在本说明书中，由式(II)表不的化合物和由式（IIa)表不的化合物统称为"由式（II)表不的化合物"。[0199](ii)具有至少三个配位位置的化合物[0200]具有至少三个配位位置的化合物（多齿配体化合物）的实例包括具有相同或不同的至少三个配位位置的化合物，所述至少三个配位位置选自由氨基、羟基、醚(-〇-)、羧基、膦酸基和含氮杂芳环组成的组。[0201]如本文中所使用，"氨基"是指含有具有sp3杂化轨道的氮原子的部分。[0202]上述"含氮杂芳环"是指具有连接至其上的1至3个氮原子的杂芳环的部分(例如，吡啶环、咪唑环和吡咯环）。含氮杂芳环可任选具有1至3个取代基(例如，芳基，诸如苯基、甲苯甲酰基、二甲苯基和三甲苯基;和烷基，诸如甲基和乙基）。[0203]在上述配位位置中，优选氨基、羧基、膦酸基和含氮杂芳环（例如，吡啶环和吡咯环）。更优选氨基、羧基和吡啶环。还更优选氨基和吡啶环。化合物中配位位置的数量通常是3至16,优选4至12,更优选4至10,并且还更优选4至5。[0204]当具有至少三个配位位置的化合物含有氮原子时，配位位置的数量优选在5以内。[0205]当具有至少三个配位位置的化合物含有吡啶环时，配位位置的数量优选在3以内。[0206]似乎上述具有至少三个配位位置的化合物与Fe(II)离子快速形成络合物，并且该络合物与由式(I)表示的化合物(荧光探针)发生反应，从而有利于N-氧化物的还原反应(脱氧）。鉴于这种反应机理，当具有至少三个配位位置的化合物与Fe(II)离子形成络合物时，优选该化合物形成可与荧光探针反应的空配位点。[0207]具有至少三个配位位置的化合物的具体实例包括氨基羧酸化合物，诸如亚氨基二乙酸（IDA)、氮川三乙酸（NTA)、N，N，N'，N'_乙二胺四乙酸（EDTA)、1，3-丙二胺四乙酸(PDTA)、二亚乙基三胺五乙酸（DTPA)、羟乙基乙二胺三乙酸（HEDTA)、三亚乙基四胺六乙酸(TTHA)、1，2-二氨基环己烷四乙酸（CyDTA)、乙二醇醚二胺四乙酸(GEDTA或EGTA)、N，N-双(2-羟基苄基）乙二胺二乙酸(HBED)、乙二胺二丙酸(EDDP)、乙二胺二乙酸(EDDA)、乙二胺二琥珀酸(EDDS)、1，3_二氨基-2-羟基丙烷四乙酸(DPTA-OH)、二羟乙基甘氨酸(DHEG)、六亚甲基二胺四乙酸(HDTA)、羟乙基亚氨基二乙酸(HIDA)、二氨基丙烷四乙酸（甲基-EDTA)、氮川三丙酸(NTP)、L-谷氨酸二乙酸(GLDA)、0,0'_双-2-氨基苯基-N，N，N'，N'_四乙酸(BAPTA)和〇-氨基苯酚-N，N，0-三乙酸(APTRA);膦酸化合物，诸如乙二胺四（亚甲基膦酸）（EDTP0)、氮川三（亚甲基膦酸）（NTP0)、羟基亚乙基二膦酸(HEDP)和膦酰基丁烷三羧酸(PBTC);吡啶基甲基胺化合物，诸如三(2-吡啶基甲基)胺(TPA)和二甲基吡啶胺(DPA);环多胺化合物，诸如1，4,7-三氮杂环壬烷(了六0?、1，4,7，10_四氮杂环十二烷(0￥0^)和1，4,8，11-四氮杂环十四烷(CYCLAM);卟啉及其衍生物;原卟啉IX及其衍生物;酞菁及其衍生物;环聚吡咯衍生物；以及这些化合物的盐。其中，优选的实例包括吡啶基甲基胺化合物和氨基羧酸化合物，更优选的实例包括吡啶基甲基胺化合物。[0208]具有至少三个配位位置的化合物的盐的实例包括碱金属盐(例如，锂盐、钠盐和钾盐）、碱土金属盐(例如，钙盐）、铵盐和四烷基铵盐。特别是，当该化合物含有羧酸时，优选碱金属盐(钠盐）。[0209](iii)Fe(II)离子检测剂[0210]根据本发明的Fe(II)离子检测剂包括与具有至少三个配位位置的化合物（多齿配体化合物)组合的由式(I)表示的化合物(荧光探针）。[0211]根据本发明的Fe(II)离子检测剂没有特别限制，只要该检测剂包括上述两种组分，并且该检测剂可以是多种形式。实例包括由式(I)表示的化合物(荧光探针)与具有至少三个配位位置的化合物（多齿配体化合物）的混合物形式的检测剂(例如，组合物和组合试剂），和各自容纳在单独容器中的独立组分形式的检测剂(例如，试剂盒）。混合物形式的检测剂还包括固体形式(例如，粉末和晶体）的检测剂以及通过将组分溶解或分散在介质（例如，水和缓冲液）中而得到的溶液或分散体形式的检测剂。各自容纳在单独容器中的独立组分形式的检测剂也可以是单独的固体形式或通过将组分溶解或分散在介质（例如，水和缓冲液)中而得到的单独的溶液或分散体形式。[0212]2、检测Fe(II)离子的方法[0213]根据本发明的测量(或检测)Fe(II)离子的方法包括以下步骤：（1)使含有Fe(II)离子的样品与根据本发明的Fe(II)离子检测剂混合；以及(2)测量所得到的混合物的荧光光谱。具体地，Fe(II)离子可通过以下步骤来测量:在合适的缓冲液中混合含有Fe(II)离子的样品和本发明的Fe(II)离子检测剂，温育该混合物，然后用激发光照射该温育的混合物来测量荧光。[0214]使用的缓冲液没有特别限制，其实例包括已知的缓冲液，例如HEPES缓冲液液(pH7.4)〇[0215]缓冲液中由式⑴表示的化合物（焚光探针）的浓度没有特别限制，通常为约O.luM至ImM，优选约lyM至0.1mM，并且更优选约5yM至20yM。缓冲液中具有至少三个配位位置的化合物（多齿配体化合物）的浓度也没有特别限制，通常为约0.lyM至10mM，优选约lyM至ImM，并且更优选约10yM至500yM。[0216]在缓冲液中，对于每摩尔由式(I)表示的化合物(荧光探针），具有至少三个配位位置的化合物(多齿配体化合物)通常以约1至1000摩尔的量，优选约1〇至1〇〇摩尔的量存在。[0217]温育的温度和时间段没有特别限制。例如，温育可以在约0至40°C下进行约10分钟至2小时。当样品是细胞或组织时，优选施加适于培养的温度(例如，对于人类来源的细胞或组织来讲是37°C)。[0218]荧光可使用商购的荧光计来测量。Fe(II)离子在细胞中的动力学可使用已知的技术进行观察来研究，诸如焚光显微镜和共聚焦激光扫描焚光显微镜。[0219]与使用专利文献6所公开的荧光探针相比，使用根据本发明的方法可以更灵敏和更快速地荧光检测Fe(II)离子。[0220]实施例[0221]下述实施例详细描述了本发明。但是，本发明并不限于这些实施例。[0222]下述实施例使用硅胶柱色谱法或氧化铝色谱法来纯化化合物，并且使用薄层色谱法(TLC)、ESI-MS(JEOLJMS-T100TD)JH-NMR或13C-NMR(JE0LECA-500光谱仪)来鉴定化合物。[0223]实施例1[0224]根据专利文献6中公开的方法合成3'-(二乙氨基)-N，N_二乙基-3-氧代-3H-螺[异苯并呋喃-1，9'-咕吨]-6'-胺氧化物（以下简称为"RhoNox-1"）。[0225]实施例2[0226](1)以如下所述方法合成3'-(二甲氨基)-N，N_二甲基-3H-螺[异苯并呋喃_1，9'_咕吨]-6'-胺氧化物（以下简称为"HMRhoNox-M"或"RhoNox-2"）。[0227]根据例如OrganicLetters2010，12,3219-21，J.Am.Chem.Soc.2011，133，12960-3中公开的方法合成前体化合物N3'，N3'，N6'，N6'-四甲基-3H-螺[异苯并呋喃-1，9'_咕吨]-3'，6'_二胺。将90mg(0.24mmol)N3'，N3'，N6'，N6'-四甲基-3H-螺[异苯并呋喃-1,9'-咕吨]_3'，6'_二胺在搅拌下溶解在18mL乙酸乙酯中并冷却至0°C。将83mg(0.48mmol)间氯过苯甲酸逐渐加入其中，并且使上述混合物回到室温下，随后搅拌1小时。减压蒸馏除去溶剂，并通过氧化铝柱色谱法（氯仿：甲醇=50:1至20:1)纯化得到的残余物，由此得到无色粉末HMRhoNox-M(64mg，产率71%)。[0228]NMR(400MHz，CDCl3)S:7.91(d，J=2.3Hz，lH)，7.44(dd，J=8.6Hz，2.3Hz，lH)，7.37(m，2H)，7.26(m，lH)，7.04(d，J=8.6Hz，lH)，6.90(d，J=7.4Hz，lH)，6.80(d，J=6.9Hz，lH)，6.46(m，2H)，5.30(dd，J=20.0Hz，12.6Hz，2H)，3.58(d，J=4.0Hz，6H)，2.97(s，6H)〇[0229]13CNMR(MHz，CDC13)S:154.5,151.5,151.3,150.9,144.5,139.1,129.9,129.2，128.4,128.2,128.2,125.7,123.8,120.7，114.2，111.7,109.2,109.0，98.5,83.3,72.1，63.2,63.1,40.3〇[0230]HRMS(ESI+):m/zC24H25N2〇3+计算值：389.I860,实测值：389.1871。[0231](2)以如下所述方法合成3'-(二乙氨基)-N，N-二乙基-3H-螺[异苯并呋喃-1，9'_咕吨]-6'-胺氧化物（以下简称为"HMRhoNox-E"）。[0232]根据例如OrganicLetters2010，12,3219-21，J.Am.Chem.Soc.2011，133，12960-3中公开的方法合成前体化合物N3'，N3'，N6'，N6'-四乙基-3H-螺[异苯并呋喃-1，9'_咕吨]_3'，6'_二胺。将267mg(0.62mmol)N3'，N3'，N6'，N6'-四乙基-3H-螺[异苯并呋喃-1,9'-咕吨]_3'，6'-二胺在搅拌下溶解在20mL乙酸乙酯中并冷却至0°C。将214mg(1.24mmo1)间氯过苯甲酸逐渐加入其中，并且使上述混合物回到室温下，随后搅拌1小时。减压蒸馏除去溶剂，并通过氧化铝柱色谱法（氯仿：甲醇=20:1至10:1)纯化得到的残余物，由此得到浅紫色粉末HMRhoNox-E(145mg，产率53%)。[0233]4NMR(500MHz，CDCl3)S:7.78(d，J=1.9Hz，lH)，7.37(m，2H)，7.28(m，2H)，7.03(d,J=8.7Hz,lH),6.92(d,J=7.7Hz,lH),6.77(d,J=8.7Hz,lH),6.42(m,4H),5.29(dd,J=16.4Hz，12.6Hz，2H)，3.70(m,4H)，3.35(q，J=7.1Hz，4H)，1.16(q，J=6.6Hz，12H)。[0234]13C匪R(125MHz，CDC13)S:151?7，151?0，149?0，148?8，144?4，139?2，129?6，129.4,128.3,128.1,125.5,123.8,120.6,115.5,111.1,110.7,108.5,97.5,83.3,71.9,66.9,44.4,12.5,8.3〇[0235]HRMS(ESI+):m/zC28H33N203+计算值:445.2486,实测值:445.2501。[0236](3)以如下所述方法合成3'-羟基-N，N_二甲基-3H-螺[异苯并呋喃-1，9'_咕吨]-6'_胺氧化物（以下简称为"HMFluNox-M"）。[0237]根据例如OrganicLetters2010，12,3219-21，J.Am.Chem.Soc.2011，133，12960-3中公开的方法合成前体化合物3'-(二甲氨基)-3H-螺[异苯并呋喃-1，9'_咕吨]-6'-醇。将34mg(0?098mmol)3'-(二甲氨基)-3H-螺[异苯并咲喃-1，9'-咕吨]-6'-醇在搅拌下溶解在4mL乙酸乙酯中并冷却至0°C。将34mg(0.20mmol)间氯过苯甲酸逐渐加入其中，并且使上述混合物回到室温下，随后搅拌1小时。减压蒸馏除去溶剂，并通过氧化铝柱色谱法(氯仿：甲醇=10:1至8:1)纯化得到的残余物，由此得到无色粉末HMFluNox-M(21mg，产率58%)。[0238]咕NMR(400MHz，CDC13)S:8.47(s，1H)，7.28(s，2H)，7.18-7.17(111，1H)，7.ll(d，J=2.8Hz,lH),6.93(s,2H),6.83(d,J=8.0Hz,1H),6.67(d,J=8.8Hz,lH),6.48(dd,J=8.8Hz,2.4Hz,1H)5.24,(m,2H),3.52(s,6H)〇[0239]13C匪R(400MHz，CDC13)S:159.8,153.7,151.5,151.0,144.4,139.0,129.9,129.4,128.4,128.2,126.1，124.0,120.6,113.7,113.4,112.8,110.5,103.1，83.3,72.1，63.1,62.2〇[0240]HRMS(ESI+):m/zC22H2〇N〇4+计算值：362.1387,实测值：362.1389。[0241](4)以如下所述方法合成3'-羟基-N，N-二乙基-3H-螺[异苯并呋喃-1，9'_咕吨]-6'-胺氧化物（以下简称为"HMFluNox-E"）。[0242]根据例如OrganicLetters2010，12,3219-21，J.Am.Chem.Soc.2011，133，12960-3中公开的方法合成前体化合物3'-(二乙氨基)-3H-螺[异苯并呋喃-1，9'-咕吨]-6'-醇。将10011^(0.27111111〇1)3'-(二乙氨基)-311-螺[异苯并呋喃-1，9'-咕吨]-6'-醇在搅拌下溶解在10mL乙酸乙酯中并冷却至0°C。将93mg(0.54mmol)间氯过苯甲酸逐渐加入其中，并且使上述混合物回到室温下，随后搅拌1小时。减压蒸馏除去溶剂，并通过氧化铝柱色谱法(氯仿：甲醇=20:1至10:1)纯化得到的残余物，由此得到无色粉末HMFluNox-E(102mg，产率97%)。[0243]4NMR(400MHz，CDCl3)S:7.72(d，J=2.4Hz，lH)，7.33(m，3H)，7.19(t，J=7.5Hz，1H)，7.02(d，J=9.2Hz，lH)，6.72(d，J=8.7Hz，2H)，6.55(d，J=2.4Hz，lH)，6.46(dd，J=8?7Hz，2?4Hz，1H)，5?24(s，1H)，3?76(m，2H)，3?56(m，1H)，1?01(m，6H)。[0244]13C匪R(100MHz，CDC13)S:158.8,151.1,150.1,148.3,144.6,138.7,130.0，129.8.128.3.126.0.123.2.120.8.115.8.115.2.112.2.110.8.101.7，83.3,72.2,66.4，29.3.22.2.13.0.7.22〇[0245]HRMS(ESI+):m/zC24H24NO/计算值：390.1700,实测值：390.1695。[0246](5)以如下所述方法合成4-(3'_羟基-3-氧代-3H-螺[异苯并呋喃-u'-咕吨]-6'-基)吗啉-4-氧化物（以下简称为"FluNox-1"）。[0247]根据例如OrganicLetters,2011，13,6354-6357中公开的方法合成前体化合物3'-羟基-6'-吗啉代-3H-螺[异苯并呋喃-1，9'-咕吨]-3-酮。将100mg(0?23mmol)3'-羟基-6'_吗啉代-3H-螺[异苯并呋喃-1，9'-咕吨]-3-酮溶解于10mL二甲基甲酰胺中，并在0°C下搅拌该混合物10分钟。将47mg(0.27mmol)间氯过苯甲酸逐渐加入其中，并且使上述混合物回到室温下，随后搅拌3小时。再次将47mg(0.27mmo1)间氯过苯甲酸逐渐加入其中。搅拌混合物3小时，然后减压蒸馏除去溶剂。通过硅胶柱色谱法(氯仿：甲醇=7:1)纯化得到的残余物，由此得到FluNox-1(37mg，产率63%)。[0248]4Mffi(CD30D，500MHz)S:8.10(d，lH，J=2.3Hz)，8.05(d，lH，J=7.4Hz)，7.80-7.71(m,2H),7.67(dd,lH,J=9.2,2.3Hz),7.22(d,lH,J=7.4Hz),7.00(d,lH,J=9.2Hz),6.65-6.58(m，2H),4.47(t，2H，J=11.2Hz),4.18-1.12(m，2H),3.94(d，2H，J=12.6Hz)，3.23(m,2H)〇[0249]13C匪R(CD30D，125MHz)S:169.7,160.1，155.2，115.3，113.0，109.9，109.2,102.4,82.4,66.9,61.6。[0250]HRMS(ESI+):m/zC24H2〇N〇6+计算值：418.1285,实测值：418.1304。[0251](6)以如下所述方法合成4-乙酰基-i-CT-羟基-3-氧代-3H-螺[异苯并呋喃-i，9'_咕吨]-6'-基)-哌嗪-1-氧化物（以下简称为"FluNox-2"）。[0252]根据例如ChemicalCommunications，2013,49，10474-10476中公开的方法合成前体化合物3'-羟基-6'-(哌嗪-1-基）-3H-螺[异苯并呋喃_1，9'_咕吨]-3-酮。将78mg(0.16臟〇1)3'-羟基-6'-(哌嗪-1-基)-311-螺[异苯并呋喃-1，9'-咕吨]-3-酮溶解在21^吡啶中，并且在0°C下将148iiL(l.6mmol)乙酸酐逐渐加入其中。使上述混合物回到室温下，并搅拌1小时。减压蒸馏除去溶剂，并且通过硅胶柱色谱法(氯仿：甲醇=100:0至100:1)纯化得到的残余物，由此得到浅黄色粉末3'-(4_乙酰基哌嗪-1-基)-3_氧代-3H-螺[异苯并呋喃-1，9'-咕吨]-6'-基-乙酸酯(68mg，产率91%)。[0253]咕NMR(CDCl3,500MHz)S:8.02(dd，J=7.6Hz，lH)，7.64(t，J=7.5Hz，lH)，7.62(t，J=7.5Hz,lH),7.17(d,J=7.6Hz,lH),7.06(d,J=2.0Hz,lH),6.81-6.76(m,2H),6.69(d,J=2.2Hz,lH),6.65(d,J=8.9Hz,lH),6.60(dd,J=8.9Hz,2.2Hz,1H),3.75-3.72(m,2H),3?60-3?58(m,2H)，3?25-3?20(m,4H)，2?32(s，3H)，2?12(s，3H)。[0254]13C匪R(CD30D，125MHz)S:169.2，168.9，168.8，152.7，152.4，152.0，151.8，151.7,135.0,129.7,129.0,128.7,126.4,124.9,123.9,117.2,116.6,112.2,110.1，109.2,102.2,82.5,48.1,47.9,45.6,40.8,21.2,21.0〇[0255]HRMS(ESI+):m/zC28H24N2〇6Na+计算值：507.1527,实测值：507.1554。[0256]随后，将90mg(0.19mmol)得到的3'-(4-乙酰基哌嗪-丨-基)-3-氧代-3H-螺[异苯并呋喃_1，9'_咕吨]-6'-基-乙酸酯溶解在5mL二氯甲烷中，并在0°C下将48mg(0.28mmol)间氯过苯甲酸逐渐加入其中。使上述混合物回到室温下，并搅拌5小时，随后减压蒸馏除去溶剂。通过硅胶柱色谱法(氯仿：甲醇=10:1)纯化得到的残余物，由此得到无色粉末1_(3'_乙酰氧基-3-氧代-3H-螺[异苯并呋喃-1，9'-咕吨]-6'-基)-4-乙酰基哌啶-1-氧化物(26mg，产率28%)。[0257]4匪1?(0)(：13,50冊1^)5:8.25((1，了=2.0他，11〇,8.06((1，了=7.61^，111)，7.72-7.66(m，2H)，7.61(dd，J=8.7Hz，2.0Hz，lH)，7.18(t，J=Hz，lH)，7.14(d，J=3.1Hz，lH)，6.96(t,J=8.7Hz,lH),6.85(s,2H),4.67(d,J=13.7Hz,2H),4.43(t,J=12.5Hz,2H),3.86-3.73(m,4H),3.21(t,J=10.6Hz,4H),2.33(s,3H),2.18(s,3H)〇HRMS(ESI+)：m/zC28H24N2〇7Na+计算值:523?1476，实测值:523?1483〇[0258]随后，将18mg(0.036mmol)得到的无色粉末溶解于1.5mL甲醇中，并将15mg(0.llmmol)碳酸钾的0.5mL水溶液加入其中，随后在室温下搅拌30分钟。然后加入1MHclaq以中和该混合物。用二氯甲烷(5mLX5)萃取所得到的中和的混合物。用硫酸镁干燥有机层，并减压蒸馏除去溶剂。通过硅胶柱色谱法(氯仿：甲醇=10:1至7:1)纯化得到的残余物，由此得到无色粉末FluNox-2(14mg，产率82%)。[0259]NMR(CD30D，500MHz)S:8.11(dd，J=5.2Hz，2.3Hz，lH)，8.03(d，J=7.5Hz，lH)，7.78(t,J=7.5Hz,lH),7.73(t,J=7.4Hz,lH),7.66-7.63(m,lH),7.20(d,J=7.5Hz,lH),6.99(d,J=8.6Hz,lH),6.73(d,J=2.3Hz,1H),6.64(d,J=9.2Hz,1H),6.58(d,J=8.6Hz,2.3Hz，lH),4.61(d，J=13.8Hz，1H),4.12-4.10(m，2H),4.00-3.98(m，2H),3.64-3.59(m,1H)，3?27-3?26(m，2H)，2?16(s，3H)。[0260]13C匪R(CD30D，125MHz)S:170.5,169.6,160.2,155.3,152.8,152.1,151.7，135.6,130.2,129.3,128.9,126.2,124.8,123.8,120.8,115.4,112.9,109.9,109.2，102.3,66.6,41.1,36.3,19.7。[0261]HRMS(ESI+):m/zC26H23N2〇6+计算值:459.1551，实测值:459.1553。[0262](7)以如下所述方法合成4-乙酰基-i-CT-G-乙酰基哌嗪-丨-基)-3-氧代-3H-螺[异苯并咲喃_1，9咕吨]-6'-基）哌嗪-1-氧化物（以下简称为"RhoNox-3"）。根据例如Org.Lett.2011,13,6354-6357中公开的方法合成前体化合物二叔丁基-4,4'-(3-氧代-3H-螺[异苯并呋喃_1，9'_咕吨]-3'，6'_二基)双(哌嗪-1-羧酸酯）。将188mg(0.028mmol)二叔丁基-4,4'-(3-氧代-3H-螺[异苯并呋喃_1，9'_咕吨]-3'，6'_二基)双(哌嗪-1-羧酸酯)溶解于3mL甲醇中，并在0°C下将3mL2M的HC1/甲醇溶液滴加入其中。使上述混合物回到室温下并搅拌10小时，随后减压蒸馏，由此得到残余物(深紫色粉末）。将该残余物溶解于5mL无水二氯甲烷中，并将196yL(1.41mmol)三乙胺和68yL(0.84mmol)吡啶加入其中。将混合物冷却至〇°C，并将60此(0.28mmol)乙酰氯在二氯甲烷(3mL)中的溶液加入其中。使上述混合物回到室温下，并在氮气气氛下搅拌3小时，随后用30mL饱和碳酸氢钠水溶液淬灭，然后用二氯甲烧(30mLX5)萃取。用50mL水和50mL盐水清洗有机层。用无水硫酸镁干燥得到的溶液，并减压蒸馏除去溶剂。通过硅胶柱色谱法(氯仿：甲醇=20:1至10:1)纯化得到的紫色粉末，由此得到紫色粉末1，1'-(4,4'-(3_氧代-3H-螺[异苯并呋喃_1，9'_咕吨]_3'，6'_二基)双(哌嗪-4,1-二基）二乙酮）（142mg，产率92%)。[0263]XHNMR(CDCl3,400MHz)8：8.00(d,J=8.0Hz,lH),7.65-7.60(m,2H),7.17(d,J=7.2Hz,lH),6.69(m,2H),6.67(d,J=9.2Hz,2H),6.61(dd,J=8.8Hz,2.4Hz,2H),3.77-3.76(m,4H),3.66-3.61(m,4H),3.26-3.22(m,8H),2.15(s,6H)〇[0264]13C匪R(CDC13，100MHz)S:171.8,171.7,154.6,152.1,135.9,131.0,130.1,129.6,126.4,125.8,113.5,111.3，102.7,46.9,42.3,21.2。[0265]HRMS(ESI+):m/zC32H32N4Na〇5+计算值：575?2265，实测值：575?2288。[0266]随后，将133mg(〇.24mm〇l)得到的l，^-(4,4'-(3-氧代-3H-螺[异苯并呋喃-l，9'-咕吨]-3'，6'-二基)双(哌嗪-4，l-二基）二乙酮)溶解于4mL乙酸乙酯和2mL二氯甲烷中，并在0°C下将46mg(0.27mmol)间氯过苯甲酸逐渐加入其中。使上述混合物回到室温下并搅拌1小时，随后减压蒸馏溶剂。通过硅胶柱色谱法(氯仿：甲醇=20:1至8:1)纯化得到的残余物，由此得到白色粉末RhoNox-3(60mg，产率44%)。[0267]NMR(CD30D，500MHz)S:8.12(dd，J=5.2Hz，2.3Hz，lH)，8.04(d，J=7.5Hz，lH)，7.78(t,J=8.0Hz,lH),7.73(t,J=7.5Hz,lH),7.65-7.62(m,lH),7.20(d,J=7.5Hz,lH),6.99(d,J=9.2Hz,lH),6.88(d,J=2.3Hz,1H),6.79(d,J=8.6Hz,2.3Hz,1H),6.67(d,J=9.2Hz,lH),4.63(d,J=13.8Hz,1H),4.15-4.12(m,2H),4.02-3.96(m,2H),3.72-3.61(m,5H)，3.32-3.25(m，6H)，2.18(s，3H)，2.13(s，lH)。[0268]13C匪R(CD30D，125MHz)S:170.5,170.4,169.7,155.3,153.1,152.8,152.1，151.9,135.5,130.2,129.3,128.4,126.3,124.7,123.8,120.8,115.3,112.6,109.9，108.4,101.8,82.3,66.6,45.7,41.1,41.0,36.3,19.8,19.7〇[0269]HRMS(ESI+):m/zC32H33N406+计算值：569.2395,实测值：569.2390。[0270](8)以如下所述方法合成3-(二乙氨基)-N，N-二乙基-5，5-二甲基-3'-氧代-3'H，5H-螺[二苯并[b，e]娃-10，1'-异苯并咲喃]-7-胺氧化物（以下简称为"Si-RhoNox-1"）。[0271]根据例如ChemicalCommunications2014，50，14374-14377中公开的方法合成前体化合物3，7-双(二乙氨基)-5，5-二甲基-3'H，5H-螺[二苯并[b，e]硅-10，1'异苯并呋喃]-3'-酮(娃-罗丹明）。将30011^(0.61]11]1〇1)娃-罗丹明溶解于10411^(1.21]11]1〇1)碳酸氢钠在乙酸乙酯中的溶液（15mL)中，并且在0°C下将182mg(0.74mmo1)间氯过苯甲酸逐渐加入其中。将混合物加热至室温，然后搅拌30分钟。通过硅藻土垫进行过滤除去不溶物，随后减压蒸馏。通过硅胶柱色谱法(氯仿：甲醇=15:1)纯化得到的残余物，由此得到橙色粉末Si-RhoNox-1(172mg，产率55%)。[0272]咕NMR(400MHz，CDCl3)S:8.31(d，lH，J=2.4Hz)，8.01(d，lH，J=7.7Hz)，7.72(t，1H,J=7.0Hz),7.61(t,lH,J=7.5Hz),7.41(t,2H,J=7.5Hz),7.01(d,lH,J=9.2Hz),6.94(d,lH,J=2.9Hz),6.83(d,lH,J=9.2Hz),6.51(dd,lH,J=9.2,2.9Hz),3.66-3.62(m,4H),3.37(q,4H,J=7.1Hz),1.16-1.12(m,12H),0.68(d,6H,J=14.0Hz)〇[0273]13C匪R(100MHz，CDC13)S:-2.12,8.01，8.03，12.13.18.11，43.92,66.43,66.51，76.89,90.45,112.06,115.59,121.67,124.48,125.77,126.53,126.64,127.34,128.14，128.92,133.53,136.47,138.43,145.18,146.49,152.51,169.76〇[0274]HRMS(ESI+):m/zC3〇H37N2〇3Si+计算值：501?2568，实测值：501?2571。[0275]测试例1:Rhonox_l和多齿配体化合物[0276]该测试使用RhoNox-1作为荧光探针。在该测试中，为每个样品制备RhoNox-1在二甲亚砜中的ImM溶液，并加入缓冲液以获得所需最终浓度。[0277]将RhoNox-1加入到50mM的HEPES缓冲液(pH7.4)中以产生最终浓度2yM，并进一步将多齿配体化合物(NTA、EDTA和TPA)分别加入其中，以产生最终浓度200yM。然后将硫酸亚铁(II)加入其中以产生最终浓度20yM，并且在室温下搅拌的同时，每5分钟测量一次混合物的荧光。激发波长:540nm〇[0278]如图2的图表(a)至(d)中所示，虽然仅加入Fe(II)离子的情况中荧光强度在1小时内增加约30倍，但Fe(II)离子+NTA表现出100倍高的荧光强度，Fe(II)离子+TPA表现出200倍高的荧光强度，以及Fe(II)离子+EDTA表现出80倍高的荧光强度。图2中图表(e)和(f)揭示了在575nm处荧光强度随时间的变化表现出明显区别，特别是在开始时；即加入多齿配体化合物后约5分钟，Fe(II)离子+NTA、Fe(II)离子+TPA以及Fe(II)离子+EDTA立即表现出与不含多齿配体化合物的样品在1小时后表现出的荧光强度基本同等水平的荧光强度。这表明加入这些多齿配体化合物能够以更高灵敏度检测Fe(II)离子。[0279]测试例2:HMRhonox-M和NTA[0280]该测试使用HMRhoNox-M作为荧光探针。在该测试中，为每个样品制备HMRhoNox-M在二甲亚讽中的ImM溶液，并加入缓冲液以获得所需最终浓度。[0281]将HMRhoNox-M加入到50mM的HEPES缓冲液(pH7.4)中以产生最终浓度2虚，然后进一步加入多齿配体化合物NTA以产生最终浓度200yM。然后将硫酸亚铁（II)加入其中，以产生最终浓度20yM，并且在室温下搅拌的同时，每5分钟测量一次混合物的荧光。激发波长：520nm〇[0282]如图3的图表(a)至(d)中所示，使用含羟甲基的HMRhoNox-M在NTA存在下的荧光测量揭示了可以以高灵敏度检测Fe(II)离子。[0283]测试例3:HMFluNox_M和NTA[0284]该测试使用HMFluNox-M作为荧光探针。在该测试中，为每个样品制备HMFluNox-M在二甲亚讽中的ImM溶液，并加入缓冲液以获得所需最终浓度。[0285]将HMFluNox-M加入到50mM的HEPES缓冲液(pH7.4)中以产生最终浓度2虚，然后进一步加入多齿配体化合物NTA，以产生最终浓度200yM。然后将硫酸亚铁(II)加入其中，以产生最终浓度20yM，并且在室温下搅拌的同时，每5分钟测量一次混合物的荧光。[0286]如图3的图表(e)至(h)中所示，使用含羟甲基的HMFluNox-M在NTA存在下的荧光测量揭示了可以以高灵敏度检测Fe(II)离子。[0287]上述实验事实揭示了，使多种多齿配体化合物与由式（I)表示的荧光探针同时存在可显著增加响应于Fe(II)离子的响应速度和荧光强度增强比。换句话说，根据本发明的Fe(II)离子检测剂可以高选择性和高灵敏度快速检测在各种样品中含有的Fe(II)离子。[0288]测试例4:选择性检测Fe(II)离子[0289]该测试使用FluNox-1、FluNox-2、RhoNox_l、RhoNox-2、RhoNox_3或Si-RhoNox-1作为荧光探针，IDA、NTA、EDTA或TPA作为多齿配体化合物，以及MnS〇4、CoS〇4、NiS〇4、FeS〇4、卩6〇13、(：113〇4、2113〇4、恥(：1、1((：1、]\^(：12丄3(：12或[01(]\^^)4??6]作为金属化合物。首先，制备了下述原液。[0290]金属化合物原液[0291]除[Cu(MeCN)4PF6]之外的过渡金属化合物：ImM水溶液[0292]碱金属或碱土金属化合物：100mM水溶液[0293][Cu(MeCN)4PF6]:ImM乙臆溶液[0294]荧光探针原液[0295]ImM二甲基甲酰胺溶液[0296]多齿配体化合物原液[0297]IDA(钠盐）：lOOmM水溶液[0298]NTA(钠盐）：lOOmM水溶液[0299]EDTA(钠盐）：lOOmM水溶液[0300]TPA:lOOmM二甲亚砜溶液[0301]将这些原液分别加入到缓冲液中以产生最终浓度以备使用。以下是具体方法。将荧光探针加入到50mM的HEPES缓冲液(pH7.4)中以产生最终浓度2yM，然后进一步将多齿配体化合物加入其中以产生最终浓度200yM。将100yL所得到的溶液置于96孔板的每个孔中。然后将过渡金属化合物加入每个孔中以产生最终浓度20yM或者将碱金属或碱土金属化合物加入到每个孔中以产生最终浓度2mM。将混合物在室温下搅拌温育30分钟，并用酶标仪(Gl〇MaX，Pr〇mega公司）测量荧光强度。使用适合于各荧光探针波长的滤波器测量荧光强度。具体地，FluNox-1和FluNox-2使用490nm的激发波长，测量在510nm至570nm范围内的荧光强度。RhoNox-1、RhoNox_2和RhoNox-3使用525nm的激发波长，测量在580nm至640nm范围内的荧光强度。Si-RhoNox-1使用625nm的激发波长，测量在660nm至720nm范围内的荧光强度。图4至图9示出了测量结果。[0302]测试例5[0303]该测试使用FluNox-1、FluNox-2、RhoNox_l、RhoNox-2、RhoNox_3或Si-RhoNox-1作为荧光探针，IDA、NTA、EDTA或TPA作为多齿配体化合物，以及FeS〇4作为金属化合物。以与测试例4相同的方式制备原液。[0304]将上述原液分别加入到缓冲液中以产生所需最终浓度以备使用。以下是具体方法。将荧光探针加入到3mL50mM的HEPES缓冲液(pH7.4)中以产生最终浓度2yM，然后进一步将多齿配体化合物加入其中以产生最终浓度200yM。然后加入FeSCk以产生最终浓度20yM。在时间点〇秒、10秒使用荧光分光光度计(FP-6600，JASC0)测量每种溶液的荧光光谱，然后在添加后60分钟内每300秒测量一次^对于FluNox-1和FluNox-2,激发波长是500nnu对于RhoNox-1、RhoNox_2和RhoNox-3，激发波长是530nm，以及对于SiRhoNox-1，激发波长是630腦。测量了530nm(FluNox_l和FluNox-2)、570nm(RhoNox_l、RhoNox_2和RhoNox-3)和665nm(SiRhoNox-l)的荧光强度。图10示出测量结果。【主权项】1.一种Fe(II)离子检测剂，包括与具有至少S个配位位置的化合物组合的由式（I)表示的化合物(巧光探针）：其中，Ri和R2相同或不同，并且表示低级烷基、簇基低级烷基、芳基或芳基低级烷基；R3和R4相同或不同，并且表示氨、面素或低级烷基；Ri和R2可与它们所连接的氮原子一起形成化咯烧环、赃晚环、吗嘟环或任选取代的赃嗦环；Ri和R3可一起形成=亚甲基；R2和R4可一起形成=亚甲基；R嗦示氨、任选受保护的径基、低级烷氧基或由式(A)=-NRSiR5嗦示的基团，其中R5哺R52相同或不同，并且表示低级烷基、簇基低级烷基、芳基或芳基低级烷基，或RSi和R52可与它们所连接的氮原子一起形成化咯烧环、赃晚环、吗嘟环或任选取代的赃嗦环；R6和R7相同或不同，并且表示氨、面素或低级烷基；当R5是由式(A)表示的基团时，RSi和R6可一起形成=亚甲基，或R52和R7可一起形成=亚甲基；环A表示任选取代的芳环或任选取代的杂芳环；V表示O或SiRiVi,其中，Ri哺Ri哺同或不同，并且表示氨或低级烷基；W表示C出、CO或S(O)P;Z表示0或NR9，其中R9表示氨或烷基；m和n相同或不同，并且表示0或1;W及P表示1或2。2.根据权利要求1所述的Fe(II)离子检测剂，其中，所述具有至少S个配位位置的化合物具有相同或不同的至少=个配位位置，所述至少=个配位位置选自由氨基、径基、簇基、麟酸基和含氮杂芳环组成的组。3.根据权利要求1或2所述的Fe(II)离子检测剂，其中，所述具有至少S个配位位置的化合物是亚氨基二乙酸（IDA)、氮川S乙酸(NTA)、N，N，N'，N'-乙二胺四乙酸巧DTA)、l，3-丙二胺四乙酸(PDTA)、二亚乙基S胺五乙酸(DTPA)、径乙基乙二胺S乙酸化EDTA)、S亚乙基四胺六乙酸（TTHA)、1，2-二氨基环己烧四乙酸（CyDTA)、乙二醇酸二胺四乙酸（G抓TA或EGTA)、N，N-双（2-径基苄基）乙二胺二乙酸化肥D)、乙二胺二丙酸化DDP)、乙二胺二乙酸化DDA)、乙二胺二班巧酸巧DDS)、1,3-二氨基-2-径基丙烷四乙酸(DPTA-OH)、二径乙基甘氨酸(D皿G)、六亚甲基二胺四乙酸化DTA)、径乙基亚氨基二乙酸化IDA)、二氨基丙烷四乙酸(甲基-EDTA)、氮川S丙酸(NTP)a-谷氨酸二乙酸(GLDA)、0,0'-双-2-氨基苯基-N，N，N'，N'-四乙酸(BAPTA)、乙二胺四（亚甲基麟酸）化DTPO)、氮川S(亚甲基麟酸）（NTPO)、径基亚乙基二麟酸化EDP)、麟酷基下烧S簇酸(PBTC)、S(2-化晚基甲基)胺(TPA)、二甲基化晚胺(DPA)、邻氨基苯酪-N，N，〇-S乙酸(APTRA)、化嘟或其衍生物、献菁或其衍生物、1，4,7-S氮杂环壬烧（TACN)、1，4,7,10-四氮杂环十二烧（CYCLEN)、1，4,8,11-四氮杂环十四烧(CY化AM),或它们的盐。4.根据权利要求1至3中任一项所述的Fe(II)离子检测剂，其中，式（I)中的环A由式(a)表不：其中，R嗦示任选受保护的径基、低级烷氧基、面素、簇基、低级烧氧幾基、-N=C=CK-N=C=S、横基或活性醋基;q表示0、1、2或3;并且当q是2或3时，R呵相同或不同。5.根据权利要求1至4中任一项所述的化(II)离子检测剂，其中，R哺R2相同或不同，并且表示打-6烷基；Ri和R2可与它们所连接的氮原子一起形成吗嘟环或任选取代的赃嗦环；R3和R4表示氨，或者Ri和R3可一起形成=亚甲基；R2和R4可一起形成=亚甲基；R5表示任选受保护的径基或由式(A):-NRS1r52表示的基团；当R5是由式(A)表示的基团时，RSi和R52相同或不同，并且表示Ci-6烷基；R6和R7表示氨;或者r5i和R6可一起形成=亚甲基；RS2和R7可一起形成=亚甲基；q是0;W是C出或CO;Z是0;m是0;并且n是0。6.根据权利要求1至5中任一项所述的Fe(II)离子检测剂，其中，Ri和R2相同或不同，并且表示Ci-3烷基;R3和R4表示氨;R5表示任选受保护的径基，或由式(A):-NRS1r52表示的基团，当R5是由式(A)表示的基团时，R5哺R52相同或不同，并且表示Ci-3烷基;R哺R嗦示氨;q是0;W是C出或CO;Z是0;m是0;并且n是0。7.根据权利要求1至6中任一项所述的化（II)离子检测剂，其中，所述由式（I)表示的化合物(巧光探针)和所述具有至少=个配位位置的化合物混合在一起。8.根据权利要求1至6中任一项所述的Fe(II)离子检测剂，所述化（II)离子检测剂是试剂盒的形式，该试剂盒包括容纳所述由式（I)表示的化合物（巧光探针）的容器和容纳所述具有至少=个配位位置的化合物的容器。9.一种用于检测化（II)离子的方法，所述方法包括W下步骤：(1)使含有Fe(II)离子的样品与根据权利要求1至8中任一项所述的铁(II)离子检测剂混合；W及(2)测量所得到的混合物的巧光光谱。10.-种用于增加化(II)离子检测灵敏度的方法，所述方法包括W下步骤：(1)使含有Fe(II)离子的样品与根据权利要求1至8中任一项所述的铁(II)离子检测剂混合；W及(2)测量所得到的混合物的巧光光谱。11.一种用于制备化(II)离子检测剂的方法，所述方法包括W下步骤：使由式(I)表示的化合物(巧光探针)与具有至少=个配位位置的化合物混合，其中，Ri和R2相同或不同，并且表示低级烷基、簇基低级烷基、芳基或芳基低级烷基；R3和R4相同或不同，并且表示氨、面素或低级烷基；Ri和R2可与它们所连接的氮原子一起形成化咯烧环、赃晚环、吗嘟环或任选取代的赃嗦环；Ri和R3可一起形成=亚甲基；R2和R4可一起形成=亚甲基；R可W是氨、任选受保护的径基、低级烷氧基或由式(A)=-NRSiR5嗦示的基团，其中R5哺R52相同或不同，并且表示低级烷基、簇基低级烷基、芳基或芳基低级烷基，或RSi和R52可与它们所连接的氮原子一起形成化咯烧环、赃晚环、吗嘟环或任选取代的赃嗦环；R6和R7相同或不同，并且表示氨、面素或低级烷基；当R5是由式(A)表示的基团时，RSi和R6可一起形成=亚甲基，或R52和R7可一起形成=亚甲基；环A表示任选取代的芳环或任选取代的杂芳环；V表示O或SiRiVi,其中，Ri哺Ri哺同或不同，并且表示氨或低级烷基；W表示C出、CO或S(O)P;Z表示0或NR9，其中R9表示氨或烷基；m和n相同或不同，并且表示0或1;W及P表示1或2。【文档编号】G01N31/00GK105917234SQ201580004511【公开日】2016年8月31日【申请日】2015年1月16日【发明人】永泽秀子,平山祐【申请人】梅托珍尼克斯株式会社