一种血管紧张素受体拮抗剂和nep抑制剂的复合物中杂质的分离方法

文档序号:10568642阅读:353来源:国知局
一种血管紧张素受体拮抗剂和nep抑制剂的复合物中杂质的分离方法
【专利摘要】本发明提供了一种血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制剂的复合物中杂质的分离方法,包括:采用高效液相色谱法对血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制剂的药物组合物进行杂质分离;所述高效液相色谱法中的流动相包括水相和有机相;所述水相包括磷酸盐缓冲液、三氟乙酸溶液或甲酸溶液;所述有机相包括有机混合物或乙腈,所述有机混合物包括乙腈和甲醇;所述水相和有机相的体积比为(45%~65%):(55%~35%)。本发明采用高效液相色谱法进行杂质分离,在高效液相色谱过程中选用的流动相包括特定成分的水相和有机相,采用这种流动相能够有效地分离出血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制剂的复合物中的多种杂质。
【专利说明】
一种血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制剂的复合物中杂质 的分离方法
技术领域
[0001] 本发明涉及血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制剂的复合物技术领域,尤其涉及一 种血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制剂的复合物中杂质的分离方法。
【背景技术】
[0002] 血管紧张素受体阻断剂(ARBs,血管紧张素 II拮抗剂)能够通过阻止血管紧张 素 II与其在血管壁上的受体结合,从而导致血压降低。由于能够抑制ATI受体,所以此 类拮抗剂可以用于抗高血压,或者用于治疗充血性心衰以及其它适应症。中性内肽酶(EC 3. 4. 24. 11 ;脑啡肽酶;atriopeptidase ;NEP)为含锌的金属蛋白酶,它能够裂解各种疏水 残基的氨基端上的肽底物,NEP抑制剂(中性内肽酶抑制剂,NEPi)能够降低ANP的血浆 水平,因而能够促尿钠排泄和具有利尿作用。血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制剂复合物 ([3- ((1S,3R) -1-联苯-4-基甲基-3-乙氧基羰基-1- 丁基氨甲酰基)丙酸-(S) -3' -甲 基-2'_(戊酰基{2"_(四唑-5-基)联苯-4'-基甲基}氨基)丁酸]三钠半五水合物) 是一种具有双重作用的复合物,具有式I所示的结构:
[0004] 血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制剂复合物具有广泛的临床推广价值。
[0005] 由于血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制剂的复合物药物产品从合成起始物料到 终产品,期间每一过程都可能产生杂质,如生产过程中可能带入起始原料、试剂、中间体和 副产物等杂质,这些杂质对产品质量产生很大影响。因此,为了保证药物的安全有效,对药 物中各个杂质的分离具有重要意义。
[0006] 目前,还未见关于血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制剂复合物中杂质分离的相关 报道。

【发明内容】

[0007] 有鉴于此,本发明的目的在于提供一种血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制剂复合 物中杂质的分离方法,本发明提供的方法能够有效的分离血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑 制剂复合物中的多种杂质。
[0008] 本发明提供了一种血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制剂的复合物中杂质的分离 方法,包括:
[0009] 采用高效液相色谱法对血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制剂的药物组合物进行 杂质分离;
[0010] 所述高效液相色谱法中的流动相包括水相和有机相;
[0011] 所述水相包括磷酸盐缓冲液、三氟乙酸溶液或甲酸溶液;
[0012] 所述有机相包括有机混合物或乙腈,所述有机混合物包括乙腈和甲醇;
[0013] 所述水相和有机相的体积比为(45%~65% ) : (55%~35% )。
[0014] 优选的,所述磷酸盐缓冲液的摩尔浓度为25mmol/L~45mmol/L。
[0015] 优选的,所述三氟乙酸溶液的体积浓度为0. 05%~0. 15%。
[0016] 优选的,所述甲酸溶液的体积浓度为0.05%~0.15%。
[0017] 优选的,所述有机混合物中的乙腈和甲醇的体积比为(50~60) : (50~40)。
[0018] 优选的,所述高效液相色谱法中的水相和有机相的体积比为(50%~60% ): (50%~40% )。
[0019] 优选的,所述高效液相色谱法中的流动相流速为0. 5mL/min~1. 5mL/min。
[0020] 优选的,所述高效液相色谱法中的柱温为25°C~45°C。
[0021] 优选的,所述高效液相色谱法中的色谱柱填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶或八烷 基硅烷键合硅胶。
[0022] 优选的,所述高效液相色谱法中的检测波长为240nm~260nm。
[0023] 本发明提供的血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制剂的复合物中杂质的分离方法 采用高效液相色谱法进行杂质分离,在高效液相色谱过程中选用的流动相包括特定成分的 水相和有机相,采用这种流动相能够有效地分离出血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制剂的 复合物中的多种杂质。实验结果表明,采用本发明提供的杂质分离方法得到的血管紧张素 受体拮抗剂和NEP抑制剂复合物纯品中单种杂质的质量含量< 0. 1 %。
[0024] 此外,本发明提供的血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制剂的复合物中杂质的分离 方法工艺简单、重现性好,这种分离方法准确可靠。
【附图说明】
[0025] 为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案,下面将对实施例或现 有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图仅仅是本 发明的实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据 提供的附图获得其他的附图。
[0026] 图1为本发明实施例1提供的血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制剂的复合物的制 备工艺的流程图;
[0027] 图2为本发明实施例1制备得到的血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制剂的复合物 的核磁共振谱图;
[0028] 图3为本发明实施例2提供的方法对血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制剂的复合 物中杂质进行分离后得到的色谱图;
[0029] 图4为本发明实施例3提供的方法对血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制剂的复合 物中杂质进行分离后得到的色谱图;
[0030] 图5为本发明实施例4提供的方法对血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制剂的复合 物中杂质进行分离后得到的色谱图;
[0031] 图6为本发明比较例1提供的方法对血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制剂的复合 物中杂质进行分离后得到的色谱图。
【具体实施方式】
[0032] 下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施 例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通 技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范 围。
[0033] 本发明提供了一种血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制剂的复合物中杂质的分离 方法,包括:
[0034] 采用高效液相色谱法对血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制剂的药物组合物进行 杂质分离;
[0035] 所述高效液相色谱法中的流动相包括水相和有机相;
[0036] 所述水相包括磷酸盐缓冲液、三氟乙酸溶液或甲酸溶液;
[0037] 所述有机相包括有机混合物或乙腈,所述有机混合物包括乙腈和甲醇;
[0038] 所述水相和有机相的体积比为(45 %~65 % ) : (55 %~35 % )。
[0039] 本发明采用高效液相色谱法将血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制剂的复合物进 行杂质分离。在本发明中,所述血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制剂的复合物为[3_((1S, 3R)-1-联苯-4-基甲基-3-乙氧基羰基-1- 丁基氨甲酰基)丙酸_(S)-3' -甲基-2'-(戊 酰基{2"_(四唑-5-基)联苯-4' -基甲基}氨基)丁酸]三钠半五水合物,具有式I所 示的结构:
[0041] 本发明对所述血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制剂的复合物的来源没有特殊的 限制,可由市场购买获得,也可按本领域技术人员熟知的方法制备得到,如可按照申请号为 200680001733. 0的中国专利"血管紧张素受体拮抗剂和NEP的抑制剂的药物组合产品"所 公开的方法制备得到。在本发明的实施例中,所述血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制剂复 合物的制备方法为:
[0042] 将具有式1所示结构的化合物、缬沙坦和氢氧化钠进行反应,得到血管紧张素受 体拮抗剂和NEP抑制剂的复合物:
[0043]
[0044] 在本发明的实施例中,所述式1所示结构的化合物、缬沙坦和氢氧化钠反应的温 度为20°C~30°C。在本发明的实施例中,所述式1所示结构的化合物、缬沙坦和氢氧化钠 反应的时间为l〇h。在本发明的实施例中,所述式1所示结构的化合物、缬沙坦和氢氧化钠 的摩尔比为1:1:3。在本发明的实施例中,所述式1所示结构的化合物的制备方法为:
[0045] 将具有式2所示结构的化合物和盐酸进行反应,得到具有式1所示结构的化合 物:
[0046]
[0047] 在本发明的实施例中,所述式2所示结构的化合物和盐酸反应的温度为20°C~ 30°C。在本发明的实施例中,所述式2所示结构的化合物和盐酸反应的时间为2h。在本发 明的实施例中,所述式2所示结构的化合物和盐酸的摩尔比比为1:3。在本发明的实施例 中,所述式2所示结构的化合物的制备方法为:
[0048] 将具有式3所示结构的化合物和氯化钙进行反应,得到具有式2所示结构的化合
[0050] 在本发明的实施例中,所述式3所示结构的化合物和氯化钙反应的温度为60°C~ 物:
[0049] 70°C。在本发明的实施例中,所述式3所示结构的化合物和氯化钙反应的时间为2h。在本 发明的实施例中,所述式3所示结构的化合物和氯化钙的摩尔比为1:1。在本发明的实施例 中,所述式3所示结构的化合物的制备方法为:
[0051] 将具有式4所示结构的化合物和氢氧化钠在水中进行反应,得到式4所示结构的 化合物:
[0052]
[0053] 在本发明的实施例中,所述式4所示结构的化合物和氢氧化钠反应的温度为 20°C~30°C。在本发明的实施例中,所述式4所示结构的化合物和氢氧化钠反应的时间为 lh。在本发明的实施例中,所述式4所示结构的化合物和氢氧化钠的摩尔比为1:2。本发明 对式4所示结构的化合物的来源没有特殊的限制,可由市场购买获得,也可按照本领域技 术人员熟知的方法制备得到。
[0054] 在本发明的实施例中,所述血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制剂的复合物中的杂 质为式a~式〇中的一种或几种:
[0055]

[0057] 在本发明中,所述高效液相色谱法以液体为流动相,采用高压输液系统,将具有不 同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相栗入装有固定相的色谱柱,在 柱内各成分被分离后,进入检测器进行检测,从而实现对试样的分离分析。
[0058] 在本发明中,所述高效液相色谱法中的流动相包括水相和有机相。在本发明的实 施例中,所述水相包括磷酸盐缓冲液、三氟乙酸溶液或甲酸溶液。在本发明的实施例中,所 述磷酸盐缓冲液的摩尔浓度为25mmol/L~45mmol/L ;在其他的实施例中,所述磷酸盐缓 冲液的摩尔浓度为30mmol/L~40mmol/L ;在另外的实施例中,所述磷酸盐缓冲液的摩尔浓 度为32mmol/L~38mmol/L ;在另外的实施例中,所述磷酸盐缓冲液的摩尔浓度为34mmol/ L~36mmol/L ;在另外的实施例中,所述磷酸盐缓冲液的摩尔浓度为35mmol/L。
[0059] 在本发明的实施例中,所述三氟乙酸溶液的体积浓度为0. 05%~0. 15% ;在其他 的实施例中,所述三氟乙酸溶液的体积浓度为〇. 08 %~0. 12 %;在另外的实施例中,所述三 氟乙酸溶液的体积浓度为0. 1 %。在本发明的实施例中,所述三氟乙酸溶液为三氟乙酸的水 溶液。
[0060] 在本发明的实施例中,所述甲酸溶液的体积浓度为0. 05%~0. 15% ;在其他的实 施例中,所述甲酸溶液的体积浓度为〇. 08 %~0. 12 %;在另外的实施例中,所述甲酸溶液的 体积浓度为〇. 1%。在本发明的实施例中,所述甲酸溶液为甲酸的水溶液。
[0061] 在本发明中,所述有机相包括有机混合物或乙腈,所述有机混合物包括乙腈和甲 醇。在本发明的实施例中,所述有机混合物中的乙腈和甲醇的体积比为(50~60) : (50~ 40);在其他的实施例中,所述有机混合物中的乙腈和甲醇的体积比为(52~58) :(48~ 42);在另外的实施例中,所述有机混合物中的乙腈和甲醇的体积比为(54~56) :(46~ 44);在另外的实施例中,所述有机混合物中的乙腈和甲醇的体积比为55 :45。
[0062] 在本发明的实施例中,所述高效液相色谱法中的水相和有机相的初始体积比为 (45%~65% ) : (55%~35% );在其他的实施例中,所述高效液相色谱法中的水相和有机 相的初始体积比为(50%~60%) : (50%~40%);在另外的实施例中,所述高效液相色谱 法中的水相和有机相的初始体积比为(52%~58%) : (48%~42%);在另外的实施例中, 所述高效液相色谱法中的水相和有机相的初始体积比为(54%~56%) : (46%~44%); 在另外的实施例中,所述高效液相色谱法中的水相和有机相的初始体积比为50 :50。
[0063] 在本发明的实施例中,所述高效液相色谱法中的流动相流速为0. 5mL/min~ 1. 5mL/min ;在其他的实施例中,所述高效液相色谱法中的流动相流速为0. 8mL/min~ 1. 2mL/min ;在另外的实施例中,所述高效液相色谱法中的流动相流速为lmL/min。
[0064] 在本发明的实施例中,可以采用梯度洗脱的方法使流动相通过色谱柱,所述梯度 洗脱的方法具体为:
[0065] 在0~35min,水相在流动相中的体积含量由45 %~55 %降低到5 %~15 %,有机 相在流动相中的体积含量有45 %~55 %增加到85 %~95% ;
[0066] 在35min~45min,水相在流动相中的体积含量保持5 %~15 %,有机相在流动相 中的体积含量保持85 %~95 %。
[0067] 在其他的实施例中,所述梯度洗脱的方法具体为:
[0068] 在0~35min,水相在流动相中的体积含量由48 %~52 %降低到8 %~12 %,有机 相在流动相中的体积含量有48 %~52 %增加到88 %~92% ;
[0069] 在35min~45min,水相在流动相中的体积含量保持8 %~12 %,有机相在流动相 中的体积含量保持88 %~92 %。
[0070] 在另外的实施例中,所述梯度洗脱的方法具体为:
[0071 ] 在0~35min,水相在流动相中的体积含量由50 %降低到10 %,有机相在流动相中 的体积含量有50 %增加到90% ;
[0072] 在35min~45min,水相在流动相中的体积含量保持10 %,有机相在流动相中的体 积含量保持90 %。
[0073] 在本发明的实施例中,所述高效液相色谱法中的柱温为25°C~45°C ;在其他的实 施例中,所述高效液相色谱法中的柱温为30°C~40°C;在另外的实施例中,所述高效液相色 谱法中的柱温为35 °C。
[0074] 在本发明的实施例中,所述高效液相色谱法中的色谱柱填充剂为十八烷基硅烷键 合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶;在其他的实施例中,所述高效液相色谱法中的色谱柱填充 剂为十八烷基硅烷键合硅胶。
[0075] 在本发明的实施例中,所述高效液相色谱法中的检测波长为240nm~260nm ;在其 他的实施例中,所述高效液相色谱法中的检测波长为245nm~255nm ;在另外的实施例中, 所述高效液相色谱法中的检测波长为250nm。
[0076] 在本发明的实施例中,所述血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制剂的复合物中杂质 的分离方法为:
[0077] 采用高效液相色谱法对血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制剂的药物组合物进行 杂质分离;
[0078] 所述高效液相色谱法中的流动相包括摩尔浓度为35mmol/L的磷酸盐缓冲液和体 积比为55 :45的乙腈和甲醇的混合液;
[0079] 所述高效液相色谱法中磷酸盐缓冲液和乙腈和甲醇的混合液的初始体积比为50 : 50 ;
[0080] 所述高效液相色谱法中的流动相流速为lmL/min ;
[0081] 所述高效液相色谱法中的柱温为35°C ;
[0082] 所述高效液相色谱法中色谱柱填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶;
[0083] 所述高效液相色谱法中的检测波长为250nm ;
[0084] 采用梯度洗脱的方法使流动相通过色谱柱,所述梯度洗脱的方法具体为:
[0085] 在0~35min,水相在流动相中的体积含量由50 %降低到10 %,有机相在流动相中 的体积含量有50 %增加到90% ;
[0086] 在35min~45min,水相在流动相中的体积含量保持10 %,有机相在流动相中的体 积含量保持90 %。
[0087] 采用本发明提供的方法对血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制剂的复合物进行杂 质分离,采用高效液相色谱方法,测试分离后得到的血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制剂 的复合物纯品中的杂质含量;检测结果为,本发明提供的杂质分离方法得到的血管紧张素 受体拮抗剂和NEP抑制剂的复合物纯品中单种杂质的质量含量< 0. 1%,本发明提供的血 管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制剂的复合物中杂质分离的方法具有较好的效果。
[0088] 按照《中国药典》2015年版第四部通则0512高效液相色谱方法,测试本发明提供 的血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制剂的复合物中杂质分离的方法的重现性,通过统计杂 质保留时间重现性和峰面积重现性结果可知,本发明提供的血管紧张素受体拮抗剂和NEP 抑制剂的复合物中杂质分离的方法具有较好的重现性,方法准确可靠。
[0089] 实施例1
[0090] 按照图1所示的流程图制备血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制剂的复合物,图1 为本发明实施例1提供的血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制剂的复合物的制备工艺的流程 图:
[0091 ] 具有式4所示结构的化合物为市售产品。
[0092] 将10g的具有式4所示结构的化合物和1. 9g的氢氧化钠在水中在20~30°C下进 行1小时的反应,得到具有式3所示结构的化合物;
[0093] 将10g的具有式3所示结构的化合物和2. 6g的氯化钙在60~70°C下进行2小时 的反应,得到具有式2所示结构的化合物;
[0094] 将15g的具有式2所示结构的化合物和52g的1N盐酸在20~30°C下进行2小时 的反应,得到具有式1所示结构的化合物;
[0095] 将10g的具有式1所示结构的化合物、10. 6g的缬沙坦和2. 9g的氢氧化钠在 20-30°C下进行10小时的反应,得到血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制剂的复合物。
[0096] 按照《中国药典》2015年版第四部通则0441核磁共振波谱方法对本发明实施例1 制备得到的血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制剂的复合物进行结构检测,检测结果如图2 所示,图2为本发明实施例1制备得到的血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制剂的复合物的 核磁共振谱图,由图2可知,本发明实施例1制备得到的血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制 剂的复合物具有式I所示的结构。
[0097] 实施例2
[0098] 采用高效液相色谱法对本发明实施例1制备得到的血管紧张素受体拮抗剂和NEP 抑制剂的复合物进行杂质分离,所述高效液相色谱法中的色谱柱填充剂为十八烷基硅烷键 合硅胶,流动相包括摩尔浓度为35mmol/L的磷酸盐缓冲液(水相)和体积比为55 :45的 乙腈和甲醇的混合液(有机相),磷酸盐缓冲液和乙腈和甲醇的混合液的初始体积比为50 : 50,流动相的流速为lmL/min,柱温为35°C,检测波长为250nm ;采用梯度洗脱的方法使流动 相通过色谱柱,所述梯度洗脱的方法具体为:在0~35min,水相在流动相中的体积含量由 50 %降低到10 %,有机相在流动相中的体积含量有50 %增加到90 %;在35min~45min,水 相在流动相中的体积含量保持10 %,有机相在流动相中的体积含量保持90 %。
[0099] 本发明实施例2对血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制剂的复合物进行杂质分离后 得到的色谱图如图3所示,图3为本发明实施例2提供的方法对血管紧张素受体拮抗剂和 NEP抑制剂的复合物中杂质进行分离后得到的色谱图,由图3可知,本发明实施例2提供的 方法分离了血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制剂的复合物中的LC-Z09杂质(式h所示结构 化合物)、LC-01杂质(式〇所示结构的化合物)、LC-Z01杂质(式a所示结构的化合物)、 LC-Z17杂质(式m所示结构的化合物)、LC-Z02 (式b所示结构的化合物)、LC-Z03 (式c 所示结构的化合物)、LC-Z18 (式n所示结构的化合物)、LC-Z15杂质(式k所示结构的化 合物)、LC-Z04杂质(式d所示结构的化合物)、LC-Z12杂质(式i所示结构的化合物)、 LC-Z06杂质(式f所示结构的化合物)、LC-Z14 (式j所示结构的化合物)、LC-Z08杂质 (式g所示结构的化合物)、LC-Z16杂质(式1所示结构的化合物)、LC-Z05杂质(式e所 示结构的化合物)。
[0100] 按照上述技术方案所述的方法,测试分离后得到的血管紧张素受体拮抗剂和NEP 抑制剂的复合物纯品中的杂质含量和收率;检测结果为,本发明实施例2提供的杂质分离 方法得到的血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制剂的复合物纯品中单种杂质的质量含量均 小于0. 1%。
[0101] 按照上述技术方案所述的方法,测试本发明提供的血管紧张素受体拮抗剂和NEP 抑制剂的复合物中杂质分离的方法的重现性,测试结果如表1和表2所示,表1为本发明实 施例2提供的方法杂质保留时间测试结果,表2为本发明实施例2提供的方法杂质峰面积 的测试结果。
[0102] 表1本发明实施例2提供的方法杂质保留时间测试结果
[0103]
[0104] 表2本发明实施例2提供的方法杂质峰面积的测试结果
[0107] 注:表1和表2中,a~〇为相关杂质(式a~式〇所示结构的杂质);LC_03和 LC-2为主峰;SS为系统适用性溶液
[0108] 由表1和表2可知,本发明实施例2提供的血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制剂 的复合物中杂质分离的方法具有较好的重现性,方法准确可靠。
[0109] 实施例3
[0110] 采用高效液相色谱法对本发明实施例1制备得到的血管紧张素受体拮抗剂和NEP 抑制剂的复合物进行杂质分离,所述高效液相色谱法中的色谱柱填充剂为十八烷基硅烷键 合硅胶,流动相包括质量浓度为0. 1 %的三氟乙酸水溶液(水相)和质量比为50 :50的乙 腈和甲醇的混合液(有机相),三氟乙酸水溶液和乙腈和甲醇的混合液的初始体积比为55 : 45,流动相的流速为0. 8mL/min,柱温为25°C,检测波长为250nm ;采用梯度洗脱的方法使流 动相通过色谱柱,所述梯度洗脱的方法具体为:在0~35min,水相在流动相中的体积含量 由55%降低到5%,有机相在流动相中的体积含量有45%增加到95% ;在35min~45min, 水相在流动相中的体积含量保持5 %,有机相在流动相中的体积含量保持95 %。
[0111] 本发明实施例3对血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制剂的复合物进行杂质分离后 得到的色谱图如图4所示,图4为本发明实施例3提供的方法对血管紧张素受体拮抗剂和 NEP抑制剂的复合物中杂质进行分离后得到的色谱图,由图4可知,本发明实施例3提供的 方法分离了血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制剂的复合物中的LC-Z09杂质(式h所示结构 化合物)、LC-01杂质(式〇所示结构的化合物)、LC-Z01杂质(式a所示结构的化合物)、 LC-Z17杂质(式m所示结构的化合物)、LC-Z02 (式b所示结构的化合物)、LC-Z03 (式c 所示结构的化合物)、LC-Z18 (式n所示结构的化合物)、LC-Z15杂质(式k所示结构的化 合物)、LC-Z04杂质(式d所示结构的化合物)、LC-Z12杂质(式i所示结构的化合物)、 LC-Z06杂质(式f所示结构的化合物)、LC-Z14 (式j所示结构的化合物)、LC-Z08杂质 (式g所示结构的化合物)、LC-Z16杂质(式1所示结构的化合物)、LC-Z05杂质(式e所 示结构的化合物)。
[0112] 按照上述技术方案所述的方法,测试分离后得到的血管紧张素受体拮抗剂和NEP 抑制剂的复合物纯品中的杂质含量和收率;检测结果为,本发明实施例3提供的杂质分离 方法得到的血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制剂的复合物纯品中单种杂质的质量含量均 小于0. 1%。
[0113] 按照上述技术方案所述的方法,测试本发明提供的血管紧张素受体拮抗剂和NEP 抑制剂的复合物中杂质分离的方法的重现性,测试结果如表3和表4所示,表3为本发明实 施例3提供的方法杂质保留时间测试结果,表4为本发明实施例3提供的方法杂质峰面积 的测试结果。
[0114] 表3本发明实施例3提供的方法杂质保留时间测试结果
[0116] 表4本发明实施例3提供的方法杂质峰面积的测试结果
[0117]
[0119] 注:a-o为相关杂质;LC-03和LC-2为主峰;SS为系统适用性溶液
[0120] 由表3和表4可知,本发明实施例3提供的血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制剂 的复合物中杂质分离的方法具有较好的重现性,方法准确可靠。
[0121] 实施例4
[0122] 采用高效液相色谱法对本发明实施例1制备得到的血管紧张素受体拮抗剂和NEP 抑制剂的复合物进行杂质分离,所述高效液相色谱法中的色谱柱填充剂为十八烷基硅烷 键合硅胶,流动相包括质量浓度为0.1%的甲酸水溶液(水相)和乙腈(流动相),甲酸 水溶液和乙腈的初始体积比为45 :55,流动相的流速为1. 2mL/min,柱温为30°C,检测波长 为250nm ;采用梯度洗脱的方法使流动相通过色谱柱,所述梯度洗脱的方法具体为:在0~ 35min,水相在流动相中的体积含量由45 %降低到15 %,有机相在流动相中的体积含量有 55%增加到85%;在351^11~451^11,水相在流动相中的体积含量保持15%,有机相在流动 相中的体积含量保持85 %。
[0123] 本发明实施例4对血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制剂的复合物进行杂质分离后 得到的色谱图如图5所示,图5为本发明实施例4提供的方法对血管紧张素受体拮抗剂和 NEP抑制剂的复合物中杂质进行分离后得到的色谱图,由图5可知,本发明实施例4提供的 方法分离了血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制剂的复合物中的LC-Z09杂质(式h所示结构 化合物)、LC-01杂质(式〇所示结构的化合物)、LC-Z01杂质(式a所示结构的化合物)、 LC-Z17杂质(式m所示结构的化合物)、LC-Z02 (式b所示结构的化合物)、LC-Z03 (式c 所示结构的化合物)、LC-Z18 (式n所示结构的化合物)、LC-Z15杂质(式k所示结构的化 合物)、LC-Z04杂质(式d所示结构的化合物)、LC-Z12杂质(式i所示结构的化合物)、 LC-Z06杂质(式f所示结构的化合物)、LC-Z14 (式j所示结构的化合物)、LC-Z08杂质 (式g所示结构的化合物)、LC-Z16杂质(式1所示结构的化合物)、LC-Z05杂质(式e所 示结构的化合物)。
[0124] 按照上述技术方案所述的方法,测试分离后得到的血管紧张素受体拮抗剂和NEP 抑制剂的复合物纯品中的杂质含量和收率;检测结果为,本发明实施例4提供的杂质分离 方法得到的血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制剂的复合物纯品中单种杂质的质量含量均 小于0. 1%。
[0125] 按照上述技术方案所述的方法,测试本发明提供的血管紧张素受体拮抗剂和NEP 抑制剂的复合物中杂质分离的方法的重现性,测试结果如表5和表6所不,表5为本发明实 施例4提供的方法杂质保留时间测试结果,表6为本发明实施例4提供的方法杂质峰面积 的测试结果。
[0126] 表5本发明实施例4提供的方法杂质保留时间测试结果
[0128] 表6本发明实施例4提供的方法杂质峰面积的测试结果
[0130] 注:a-o为相关杂质;LC-03和LC-2为主峰;SS为系统适用性溶液
[0131] 由表5和表6可知,本发明实施例5提供的血管紧张素受体诘抗剂和NEP抑制剂 的复合物中杂质分离的方法具有较好的重现性,方法准确可靠。
[0132] 比较例1
[0133] 采用高效液相色谱法对本发明实施例1制备得到的血管紧张素受体拮抗剂和NEP 抑制剂的复合物进行杂质分离,所述高效液相色谱法中的色谱柱填充剂为十八烷基硅烷键 合硅胶,流动相包括质量浓度为0. 1%的冰醋酸水溶液(水相)和乙腈(有机相),〇. 1%的 冰醋酸水溶液和乙腈的初始体积比为45 :55,流动相的流速为1. OmL/min,柱温为35°C,检 测波长为250nm ;采用梯度洗脱的方法使流动相通过色谱柱,所述梯度洗脱的方法具体为: 在0~35min,水相在流动相中的体积含量由45 %降低到10 %,有机相在流动相中的体积含 量有55 %增加到90 %;在35min~45min,水相在流动相中的体积含量保持10 %,有机相在 流动相中的体积含量保持90 %。
[0134] 本发明比较例1对血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制剂的复合物进行杂质分离后 得到的色谱图如图6所示,图6为本发明比较例1提供的方法对血管紧张素受体拮抗剂和 NEP抑制剂的复合物中杂质进行分离后得到的色谱图,由图6可知,本发明比较例1提供的 方法分离血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制剂的复合物中的杂质,杂质与主峰不能达到基 线分离,分离效果较差。
[0135] 由以上实施例可知,本发明提供了一种血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制剂的复 合物中杂质的分离方法,包括:采用高效液相色谱法对血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制 剂的药物组合物进行杂质分离;所述高效液相色谱法中的流动相包括水相和有机相;所述 水相包括磷酸盐缓冲液、三氟乙酸溶液或甲酸溶液;所述有机相包括有机混合物或乙腈, 所述有机混合物包括乙腈和甲醇;所述水相和有机相的体积比为(45%~65%) : (55%~ 35% )。本发明采用高效液相色谱法进行杂质分离,在高效液相色谱过程中选用的流动相包 括特定成分的水相和有机相,采用这种流动相能够有效地分离出血管紧张素受体拮抗剂和 NEP抑制剂的复合物中的多种杂质。
【主权项】
1. 一种血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制剂的复合物中杂质的分离方法,包括: 采用高效液相色谱法对血管紧张素受体拮抗剂和NEP抑制剂的药物组合物进行杂质 分离; 所述高效液相色谱法中的流动相包括水相和有机相; 所述水相包括磷酸盐缓冲液、三氟乙酸溶液或甲酸溶液; 所述有机相包括有机混合物或乙腈,所述有机混合物包括乙腈和甲醇; 所述水相和有机相的体积比为(45%~65% ) : (55%~35% )。2. 根据权利要求1所述的分离方法,其特征在于,所述磷酸盐缓冲液的摩尔浓度为 25mmol/L ~45mmol/L〇3. 根据权利要求1所述的分离方法,其特征在于,所述三氟乙酸溶液的体积浓度为 0· 05%~0· 15%〇4. 根据权利要求1所述的分离方法,其特征在于,所述甲酸溶液的体积浓度为 0· 05%~0· 15%〇5. 根据权利要求1所述的分离方法,其特征在于,所述有机混合物中的乙腈和甲醇的 体积比为(50~60) : (50~40)。6. 根据权利要求1所述的分离方法,其特征在于,所述高效液相色谱法中的水相和有 机相的体积比为(50%~60% ) : (50%~40% )。7. 根据权利要求1所述的分离方法,其特征在于,所述高效液相色谱法中的流动相流 速为 0· 5mT,/miη ~L 5mL/min〇8. 根据权利要求1所述的分离方法,其特征在于,所述高效液相色谱法中的柱温为 25°C~45°C。9. 根据权利要求1所述的分离方法,其特征在于,所述高效液相色谱法中的色谱柱填 充剂为十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶。10. 根据权利要求1所述的分离方法,其特征在于,所述高效液相色谱法中的检测波长 为 240nm ~260nm。
【文档编号】G01N30/02GK105929031SQ201510958419
【公开日】2016年9月7日
【申请日】2015年12月18日
【发明人】张磊, 石功名, 张小娇, 孙丹, 李俊平, 贺耘
【申请人】重庆两江药物研发中心有限公司
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