前列腺特异性抗原同源异构体化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种前列腺特异性抗原同源异构体化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法，前列腺特异性抗原同源异构体化学发光免疫检测试剂盒包括：前列腺特异性抗原同源异构体单克隆抗体包被的羧基化的磁微粒和抑制素单克隆抗体标记的化学发光标记物。这种前列腺特异性抗原同源异构体化学发光免疫检测试剂盒能够以全自动化学发光免疫分析仪为检测工具，完成前列腺特异性抗原同源异构体的检测这种前列腺特异性抗原同源异构体化学发光免疫检测试剂盒，经过实验，其检测灵敏度达到1pg/mL，相对于传统的前列腺特异性抗原同源异构体的检测方法灵敏度至少提高了10倍，这种前列腺特异性抗原同源异构体化学发光免疫检测试剂盒的检测精度较高。
【专利说明】
前列腺特异性抗原同源异构体化学发光免疫检测试剂盒及其 制备方法
技术领域
[0001] 本发明涉及体外检测领域，尤其涉及一种前列腺特异性抗原同源异构体化学发光 免疫检测试剂盒及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 前列腺癌已经成为西方世界发病率最高的肿瘤之一，据估计，每年全球新患病的 前列腺癌患者有约914,000人，因为前列腺癌而死亡的患者约为258,000人，近些年中国的 前列腺癌发病例在逐年攀升。早期发现前列腺癌对前列腺癌的治疗十分重要，目前，前列腺 癌诊断的金标准仍旧是前列腺穿刺活检。
[0003] 上世纪80年代末，人类发现了前列腺特异性抗原(Prostate-specific Antigen， PSA)是前列腺癌预测的重要标志物。然而，在多年的运用中，PSA的局限性也日益凸显，特异 度较低的缺陷导致了临床上过度穿刺、过度治疗的发生，为病人造成了心理负担，为社会造 成经济负担。因此，人们致力于寻找新的特异性肿瘤标志物用于预测前列腺癌。近年来，随 着分子生物学的飞速发展，人们发现了多种前列腺癌的肿瘤特异性标志物，部分已应用于 临床，同时随着人类基因组学的发展，人们相继发现了前列腺癌风险基因，并期待将基因检 测作为初步筛查前列腺癌高危人群的工具。
[0004]最近，一种被称为前列腺特异性抗原同源异构体(P2PSA)的PSA前体被发现，研究 证实P2PSA及其衍生指标与前列腺癌在欧洲人群中有着显著的关联，对于临床上预测前列 腺癌具有重要意义。
[0005] 目前临床检测p2PSA的常见方法有酶联免疫吸附法、放射免疫分析法、酶促化学发 光法，但这些方法都存在着一些不足之处。
[0006] 一、酶联免疫吸附法
[0007] 酶联免疫吸附法(ELISA)被广泛应用，但该方法也存在着下述的不足之处：
[0008] (1)使用12 X 8型、6 X 8型、8 X 12型或整板型96孔专用微孔板作为抗原包被用具和 反应容器，在使用时只能分成12批次、6批次、8批次或整板一次使用，无法进行独立的、单人 份的检测；
[0009] (2)定量测定所用的试剂种类较多，每一种检测试剂都要用试剂瓶来盛装，并且每 使用一种试剂时都需要更换吸液嘴来分别加注到微孔板的微孔中，不但试剂瓶种类多，加 注试剂的操作也极为繁琐；
[0010] (3)缺少对检测信息的相应标注，只能通过查看试剂盒外包装盒的标识才能了解 或知悉检测试剂的生产批号及有效期信息，而且所知悉的信息在检测过程中不受控，具有 很大的随意性；
[0011] (4)检测试剂在检测过程中处于开放的空间，容易引起各种试剂之间的交叉污染 而影响检测结果的准确性；
[0012] (5)检测过程多采用手工操作，试剂或样本的加量不很精确，操作过程极为繁琐和 复杂，容易发生操作差错，检测结果的准确度和精密度较差；
[0013] (6)在检测项目成套试剂的数量配置及使用上均为项目数X48/96人份，如果需要 检测10个项目，则试剂的配置及使用数须为10X48/96人份，如果只有一份样本需要检测10 个不同的项目，也需要配置10 X 48/96人份的试剂，存在着不够经济合理的缺点。
[0014] 二、放射免疫分析法
[0015] 放射免疫分析方法放射性污染大、加样步骤繁琐、操作复杂、操作时间长、测定结 果不稳定、试剂保存时间短、试剂盒操作自动化程度低、配套仪器价格昂贵等不足之处。
[0016] 二、化学发光法
[0017] 化学发光法按发光原理可分为直接化学发光和酶促化学发光。
[0018] 酶促化学发光主要有辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶两种，但都有一定的局 限性，辣根过氧化物酶主要缺点为:鲁米诺在没有辣根过氧化物酶存在情况下，也会被H202 氧化自身发光，本底相对较高，影响信噪比，反应动力学复杂，影响因素多，结果不够稳定， 要得到灵敏度高且平台期长的底物不容易。碱性磷酸酶主要缺点为:底物达到平台期的时 间长，底物成本高，导致检测成本高，患者负担重。
[0019] 吖啶酯作为标记物的直接化学发光相比酶促化学发光具有明细优势，主要表现 在:反应不需要催化剂，只要碱性环境即可进行，反应迅速，背景发光低，信噪比高，干扰因 素少，试剂稳定性好，可以两点定标，体系简单，激发液成本低，吖啶酯易与蛋白质联结，且 联结后光子产率不减少。
【发明内容】
[0020] 基于此，有必要提供一种检测灵敏度较高的前列腺特异性抗原同源异构体化学发 光免疫检测试剂盒及其制备方法。
[0021] 一种前列腺特异性抗原同源异构体化学发光免疫检测试剂盒，包括:前列腺特异 性抗原同源异构体单克隆抗体包被的羧基化的磁微粒和抑制素单克隆抗体标记的化学发 光标记物。
[0022] 所述前列腺特异性抗原同源异构体单克隆抗体包被的羧基化的磁微粒中，所述前 列腺特异性抗原同源异构体单克隆抗体与所述羧基化的磁微粒的比例为1:25~35。
[0023] 所述抑制素单克隆抗体标记的化学发光标记物中，所述前列腺特异性抗原同源异 构体单克隆抗体与所述化学发光标记物的比例为50:1~10。
[0024] 所述羧基化的磁微粒的粒径为0.05wii~lym。
[0025] 所述化学发光标记物为鲁米诺、异鲁米诺、三联吡啶钌或吖啶酯。
[0026] 所述的前列腺特异性抗原同源异构体化学发光免疫检测试剂盒，还包括化学发光 底物液，所述化学发光底物液包括A液和B液。
[0027] 所述A液为H202溶液，所述B液为NaOH溶液。
[0028]所述的前列腺特异性抗原同源异构体化学发光免疫检测试剂盒，还包括前列腺特 异性抗原同源异构体定标品。
[0029]所述前列腺特异性抗原同源异构体定标品为浓度分别为0pg/mL、50pg/mL、200pg/ mL、500pg/mL、1000pg/mL和1600pg/mL的前列腺特异性抗原同源异构体的溶液。
[0030] -种上述的前列腺特异性抗原同源异构体化学发光免疫检测试剂盒的制备方法， 包括如下步骤：
[0031] 取羧基化的磁微粒的悬浮液，磁分离去上清后用MES缓冲液重悬，接着加入EDC水 溶液，活化羧基化的磁微粒的表面羧基，接着加入前列腺特异性抗原同源异构体单克隆抗 体，室温下混悬2h~10h，磁分离去除上清后用Tris缓冲液重悬，得到前列腺特异性抗原同 源异构体单克隆抗体包被的羧基化的磁微粒;以及
[0032] 取前列腺特异性抗原同源异构体单克隆抗体，加入碳酸盐缓冲液后混匀，然后加 入化学发光标记物后混匀，室温下避光反应lh~2h后除杂，得到抑制素单克隆抗体标记的 化学发光标记物。
[0033] 这种前列腺特异性抗原同源异构体化学发光免疫检测试剂盒能够以全自动化学 发光免疫分析仪为检测工具，完成前列腺特异性抗原同源异构体的检测这种前列腺特异性 抗原同源异构体化学发光免疫检测试剂盒，经过实验，其检测灵敏度达到lpg/mL，相对于传 统的前列腺特异性抗原同源异构体的检测方法灵敏度至少提高了 10倍，这种前列腺特异性 抗原同源异构体化学发光免疫检测试剂盒的检测精度较高。
【附图说明】
[0034]图1为一实施方式的前列腺特异性抗原同源异构体化学发光免疫检测试剂盒的制 备方法的流程图；
[0035]图2为实施例3得到的前列腺特异性抗原同源异构体标准曲线图。
【具体实施方式】
[0036] 为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附图和具体实 施例对本发明的【具体实施方式】做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于 充分理解本发明。但是本发明能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术 人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似改进，因此本发明不受下面公开的具体实施 的限制。
[0037] -实施方式的前列腺特异性抗原同源异构体化学发光免疫检测试剂盒，包括:前 列腺特异性抗原同源异构体单克隆抗体包被的羧基化的磁微粒和抑制素单克隆抗体标记 的化学发光标记物。
[0038] 优选的，前列腺特异性抗原同源异构体单克隆抗体包被的羧基化的磁微粒中，前 列腺特异性抗原同源异构体单克隆抗体与羧基化的磁微粒的比例为1:25~35。
[0039] 优选的，抑制素单克隆抗体标记的化学发光标记物中，前列腺特异性抗原同源异 构体单克隆抗体与化学发光标记物的比例为50:1~10。
[0040]优选的，羧基化的磁微粒的粒径为0? 05wii~lym。
[0041]化学发光标记物可以为鲁米诺、异鲁米诺、三联吡啶钌或吖啶酯。其中，化学发光 标记物优选为吖啶酯。
[0042]在其他的实施例中，上述前列腺特异性抗原同源异构体化学发光免疫检测试剂盒 还包括化学发光底物液。
[0043] 化学发光底物液包括A液和B液。A液可以为H202溶液，B液可以为NaOH溶液。
[0044] 本实施例中，A液为浓度为0. lmol/L的H2〇2溶液，B液为浓度为0.25mol/L的NaOH溶 液。
[0045]在其他的实施例中，上述前列腺特异性抗原同源异构体化学发光免疫检测试剂盒 还包括前列腺特异性抗原同源异构体定标品。
[0046]前列腺特异性抗原同源异构体定标品为浓度分别为0pg/mL、50pg/mL、200pg/mL、 500pg/mL、1000pg/mL和1600pg/mL的前列腺特异性抗原同源异构体的溶液。
[0047] 具体的，前列腺特异性抗原同源异构体定标品可以采用标准品缓冲液将前列腺特 异性抗原同源异构体配制成浓度分别为0pg/mL、50pg/mL、200pg/mL、500pg/mL、1000pg/mL 和1600pg/mL的前列腺特异性抗原同源异构体的溶液。
[0048] 这种前列腺特异性抗原同源异构体化学发光免疫检测试剂盒用于前列腺特异性 抗原同源异构体检测时，利用全自动化学发光免疫分析仪对前列腺特异性抗原同源异构体 定标品进行检测，绘制标准曲线，内置于电脑软件;接着测试实际样本，根据样本发光值计 算样本浓度;最后对前列腺特异性抗原同源异构体全自动化学发光免疫分析系统进行性能 (灵敏度、线性、精密度、干扰性)的评价。
[0049] 这种前列腺特异性抗原同源异构体化学发光免疫检测试剂盒能够以全自动化学 发光免疫分析仪为检测工具，完成前列腺特异性抗原同源异构体的检测这种前列腺特异性 抗原同源异构体化学发光免疫检测试剂盒，经过实验，其检测灵敏度达到lpg/mL，相对于传 统的前列腺特异性抗原同源异构体的检测方法灵敏度至少提高了 10倍，这种前列腺特异性 抗原同源异构体化学发光免疫检测试剂盒的检测精度较高。
[0050] 此外，这种前列腺特异性抗原同源异构体化学发光免疫检测试剂盒还具有以下优 占 .
[0051] 1、选择吖啶酯作为标记材料，并应用于化学发光免疫分析系统，该发光体系为直 接化学发光，与传统的酶促化学发光相比，该反应不需要酶的参与，更加节约成本；
[0052] 2、选用吖啶酯的化学发光免疫分析系统线性范围宽，能达到lpg/mL~1000pg/mL， 而传统的前列腺特异性抗原同源异构体的检测方法的检线性范围为10pg/mL~1000pg/mL; [0053] 3、吖啶酯化学发光免疫分析系统重复性高，批内及批间差均在5%以内，这是其它 化学发光免疫分析系统难以达到的；
[0054] 4、化学发光免疫分析系统已实现样本的定量，通过内置标准曲线到测试软件，只 需测试样本就可直接得到样本的浓度值；
[0055] 5、化学发光免疫分析系统可以实现全自动化，试剂及样本的添加全有仪器完成， 操作更加简便，减少了人为的误差。
[0056] 如图1所示的上述前列腺特异性抗原同源异构体化学发光免疫检测试剂盒的制备 方法，包括如下步骤：
[0057]羧基化的磁微粒的悬浮液，磁分离去上清后用MES缓冲液重悬，接着加入EDC水溶 液，活化羧基化的磁微粒的表面羧基，接着加入前列腺特异性抗原同源异构体单克隆抗体， 室温下混悬2h~10h，磁分离去除上清后用Tris缓冲液重悬，得到前列腺特异性抗原同源异 构体单克隆抗体包被的羧基化的磁微粒。
[0058] MES(2-(N-吗啡啉）乙磺酸)缓冲液的浓度为0.02M，pH为5.5。
[0059] Tris缓冲液的浓度为0.1M并且含有2%BSA，pH为8.0。
[0060] EDC(1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亚胺)水溶液的浓度为10mg/mL~20mg/ mL，EDC与羧基化的磁微粒的比例为0.05:0.1~1。
[0061 ]优选的，前列腺特异性抗原同源异构体单克隆抗体包被的羧基化的磁微粒中，前 列腺特异性抗原同源异构体单克隆抗体与羧基化的磁微粒的比例为1:25~35。
[0062]优选的，羧基化的磁微粒的粒径为0? 05wii~lym。
[0063]取前列腺特异性抗原同源异构体单克隆抗体，加入碳酸盐缓冲液后混匀，然后加 入化学发光标记物后混匀，室温下避光反应lh~2h后除杂，得到抑制素单克隆抗体标记的 化学发光标记物。
[0064] 碳酸盐缓冲液浓度为0 ? 1M，pH为9 ? 0~9 ? 5，
[0065] 除杂的操作为离心脱盐柱脱盐，具体操作为:先分别用纯净水及TBS缓冲液(40mM Tris-HCl，0.5%BSA，1 %NaCl，pH 8.0)处理离心脱盐柱，最后加入得到的前列腺特异性抗 原同源异构体单克隆抗体包被的羧基化的磁微粒的溶液，最后收集离心管中的液体。
[0066] 优选的，抑制素单克隆抗体标记的化学发光标记物中，前列腺特异性抗原同源异 构体单克隆抗体与化学发光标记物的比例为50:1~10。
[0067]化学发光标记物可以为鲁米诺、异鲁米诺、三联吡啶钌或吖啶酯。其中，化学发光 标记物优选为吖啶酯。
[0068] 得到的前列腺特异性抗原同源异构体单克隆抗体包被的羧基化的磁微粒和抑制 素单克隆抗体标记的化学发光标记物组合即可得到上述前列腺特异性抗原同源异构体化 学发光免疫检测试剂盒。
[0069] 这种前列腺特异性抗原同源异构体化学发光免疫检测试剂盒在使用时，还需要化 学发光底物液和前列腺特异性抗原同源异构体定标品。
[0070] 化学发光底物液和前列腺特异性抗原同源异构体定标品可以自行配制得到。
[0071] 化学发光底物液包括A液和B液。A液可以为H2〇2溶液，B液可以为NaOH溶液。
[0072] 本实施例中，A液为浓度为0. lmol/L的H2〇2溶液，B液为浓度为0.25mol/L的NaOH溶 液。
[0073]具体的，前列腺特异性抗原同源异构体定标品可以采用标准品缓冲液将前列腺特 异性抗原同源异构体配制成浓度分别为0pg/mL、50pg/mL、200pg/mL、500pg/mL、1000pg/mL 和1600pg/mL的前列腺特异性抗原同源异构体的溶液。
[0074] 这种前列腺特异性抗原同源异构体化学发光免疫检测试剂盒的制备方法简单方 便，制得的前列腺特异性抗原同源异构体化学发光免疫检测试剂盒的检测灵敏度较高，具 有良好的应用前景。
[0075] 以下为具体实施例。
[0076] 实施例1:前列腺特异性抗原同源异构体化学发光免疫检测试剂盒的制备
[0077] (1)前列腺特异性抗原同源异构体单克隆抗体包被的羧基化的磁微粒的制备：
[0078] 取含有50mg粒径为0.05iim~lym的羧基化的磁微粒(MagnaBind?，货号21353)悬浮 液，磁分离去上清，用0 ? 02M，pH为5 ? 5MES缓冲液重悬，加入lmL新配置的10mg/mL的EDC水溶 液，活化磁珠表面羧基，加入4mg前列腺特异性抗原同源异构体单克隆抗体(biorbyt，货号 orb48780)，室温下混悬6h，磁分离，去除上清，用含2 %BSA的0.1M，pH为8.0的Tris缓冲液重 悬到lmg/mL，得到前列腺特异性抗原同源异构体单克隆抗体包被的羧基化的磁微粒，每瓶 5mL分装保存于4°C备用。
[0079] (2)抑制素单克隆抗体标记的吖啶酯的制备：
[0080] 取50yL浓度为25mg/mL的前列腺特异性抗原同源异构体单克隆抗体，加入150yL浓 度为0. lM、pH为9.0~9.5的碳酸盐缓冲液，混匀，然后加入1.5yL浓度为5mg/mL的吖啶酯溶 液混匀，室温下避光反应，1.5h后取出，用2mL的zeba离心脱盐柱脱盐处理，脱盐过程中首先 分别用纯净水及TBS缓冲液进行处理，最后加入得到的抑制素单克隆抗体标记的吖啶酯溶 液，收集离心管中的液体至保存管得到抑制素单克隆抗体标记的吖啶酯，每瓶5mL分装保存 于4°C备用。
[0081] (3)前列腺特异性抗原同源异构体定标品的制备：
[0082] 用标准品缓冲液(40mM Tris-HCl，0.5%BSA，l%NaCl，pH 8.0)将前列腺特异性抗 原同源异构体配置成浓度为〇?〖/11^、50卩〖/111]^、200卩〖/111]^、500卩〖/111]^、1000卩〖/111]^和1600卩区/ mL，每瓶0.5mL分装冻干，4 °C保存备用。
[0083]实施例2:前列腺特异性抗原同源异构体化学发光免疫检测方法 [0084]以全自动化学发光免疫分析仪(YHL0,货号iFlash3000)为检测工具，方法学模式 为双抗体夹心法，即仪器依次加入50yL的样品、50yL的前列腺特异性抗原同源异构体单克 隆抗体包被的羧基化的磁微粒以及50yL的前列腺特异性抗原同源异构体处理液，反应 20min后，再加50此的前列腺特异性抗原同源异构体包被的吖啶酯，反应20min后，进行磁分 离，仪器将反应混合物送入暗室，依次加入发光底物A液(H 2〇2)及B液(NaOH)进行发光反应， 最后记录发光值。
[0085] 实施例3:前列腺特异性抗原同源异构体化学发光免疫检测试剂盒性能评价
[0086] 采用实施例2中的方法对前列腺特异性抗原同源异构体定标品进行检测，得到绘 制标准曲线如图2所示。
[0087] 接着对接着测试实际样本，根据样本发光值计算样本浓度。
[0088]灵敏度的检测：
[0089]参照CLSI EP17-A文件推荐实验方案，计算前列腺特异性抗原同源异构体化学发 光免疫检测试剂盒的灵敏度，求得的灵敏度为lpg/mL。
[0090]线性的检测：
[0091 ]对浓度为 5(^8/111]^、20(^8/111]^、50(^8/111]^、100(^8/111]^、160(^8/1111^标准品做线性分 析，计算线性相关系数，r = 0.9996,另外，该试剂盒对前列腺特异性抗原同源异构体样品检 测的线性范围为lpg/ml~1000pg/mL。
[0092] 精密度测定：
[0093]取浓度为10pg/mL及100pg/mL两个前列腺特异性抗原同源异构体样品，每个样本 每个浓度各做3个平行，用三批试剂盒进行检测，计算试剂盒批内及批间差，结果表明该试 剂盒批内及批间差均小于5%。
[0094] 干扰性实验：
[0095] 取混合血清分别添加干扰物包括:结合胆红素、游离胆红素、血红蛋白、抗坏血酸、 甘油酯，添加比例按照1:20进行，分别测定混合血清及添加了各种干扰物后混合血清的测 值，计算二者之间的偏差，以±10%为可接受范围。结果表明，干扰性均达到NCCLS的文件标 准，可用于临床实验室前列腺特异性抗原同源异构体状况的准确评估。
[0096] 实施例4、前列腺特异性抗原同源异构体化学发光免疫检测试剂盒的对比实验
[0097] 分别用化学发光检测方法和传统的酶联免疫吸附法对浓度为50pg/mL、200pg/mL、 500pg/mL、1000pg/mL、1600pg/mL的前列腺特异性抗原同源异构体样品做检测，两种方法检 测灵敏度相比，数据如下表所示：
[0100] 由上表可以看出，化学发光检测方法的灵敏度较酶联免疫吸附法提高了约10倍。
[0101] 以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并 不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员 来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保 护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
【主权项】
1. 一种前列腺特异性抗原同源异构体化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，包括:前 列腺特异性抗原同源异构体单克隆抗体包被的羧基化的磁微粒和抑制素单克隆抗体标记 的化学发光标记物。2. 根据权利要求1所述的前列腺特异性抗原同源异构体化学发光免疫检测试剂盒，其 特征在于，所述前列腺特异性抗原同源异构体单克隆抗体包被的羧基化的磁微粒中，所述 前列腺特异性抗原同源异构体单克隆抗体与所述羧基化的磁微粒的比例为1:25~35。3. 根据权利要求1所述的前列腺特异性抗原同源异构体化学发光免疫检测试剂盒，其 特征在于，所述抑制素单克隆抗体标记的化学发光标记物中，所述前列腺特异性抗原同源 异构体单克隆抗体与所述化学发光标记物的比例为50:1~10。4. 根据权利要求1所述的前列腺特异性抗原同源异构体化学发光免疫检测试剂盒，其 特征在于，所述羧基化的磁微粒的粒径为0.05μηι~Ιμπι。5. 根据权利要求1所述的前列腺特异性抗原同源异构体化学发光免疫检测试剂盒，其 特征在于，所述化学发光标记物为鲁米诺、异鲁米诺、三联吡啶钌或吖啶酯。6. 根据权利要求1所述的前列腺特异性抗原同源异构体化学发光免疫检测试剂盒，其 特征在于，还包括化学发光底物液，所述化学发光底物液包括A液和B液。7. 根据权利要求6所述的前列腺特异性抗原同源异构体化学发光免疫检测试剂盒，其 特征在于，所述A液为H2O 2溶液，所述B液为NaOH溶液。8. 根据权利要求1所述的前列腺特异性抗原同源异构体化学发光免疫检测试剂盒，其 特征在于，还包括前列腺特异性抗原同源异构体定标品。9. 根据权利要求8所述的前列腺特异性抗原同源异构体化学发光免疫检测试剂盒，其 特征在于，所述前列腺特异性抗原同源异构体定标品为浓度分别为0pg/mL、50pg/mL、 200pg/mL、500pg/mL、1000pg/mL和1600pg/mL的前列腺特异性抗原同源异构体的溶液。10. -种根据权利要求1~9中任一项所述的前列腺特异性抗原同源异构体化学发光免 疫检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤： 取羧基化的磁微粒的悬浮液，磁分离去上清后用MES缓冲液重悬，接着加入EDC水溶液， 活化羧基化的磁微粒的表面羧基，接着加入前列腺特异性抗原同源异构体单克隆抗体，室 温下混悬2h~10h，磁分离去除上清后用Tris缓冲液重悬，得到前列腺特异性抗原同源异构 体单克隆抗体包被的羧基化的磁微粒;以及 取前列腺特异性抗原同源异构体单克隆抗体，加入碳酸盐缓冲液后混匀，然后加入化 学发光标记物后混匀，室温下避光反应Ih~2h后除杂，得到抑制素单克隆抗体标记的化学 发光标记物。
【文档编号】G01N33/577GK105929151SQ201610505968
【公开日】2016年9月7日
【申请日】2016年6月30日
【发明人】段桂开, 钱纯亘, 夏福臻, 王刚, 祝亮
【申请人】深圳市亚辉龙生物科技股份有限公司