一种心肌肌钙蛋白i检测试剂盒的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种心肌肌钙蛋白I检测试剂盒，包括质量比为3:1的试剂1和试剂2，试剂1的组分为MOPSO缓冲液，氯化镁，脂肪醇聚氧乙烯醚，PC?300；试剂2的组分为MOPSO缓冲液，曲拉通?308，EMULGEN?A90，牛血清白蛋白，PC?300；TnI抗体包被胶乳颗粒。限定抗体所包被的胶乳微球颗粒粒径为60?65nm，在提高检测灵敏度的前提下，检测试剂的检测准确性也得到相应的保证，有效改善了胶乳增强免疫比浊法的检测缺陷，提高检测结果的接受程度；对缓冲液、表面活性剂等进行优化选择，提高了检测试剂体系的稳定性，使采用的检测试剂检测灵敏度高，精密度和抗干扰性明显增强。
【专利说明】
-种心肌肌巧蛋白I检测试剂盒
技术领域
[0001] 本发明设及一种屯、肌肌巧蛋白I检测试剂盒，属于体外检测技术领域。
【背景技术】
[0002] 屯、肌肌巧蛋白Kcardiac troponin I，c化I)是屯、肌肌巧蛋白复合物的亚单位之 一，具有较高的屯、肌特异性及敏感度，已越来越多地用于屯、肌梗死、屯、绞痛的诊断和鉴别诊 断。屯、肌肌巧蛋白I测定开始于20世纪80年代中期，最早使用的是多克隆抗体检测的放射免 疫比浊法，随后相继出现了运用单克隆抗体检测的各种不同的免疫法。
[0003] 目前检测的方法有肌巧蛋白I的测定主要有免疫学方法，检测方法则包括胶乳增 强免疫比浊法，夹屯、免疫放射法、夹屯、酶联免疫法，化学发光W及电化学发光等相关方法， 其中普通夹屯、免疫放射法、夹屯、酶联免疫法两种方法成本相对较低，操作相对较简单，但是 若试验中所用的抗体为多克隆抗体，会交叉反应，且分析灵敏度较低。而化学发光和电化学 发光运两种方法，准确度较好且反应的分析灵敏度高，能够快速准确的检测出结果，但是运 两种方法需要特定的化学发光仪器，并且对实验室操作人员的要求相对较高，因此在临床 中无法真正的普及使用，只有一些相对较大的实验室才具备相应的条件。后期逐渐研发和 使用的胶乳增强免疫比浊法操作简单，成本较低，能够较好的结合全自动生化分析仪器进 行操作，方便快捷，但是同样具有分析灵敏度低的缺陷，在临床使用过程中针对于低浓度的 临床样本，容易出现零值，甚至出现负值，运给临床使用者带来很大不方便。
【发明内容】
[0004] 为了解决W上胶乳增强免疫比浊法检测屯、肌肌巧蛋白I中存在的灵敏度低的问 题，本发明提供了一种灵敏度高、检测更准确的检测屯、肌肌巧蛋白I的检测方法。
[0005] 本发明是通过W下步骤得到的： 本发明提供的肌巧蛋白I的检测试剂盒，包括体积比为3:1的试剂1和试剂2 试剂1的组分为： MOPSO 缓冲液 50mmol/L， 氯化儀 0. lmmol/L-〇.5mmol/L， 脂肪醇聚氧乙締酸 lml/l-3ml/L， PC-300 0.5ml/L-l ml/l; 2)试剂2的组分为： MOPSO 缓冲液 50mmol/L， 曲拉通-308 ml/L， EMULGEN-A90 lml/L-5 ml/L, 牛血清白蛋白（BSA) lg/L-5 g/L， PC-300 0.5ml/L-l ml/l; TnI抗体包被胶乳颗粒 15g/L。 所述的肌巧蛋白I检测试剂，所述化I抗体包被胶乳颗粒为羊抗人单抗体化I抗体，抗体 所包被的胶乳微球颗粒粒径为60-65nm。
[0006] 所述的肌巧蛋白I检测试剂来检测肌巧蛋白I的检测方法，使用全自动生化分析仪 利用终点法进行测定，检测主波长为505nm。
[0007] 本发明的有益效果： 1、 本发明中限定抗体所包被的胶乳微球颗粒粒径为60-65nm，在提高检测灵敏度(达到 0.040-0.050)的前提下，检测试剂的检测准确性也得到相应的保证，偏差小于5%，有效改善 了胶乳增强免疫比浊法的检测缺陷，提高检测结果的接受程度； 2、 本发明对缓冲液、表面活性剂等进行优化选择，提高了检测试剂体系的稳定性，储存 13个月后，使采用的检测试剂检测灵敏度高，精密度和抗干扰性明显增强，低至0.0化g/L仍 能灵敏的检测。
【具体实施方式】
[0008] 下面结合实施例对本发明作进一步的说明。
[0009] 实施例1 试剂1中含有 MOPSO 缓冲液 50mmol/L， 氯化儀 0.1 mmol/L， 脂肪醇聚氧乙締酸 Iml/L 防腐剂 0.5ml/l; 2)试剂2的组分为： MOPSO 缓冲液 50mmol/L， 曲拉通-308 Iml/L， EMULGEN-A90 Iml/L， 牛血清白蛋白（BSA) Ig/L， 防腐剂 0.5ml/l; TnI抗体包被胶乳颗粒 Ig/L。
[0010] 实施例2 试剂1中含有 咪挫缓冲液 lOOmmol/L， 氯化儀 0.5mmol/L， 脂肪醇聚氧乙締酸 3ml/L， 防腐剂 1 ml/l; 2)试剂2的组分为： MOPSO 缓冲液 50mmol/L， 曲拉通-308 5 ml/L， EMULGEN-A90 3ml/L， 牛血清白蛋白（BSA) 5 g/L， 防腐剂 1 ml/l; TnI抗体包被胶乳颗粒 3g/L。
[00川实施例3 试剂1中含有 MOPSO 缓冲液 50mmol/L， 氯化儀 0.3mmol/L， 脂肪醇聚氧乙締酸 2ml/L 防腐剂 0.8/1; 2)试剂2的组分为： MOPSO 缓冲液 50mmol/L， 曲拉通-308 4 ml/L， EMULGEN-A90 5ml/L， 牛血清白蛋白（BSA) 3 g/L， 防腐剂 0.8 ml/l; TnI抗体包被胶乳颗粒 5g/L。
[0012] 对比例1 同实施例2相比，试剂2中的EMULGEN-A90替换为脂肪醇聚氧乙締酸，其余同实施例2相 同。 对比例2 同实施例2相比，试剂2中抗体所包被的胶乳微球颗粒粒径为50-55nm。
[001引对比例3 同实施例2相比，试剂2中抗体所包被的胶乳微球颗粒粒径为80-85nm。
[0014] 准确度试验 分别配制下表中理论浓度的7个肌巧蛋白I样本，分别利用实施例1、2、3、对比例1、2、3 的试剂进行检测，每个浓度水平各样本分别测定=次，分别取其平均值。其具体数据如下表 1： 表1 7个浓度准确度检测结果
从W上数据可W看出，实施例1、2、3、对比例I的检测结果与理论浓度没有显著性的差 异，说明胶乳微球颗粒粒径为60-65nm时，检测结果准确度较高，偏差小于5%，而低比例2、3 的检测结果同理论浓度差异显著，特别是在浓度较低时，说明胶乳微球颗粒粒径为50-55nm 或80-85nm时，对肌巧蛋白I的检测准确度较差。
[0015] 灵敏度实验 用已知浓度的样本测试试剂，记录在试剂规定参数下产生的吸光度改变即为吸光度差 值(AA)，换算为浓度5ng/mL的吸光度差值，结果如下表2: 贾输駐的、》1吿
从表纳容可W看出，实施例1、2、巧P对比例1灵敏度较好，对比例2、3灵敏度较差，说明 乳胶颗粒的粒径分布，对灵敏度影响较大，而实施例1、2、3和对比例1中选择的乳胶颗粒的 粒径分布，使试剂盒具有更高的灵敏度。
[0016] 稳定性评价 将实施例1、2、3及对比例1、2、3的试剂在2~8°C避光冷藏储存13个月，然后配制10个已 知不同浓度的肌巧蛋白I样本(如表3)，然后将分别使用实施例1、2、3和对比例1、2、3的试剂 检测肌巧蛋白，检测结果如下表3: 表3 10个不同低浓度梯度的肌巧蛋白四种方法检测结果对比情况
从W上数据可W看出，经过13个月的储存，实施例1、2、3的试剂对肌巧蛋白I浓度低至 0.01 yg/L仍能灵敏的检测，而对比例1的试剂在0.化g/L时已不能准确检测，对比例2、3在 O.Uig/L时已不能准确检测，说明本发明的试剂相对于对比例1、2、3具有更高的稳定性。
[0017] 上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受实施例的限 审IJ，其它任何未背离本发明的精神实质与原理下所做的改变、修饰、组合、替代、简化均应为 等效替换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种检测心肌肌钙蛋白I的检测试剂，其特征在于包括体积比为3:1的试剂1和试剂 2， 试剂1中的组分为： MOPSO 缓冲液 50mmol/L， 氣化儀 0.1 mmol /T-Q. 5mmol/L, 脂肪醇聚氧乙稀醚 lml/L-3ml/L， EMULGEN-A90 lml/L-5 ml/L， PC-300 0.5ml/L-l ml/L； 试剂2中的组分为： MOPSO 缓冲液 50mmol/L， 曲拉通-308 lml/L-5 ml/L， 牛血清白蛋白 lg/L-5 g/L， PC-300 0.5ml/L-l ml/L； TnI抗体包被胶乳颗粒 l-5g/L。2. 根据权利要求1所述的肌钙蛋白I检测试剂，其特征在于TnI抗体包被胶乳颗粒为羊 抗人单抗体Tn I抗体。3. 根据权利要求1所述的肌钙蛋白I检测试剂，其特征在于TnI抗体所包被的胶乳微球 颗粒粒径为60_65nm。4. 根据权利要求1-3中任一项所述的肌钙蛋白I检测试剂，其特征在于使用全自动生化 分析仪利用终点法进行测定，检测主波长为505nm。5. 根据权利要求1-3中任一项所述的肌钙蛋白I检测试剂，其特征在于 试剂1中的组分为： MOPSO 缓冲液 50mmol/L， 氯化镁 O.lmmol/L， 脂肪醇聚氧乙烯醚 lml/L 防腐剂 0.5ml/L; 试剂2中的组分为： MOPSO 缓冲液 50mmol/L， 曲拉通-308 lml/L， EMULGEN-A90 lml/L， 牛血清白蛋白 lg/L， 防腐剂 0.5ml/L; TnI抗体包被胶乳颗粒 lg/L。6. 根据权利要求1-3中任一项所述的肌钙蛋白I检测试剂，其特征在于 试剂1中的组分为： 咪唑缓冲液 100mmol/L， 氯化镁 0.5mmol/L， 脂肪醇聚氧乙烯醚 3ml/L， 防腐剂 I ml/L; 2)试剂2的组分为： MOPSO 缓冲液 50mmol/L， 曲拉通-308 5 ml/L， EMULGEN-A90 3ml/L, 牛血清白蛋白 5 g/L， 防腐剂 I ml/L; TnI抗体包被胶乳颗粒 3g/L。7.根据权利要求1-3中任一项所述的肌钙蛋白I检测试剂，其特征在于 试剂1中的组分为： MOPSO 缓冲液 50mmol/L， 氯化镁 0.3mmol/L， 脂肪醇聚氧乙烯醚 2ml/L 防腐剂 0.8/L; 2)试剂2的组分为： MOPSO 缓冲液 50mmol/L， 曲拉通-308 4 ml/L， EMULGEN-A90 5ml/L, 牛血清白蛋白 3 g/L， 防腐剂 0.8 ml/L; TnI抗体包被胶乳颗粒 5g/L。
【文档编号】G01N33/546GK105954523SQ201610553929
【公开日】2016年9月21日
【申请日】2016年7月14日
【发明人】王保全, 靳峰, 法凯, 孙立
【申请人】宏葵生物（中国）有限公司