一种中药中赭曲霉毒素的液质检测方法
【专利摘要】本发明公开了一种中药中赭曲霉毒素的液质检测方法，包括粉碎、溶解、提纯和液质检测步骤。与现有技术相比，本发明具有以下优点：(1)本发明所述的中药中赭曲霉毒素的检测方法能够准确测定中药材中的赭曲霉毒素含量，从而避免含有真菌毒素的中药流向市场；(2)本发明所述方法可操作性强且检测成本低廉。
【专利说明】
一种中药中赭曲霉毒素的液质检测方法
技术领域
[0001] 本发明属于分析化学领域，涉及真菌毒素的检测，尤其涉及一种中药中赭曲霉毒 素的液质检测方法。
【背景技术】
[0002] 真菌广泛分布于自然界，种类繁多，数量庞大，与人类关系密切，有些真菌污染食 品或在农作物上生长繁殖，使食品发霉变质或使农作物发生病害，造成巨大的经济损失，有 些霉菌在各种基质中生长时，还会产生有毒的代谢产物-真菌毒素。目前已知有200多种不 同的真菌毒素，研究较为深入的主要集中在十几种对人类危害较大的真菌毒素上，它们一 般同时具有毒性强和污染频率高的特点。其中包括黄曲霉毒素、赭曲霉毒素、腐马菌素、展 青霉素、玉米赤霉烯酮、串珠镰刀菌素、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、橘霉素、单端孢霉烯族毒素 等。在已发现的真菌毒素家族中，根据其重要性及危害性排序，0ΤΑ被认为是仅次于黄曲霉 毒素而列的第二位。
[0003] 肾脏是0ΤΑ毒性作用的主要靶器官，他可导致急性和慢性的肾脏损害。有研究表 明。0ΤΑ对多种动物的肾脏均有毒性。据1997年在克罗地亚爆发流行的资料和保加利亚一项 长达5年的流行病学研究结果显示，发现不仅流行区0ΤΑ阳性食物检出率高于非流行区，而 且流行区地方性肾病的发病率明显高于非流行区。因此，0ΤΑ被认为可能是巴尔干地方性肾 病的主要致病因素之一。另外，0ΤΑ还具有肝脏毒性、免疫毒性，以及致畸、致癌和致突变等 作用。
[0004] 现有技术中，常采用薄层色谱的方法来测定谷物、药品中的赭曲霉毒素，此外，也 有采用免疫亲和层析的方法。上述方法中薄层色谱的方法操作简便、成本低廉，但是检测的 结果不够准确，无法清楚确定赭曲霉毒素的精确含量。而免疫亲和层析方法以抗原抗体免 疫学反应为基础，该方法具有高度特异性、灵敏性和快速简便等优点，但0ΤΑ属于半抗原，抗 原性弱，因而检测结果难判断。
【发明内容】
[0005] 本发明解决的技术问题是:为了克服上述现有技术的缺陷，获得一种结果准确，可 操作性好，价格低廉的中药中赭曲霉毒素检测方法，本发明提供了一种中药中赭曲霉毒素 的液质检测方法。
[0006] 技术方案:一种中药中赭曲霉毒素的液质检测方法，包含以下步骤：
[0007] (1)将中药样品加入粉碎机中，功率为1.1~2. OkW/h、转速为2500~3200转/分钟、 每小时投入饮片量为2~4.5kg，粉碎研磨至粉状，粉末粒径为200~400目；
[0008] (2)将步骤（1)获得的粉末与甲醇溶液按1~3:10混合，其中甲醇溶液为甲醇与水 按体积比7~9:1混合，再向其中添加2~4g的氯化钠，超声提取20~35分钟；将提取液通过 净化柱，收集滤液；
[0009] (3)将步骤（2)获得的滤液在55~65 °C条件下油浴旋转蒸干，用乙酸溶解定容至 0.5~2mL，超声溶解3~6分钟后离心取上清液；
[0010] ⑷将步骤⑶获得的上清液采用LC-MS检测，其中流动相采用乙腈与甲酸的混合 溶液，二者的体积比为乙腈：甲酸=1~4.5:2~7。
[0011] 优选的，步骤（1)中将中药样品加入粉碎机中，功率为1.7kW/h、转速为2950转/分 钟、每小时投入饮片量为3.5kg，粉碎研磨至粉状，粉末粒径为350目；
[0012] 优选的，步骤(2)中将步骤（1)获得的粉末与甲醇溶液按3:10混合，其中甲醇溶液 为甲醇与水按体积比8:1混合，再向其中添加3g的氯化钠，超声提取30分钟;将提取液通过 净化柱，收集滤液。
[0013] 优选的，步骤(3)中将步骤(2)获得的滤液在61°C条件下油浴旋转蒸干，用乙酸溶 解定容至1.4mL，超声溶解4分钟后离心取上清液。
[0014] 优选的，步骤(4)中将步骤(3)获得的上清液采用LC-MS检测，其中流动相采用乙腈 与甲酸的混合溶液，二者的体积比为乙腈：甲酸=3:5。
[0015] 有益效果：（1)本发明所述的中药中赭曲霉毒素的检测方法能够准确测定中药材 中的赭曲霉毒素含量，从而避免含有真菌毒素的中药流向市场；（2)本发明所述方法可操作 性强且检测成本低廉。
【具体实施方式】
[0016] 实施例1
[0017] -种中药中赭曲霉毒素的液质检测方法，包含以下步骤：
[0018] (1)将中药样品加入粉碎机中，功率为l.lkW/h、转速为2500转/分钟、每小时投入 饮片量为2kg，粉碎研磨至粉状，粉末粒径为200目；
[0019] (2)将步骤(1)获得的粉末与甲醇溶液按1:10混合，其中甲醇溶液为甲醇与水按体 积比7:1混合，再向其中添加2g的氯化钠，超声提取20分钟；将提取液通过净化柱，收集滤 液；
[0020] (3)将步骤(2)获得的滤液在55 °C条件下油浴旋转蒸干，用乙酸溶解定容至0.5mL， 超声溶解3分钟后离心取上清液；
[0021] (4)将步骤(3)获得的上清液采用LC-MS检测，其中流动相采用乙腈与甲酸的混合 溶液，二者的体积比为乙腈：甲酸= 1:2。
[0022] 实施例2
[0023] -种中药中赭曲霉毒素的液质检测方法，包含以下步骤：
[0024] (1)将中药样品加入粉碎机中，功率为1.7kW/h、转速为2950转/分钟、每小时投入 饮片量为3.5kg，粉碎研磨至粉状，粉末粒径为350目；
[0025] (2)将步骤(1)获得的粉末与甲醇溶液按3:10混合，其中甲醇溶液为甲醇与水按体 积比8:1混合，再向其中添加3g的氯化钠，超声提取30分钟；将提取液通过净化柱，收集滤 液；
[0026] (3)将步骤(2)获得的滤液在61°C条件下油浴旋转蒸干，用乙酸溶解定容至1.4mL， 超声溶解4分钟后离心取上清液；
[0027] (4)将步骤(3)获得的上清液采用LC-MS检测，其中流动相采用乙腈与甲酸的混合 溶液，二者的体积比为乙腈：甲酸=3:5。
[0028] 实施例3
[0029] -种中药中赭曲霉毒素的液质检测方法，包含以下步骤：
[0030] (1)将中药样品加入粉碎机中，功率为2. OkW/h、转速为3200转/分钟、每小时投入 饮片量为4.5kg，粉碎研磨至粉状，粉末粒径为400目；
[0031] (2)将步骤(1)获得的粉末与甲醇溶液按3:10混合，其中甲醇溶液为甲醇与水按体 积比9:1混合，再向其中添加4g的氯化钠，超声提取35分钟；将提取液通过净化柱，收集滤 液；
[0032] (3)将步骤(2)获得的滤液在65°C条件下油浴旋转蒸干，用乙酸溶解定容至2mL，超 声溶解6分钟后离心取上清液；
[0033] (4)将步骤(3)获得的上清液采用LC-MS检测，其中流动相采用乙腈与甲酸的混合 溶液，二者的体积比为乙腈：甲酸=4.5:7。
[0034] 采用实施例1~3所述的中药中赭曲霉毒素的液质检测方法对中药材中的赭曲霉 毒素进行检测，结果如下表所示：
[0035]
【主权项】
1. 一种中药中赭曲霉毒素的液质检测方法，其特征在于，包含以下步骤： (1) 将中药样品加入粉碎机中，功率为1.1~2. OkW/h、转速为2500~3200转/分钟、每小 时投入饮片量为2~4.5kg，粉碎研磨至粉状，粉末粒径为200~400目； (2) 将步骤（1)获得的粉末与甲醇溶液按1~3:10混合，其中甲醇溶液为甲醇与水按体 积比7~9:1混合，再向其中添加2~4g的氯化钠，超声提取20~35分钟；将提取液通过净化 柱，收集滤液； (3) 将步骤（2)获得的滤液在55~65°C条件下油浴旋转蒸干，用乙酸溶解定容至0.5~ 2mL，超声溶解3~6分钟后离心取上清液； (4) 将步骤(3)获得的上清液采用LC-MS检测，其中流动相采用乙腈与甲酸的混合溶液， 二者的体积比为乙腈：甲酸=1~4.5:2~7。2. 根据权利要求1所述的一种中药中赭曲霉毒素的液质检测方法，其特征在于，步骤 (1) 中将中药样品加入粉碎机中，功率为1.7kW/h、转速为2950转/分钟、每小时投入饮片量 为3.5kg，粉碎研磨至粉状，粉末粒径为350目。3. 根据权利要求1所述的一种中药中赭曲霉毒素的液质检测方法，其特征在于，步骤 (2) 中将步骤（1)获得的粉末与甲醇溶液按3:10混合，其中甲醇溶液为甲醇与水按体积比8: 1混合，再向其中添加3g的氯化钠，超声提取30分钟;将提取液通过净化柱，收集滤液。4. 根据权利要求1所述的一种中药中赭曲霉毒素的液质检测方法，其特征在于，步骤 (3) 中将步骤(2)获得的滤液在61°C条件下油浴旋转蒸干，用乙酸溶解定容至1.4mL，超声溶 解4分钟后离心取上清液。5. 根据权利要求1所述的一种中药中赭曲霉毒素的液质检测方法，其特征在于，步骤 (4) 中将步骤(3)获得的上清液采用LC-MS检测，其中流动相采用乙腈与甲酸的混合溶液，二 者的体积比为乙腈：甲酸= 3:5。
【文档编号】G01N30/02GK105974010SQ201610272619
【公开日】2016年9月28日
【申请日】2016年4月28日
【发明人】李建华
【申请人】苏州市天灵中药饮片有限公司