快速测定瓜蚜对乙酰甲胺磷敏感性诊断试剂盒及使用方法
【专利摘要】本发明涉及快速测定瓜蚜对乙酰甲胺磷敏感性诊断试剂盒，包括指形管、药膜和填充物，所述的指形管为一端封闭的玻璃管，所述药膜为均匀附着在指形管内表面的乙酰甲胺磷药膜，所述填充物可拆卸的填充在指形管的开口端。本发明用于田间瓜蚜对乙酰甲胺磷敏感性的快速诊断，缩短了诊断时间，结果准确可靠，避免在抗性种群使用乙酰甲胺磷造成的增加成本、防治无效、污染环境等不良后果。
【专利说明】
快速测定瓜蚜对乙酰甲胺磷敏感性诊断试剂盒及使用方法
技术领域
[0001] 本发明涉及害虫敏感性快速检测技术领域，具体地说，涉及快速测定瓜蚜对乙酰 甲胺磷敏感性诊断试剂盒及使用方法。
【背景技术】
[0002] 瓜姐(Aphis gossypii Glover)又叫棉姐，主要为害瓜类蔬菜，以成虫及若虫在叶 背和嫩茎上吸食植物汁液。在我国除西藏未见报道外，各地均有发生。瓜苗嫩叶及生长点被 害后，叶片卷缩，瓜苗萎蔫，甚至枯死。老叶受害，提前枯落，缩短结瓜期，造成减产。寄主包 括黄瓜、南瓜、西萌芦、西瓜、豆类、茄子、菠菜、葱、洋葱等蔬菜及棉、烟草、黄秋葵、甜瓜、哈 密瓜、食用仙人掌、菜用番木瓜、甜菜等农作物。
[0003] 目前生产上防治瓜蚜主要采用化学防治，确定瓜蚜对常用药剂的敏感性，正确选 择防治药剂，才能有效控制瓜蚜为害。传统的浸叶法、点滴法等生测方法费时费力，不能及 时快速指导选药用药。
[0004] 近年来，诊断剂量法作为一种简便的研究病虫害敏感性的方法逐渐引起研究人员 的关注。张润祥、范仁俊、封云涛等人采用诊断剂量法开发了快速测定评估黄蚜对联苯菊酯 和乙酰甲胺磷敏感性的诊断试剂盒，王少丽、张友军等人开发了快速检测杀虫剂对烟粉虱 毒力的试剂盒，高希武、刘晓岚等人开发了检测中黑盲蝽、绿盲蝽、禾谷缢管蚜、麦长管蚜抗 药性的方法。但使用诊断剂量法应用于瓜蚜对农药的敏感性检测方法尚未见报道。
【发明内容】
[0005] 本发明提供快速测定瓜蚜对乙酰甲胺磷敏感性诊断试剂盒及使用方法，所要解决 的技术问题是如何快速测定瓜蚜对乙酰甲胺磷的敏感性水平，在田间快速判断瓜蚜是否已 经对乙酰甲胺磷产生抗药性，进而决定是否使用乙酰甲胺磷进行防治。
[0006] 本发明解决上述技术问题的技术方案如下:本发明提供快速测定瓜蚜对乙酰甲胺 磷敏感性诊断试剂盒，包括指形管、药膜和填充物，所述的指形管为一端封闭的玻璃管，所 述药膜为均匀附着在指形管内表面的乙酰甲胺磷药膜，所述填充物可拆卸的填充在指形管 的开口端。
[0007] 本发明的有益效果是:本发明用于田间瓜蚜对乙酰甲胺磷敏感性的快速诊断，缩 短了诊断时间，结果准确可靠，避免在抗性种群使用乙酰甲胺磷造成的增加成本、防治无 效、污染环境等不良后果。
[0008]进一步，所述指形管为圆筒形管，所述指形管的长度为8~10cm，内径为2.5~3cm〇
[0009] 采用上述进一步技术方案的有益效果在于:这一尺寸范围内的指形管既能满足一 定的瓜蚜在其内生存活动，从而保证实验中瓜蚜的死亡是由于药膜的作用;这一尺寸的大 小与手掌相适应，便于手握。
[0010] 进一步，所述药膜通过将乙酰甲胺磷丙酮溶液均匀滚施在指形管内壁，所述药膜 中乙酰甲胺磷的含量为21 · 8yg/cm2 〇
[0011] 采用上述进一步技术方案的有益效果在于:上述数据是发明人经过大量的实验得 出的，能够有效实现田间瓜蚜对乙酰甲胺磷敏感性的快速诊断的最佳值。
[0012] 进一步，所述填充物为棉塞，所述棉塞为消毒处理的脱脂棉球，所述棉塞的大小与 所述指形管的管口大小相匹配。
[0013] 采用上述进一步技术方案的有益效果在于:消毒处理过的脱脂棉球能够避免杂菌 或者其他污染对实验数据准确性的影响，棉塞的大小与所述指形管的管口大小相匹配能够 保证将瓜蚜放入指形管并塞上棉塞后，实验过程中瓜蚜不会从棉塞一端爬出。
[0014] 本发明还涉及快速测定瓜蚜对乙酰甲胺磷敏感性诊断试剂盒的使用方法，使用步 骤如下：
[0015] S1.将所述的诊断试剂盒带到待防治瓜蚜的田块，打开填充物，将30头瓜蚜轻扫入 指形管，塞上填充物，放置3h;
[0016] S2.检查步骤S1得到的指形管内的活虫数，并根据瓜蚜的存活率判定该种群对乙 酰甲胺磷的敏感性。
[0017] 进一步，所述步骤S2中判定法则为：
[0018] 若指形管内的活虫数为0,表明受试种群对乙酰甲胺磷敏感，应使用乙酰甲胺磷进 行防治;若指形管内的活虫数不为〇,则表明该种群对乙酰甲胺磷产生了抗性，应改用其他 敏感度高的药剂进行防治。
【附图说明】
[0019] 图1为本发明的快速测定瓜蚜对乙酰甲胺磷敏感性诊断试剂盒的结构示意图。
[0020] 附图中，各标号所代表的部件列表如下：
[0021] 1、指形管，2、药膜。
【具体实施方式】
[0022]以下结合附图对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并 非用于限定本发明的范围。
[0023] 实施例1
[0024] 如图1所示，本发明的快速测定瓜蚜对乙酰甲胺磷敏感性诊断试剂盒，包括指形管 1、药膜2和填充物，所述的指形管1为一端封闭的玻璃管，所述药膜2为均匀附着在指形管1 内表面的乙酰甲胺磷药膜，所述填充物可拆卸的填充在指形管1的开口端。所述指形管1为 圆筒形管，所述指形管1的长度为8~10cm，内径为2.5~3cm。所述药膜2通过将乙酰甲胺磷 丙酮溶液均匀滚施在指形管1内壁，所述药膜2中乙酰甲胺磷的含量为21.8yg/cm 2。
[0025] 优选的，所述填充物为棉塞，所述棉塞为消毒处理的脱脂棉球，所述棉塞的大小与 所述指形管1的管口大小相匹配。
[0026] 本发明的快速测定瓜蚜对乙酰甲胺磷敏感性诊断试剂盒的使用方法，使用步骤如 下：S1.将所述的诊断试剂盒带到待防治瓜蚜的田块，打开填充物，将30头瓜蚜轻扫入指形 管1，塞上填充物，放置3h;S2.检查步骤S1得到的指形管1内的活虫数，并根据瓜蚜的存活率 判定该种群对乙酰甲胺磷的敏感性。
[0027] 优选的，所述步骤S2中判定法则为:若指形管1内的活虫数为0,表明受试种群对乙 酰甲胺磷敏感，应使用乙酰甲胺磷进行防治;若指形管1内的活虫数不为0,则表明该种群对 乙酰甲胺磷产生了抗性，应改用其他敏感度高的药剂进行防治。
[0028] 药膜浓度是经过以下一系列试验最终确定的。
[0029] 分别从河北省廊坊市有害生物防治重点野外科学观测试验站(LFS)和中国农业科 学院植物保护研究所温室(ZBS)采集黄瓜瓜蚜，采用叶片药膜法和指形管药膜法分别测定 两个种群对乙酰甲胺磷的敏感性，测定用量如下表所示：
[0030] 表1 LFS种群和ZBS种群敏感性测定
[0031]
LUU&」 很聒头验至初步的苺刀测疋铦呆，对LKS柙辟近仃J乙既中妝憐敏惣品糸选育。用 单头蚜虫饲养繁殖大量后代，采用叶片药膜法选用低于初始品系LC5Q的乙酰甲胺磷浓度作 为单头繁殖种群的筛选药剂浓度，维持死亡率60~80%左右，经过筛选后得到SS品系。如表 3所示，采用指形管药膜法测定SS品系对LFS种群的乙酰甲胺磷敏感性变异指数为1.16。 [0034]表2对乙酰甲胺磷敏感品系选育(叶片药膜法）
[0035]
[0036] 表3对乙酰甲胺磷敏感性变异指数测定(指形管药膜法，3h)
[0037]
[0038] 通过多次采用指形管药膜法测定SS品系对乙酰甲胺磷的敏感性，确定其对乙酰甲 胺磷的LC5Q值、LC 9Q值和LC99值。
[0039] 表4 SS种群敏感性测定(指形管药膜法，3h)
[0040]
[0041] 选择^：9〇、2\^：9()、^：99、2\^： 99作为备选诊断剂量，使用1^种群和33品系进行比 较验证，最终确定2 X LC99即2000mg/L为诊断剂量，根据所使用的指形管(长9cm，内径3cm)内 表面积(91.8cm 2)计算，药膜剂量为21.8yg/cm2。
[0042] 表5配方选药试剂盒诊断剂量确定
[0043]
[0044] 实施例2
[0045] 将乙酰甲胺磷原药用丙酮溶解，稀释成2000mg/L的乙酰甲胺磷丙酮溶液，取lml药 液加入到长9cm，内径3cm的指形管中，充分滚动，使药液均匀的附着在指形管内壁，形成药 膜，待管中丙酮全部挥发，将棉塞塞住管口，快速诊断试剂盒即制作完毕。
[0046]将制作好的诊断试剂盒分别带到北京马连洼和河北廊坊瓜蚜发生严重的黄瓜田， 在田间摘取蚜虫分布较多的叶片，用小毛笔轻轻将蚜虫扫入诊断试剂盒中，每管30头，每个 种群3管，3h后检查瓜蚜死亡率。如表6所示，诊断结果为：2个种群的死亡率均为70%和 80%，表明北京马连洼种群和河北廊坊种群的瓜蚜对乙酰甲胺磷已经产生抗性，应更换药 剂进行防治。
[0047]表6诊断试剂盒田间应用结果
[0048]
[(KMV」 以上所还1 乂为本友明的牧佳买施例，开个用以限制本友明，凡在本友明的精柙和 原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 快速测定瓜蚜对乙酰甲胺磷敏感性诊断试剂盒，其特征在于，包括指形管（1)、药膜 (2)和填充物，所述的指形管（1)为一端封闭的玻璃管，所述药膜(2)为均匀附着在指形管 (1)内表面的乙酰甲胺磷药膜，所述填充物可拆卸的填充在指形管（1)的开口端。2. 根据权利要求1所述的快速测定瓜蚜对乙酰甲胺磷敏感性诊断试剂盒，其特征在于， 所述指形管（1)为圆筒形管，所述指形管（1)的长度为8~10cm，内径为2.5~3cm〇3. 根据权利要求1所述的快速测定瓜蚜对乙酰甲胺磷敏感性诊断试剂盒，其特征在于， 所述药膜(2)通过将乙酰甲胺磷丙酮溶液均匀滚施在指形管（1)内壁形成，所述药膜(2)中 乙酰甲胺磷的含量为21 · 8yg/cm2 〇4. 根据权利要求1所述的快速测定瓜蚜对乙酰甲胺磷敏感性诊断试剂盒，其特征在于， 所述填充物为棉塞，所述棉塞为消毒处理的脱脂棉球，所述棉塞的大小与所述指形管（1)的 管口大小相匹配。5. 快速测定瓜蚜对乙酰甲胺磷敏感性诊断试剂盒的使用方法，其特征在于，使用步骤 如下：51. 将权利要求1至4任一项所述的诊断试剂盒带到待防治瓜蚜的田块，打开填充物，将 30头瓜蚜轻扫入指形管（1 )，塞上填充物，放置3h;52. 检查步骤S1得到的指形管（1)内的活虫数，并根据瓜蚜的存活率判定该种群对乙酰 甲胺磷的敏感性。6. 根据权利要求5所述的快速测定瓜蚜对乙酰甲胺磷敏感性诊断试剂盒的使用方法， 其特征在于，所述步骤S2中判定法则为： 若指形管（1)内的活虫数为〇,表明受试种群对乙酰甲胺磷敏感，应使用乙酰甲胺磷进 行防治;若指形管（1)内的活虫数不为〇,则表明该种群对乙酰甲胺磷产生了抗性，应改用其 他敏感度高的药剂进行防治。
【文档编号】G01N33/00GK105974067SQ201610444798
【公开日】2016年9月28日
【申请日】2016年6月20日
【发明人】张燕宁, 蒋红云, 张兰, 毛连纲, 冯磊
【申请人】中国农业科学院植物保护研究所