草酸艾司西酞普兰片剂组合物和质控方法

文档序号:10652198阅读:971来源:国知局
草酸艾司西酞普兰片剂组合物和质控方法
【专利摘要】本发明涉及草酸艾司西酞普兰片剂组合物和质控方法。具体地说,本发明一方面包括对草酸艾司西酞普兰片剂组合物进行质量控制的方法,该方法包括对组合物中的西酞普兰R?异构体杂质进行限度检查,还包括对组合物中的西酞普兰R?异构体杂质进行含量测定,还包括对组合物中的有关物质进行检查。进一步的,本发明还涉及一种草酸艾司西酞普兰片剂组合物,其中包含治疗有效量的草酸艾司西酞普兰,以及硬脂酸镁,和任选的药学可接受的载体。本发明方法呈现如说明书所述优异的技术效果。
【专利说明】
草酸艾司西酞普兰片剂组合物和质控方法
技术领域
[0001] 本发明属医药技术领域,涉及一种可用于治疗抑郁障碍,治疗伴有或不伴有广场 恐怖症的惊恐障碍的药物草酸艾司西酞普兰片剂组合物,本发明还涉及该草酸艾司西酞普 兰片剂组合物的质量控制方法。本发明方法具有优异的性能。
【背景技术】
[0002] 草酸艾司西酞普兰(Escitalopram Oxalate),其化学名:S( + )-l_(3-二甲氨丙 基)-1-(4-氟代苯基)-1,3-二氢异苯并呋喃-5-腈草酸盐,分子式:〇2〇出疋吣0 · C2H2O4,分子 量:414.43,其化学结构式为:
[0004] 在本发明中,艾司西酞普兰亦可称为S-西酞普兰或S-异构体或西酞普兰S-异构 体,相对应的,其中的R-西酞普兰或R-异构体或西酞普兰R-异构体则作为杂质在本发明一 些实施方案中是需要检测其在组合物中的量的。
[0005] 草酸艾司西酞普兰是一种口服的具有选择性的5-羟色胺再摄取抑制剂(SSRI ),临 床上用于治疗抑郁障碍,治疗伴有或不伴有广场恐怖症的惊恐障碍。草酸艾司西酞普兰是 消旋西酞普兰(citalopram)的S-异构体(单异构体)。由Forest Laboratories和丹麦 Lundbeck联合开发,草酸艾司西酞普兰片(商品名:Lexapro 于2002年在美国上市,并于 2005年在中国上市销售。
[0006] 原研灵北公司专利EP1414435公开了 一种制备平均粒径在40μπι~200μπι的草酸艾 司西酞普兰的制备方法,专利中公开得到该范围的颗粒度是使该产品能适合直接压片或粉 末直接灌胶囊,并且公开了含该粒径范围的草酸艾司西酞普兰采用直接压片法制备草酸艾 司西酞普兰片的方法。但该粒径范围必须通过特殊的结晶过程获得的。
[0007]目前市售的草酸艾司西酞普兰片最小规格为5mg,片重为65mg,根据2010版药典附 录XE规定当每片标示量不大于25mg或主药含量不大于每片重量25%者,需检查含量均匀 度,以保证产品质量均一和安全。同时65mg片重在实现商业化生产时,存在的主要问题是对 压片设备的要求非常高,这是由于小片子重量差异控制困难,并且使用的小冲头强度低,生 产过程中易断裂,这些都导致了商业化生产的困难,增加了草酸艾司西酞普兰片的生产成 本。
[0008]另外W003/011278A1公开了使用草酸艾司西酞普兰大晶体颗粒时引起的一个问 题,即,这些大的活性成分颗粒不再可能如所期望的那样均匀一致的分布在片剂或要被压 制以形成片剂的物质中,对草酸艾司西酞普兰的生物利用度具有不利的影响。当使用大结 晶颗粒形式的草酸艾司西酞普兰时,会出现如下情况,活性成分溶出被延迟,因此活性成分 的释放被延迟,这导致活性成分在体内吸收更慢,因此导致药理学效力开始更晚。
[0009] 此外,草酸艾司西酞普兰的固体制剂例如其片剂通常采用常规方法来制备。例如, 中国专利申请号201410724777.2公开了一种含有草酸艾司西酞普兰片及其制备方法。该发 明的草酸艾司西酞普兰片使用羟丙基纤维素作为粘合剂,使用中值粒径彡20μπι的草酸艾司 西酞普兰,制备得到的草酸艾司西酞普兰片片面美观,质量稳定。该发明还提供所述该口服 片剂的制备方法,工艺简单,适合商业化生产。又例如,中国专利申请号201510732767.8公 开了草酸艾司西酞普兰泡腾片配方与制备工艺,草酸艾司西酞普兰泡腾片采用由主药、崩 解剂和芳香剂等组成配方,酸性崩解剂和碱性崩解剂分别制粒的压片工艺。采用此配方和 工艺易于操作、产品质量可控、服用口感良好、成本低。再例如,中国专利申请号 200910078081.6公开了一种草酸艾司西酞普兰口服固体制剂及其制备方法,该口服固体制 剂的原料组成为:草酸艾司西酞普兰2~40重量份,淀粉5~60重量份,微晶纤维素5~200重 量份,乳糖5~60重量份,粘合剂0.05~5重量份,润滑剂0.05~3重量份;所述的粘合剂为聚 乙烯吡咯烷酮、羟乙基甲基纤维素、甲基纤维素、羟丙基纤维素、乙基纤维素之中的一种或 几种混合水溶液或醇溶液,粘合剂浓度为0.1~10.0%;所述的润滑剂为硬脂酸、硬脂酸镁、 硬脂酸钙、滑石粉或微粉硅胶。上述这些固体制剂为制剂目的通常需要加入润滑剂硬脂酸 镁。
[0010] 草酸艾司西酞普兰例如其片剂有诸多质量控制方法。例如,中国专利申请号 201210589707.1公开了一种草酸艾司西酞普兰杂质Α的制备方法,将艾司西酞普兰与对氟 溴苯格氏试剂,可反应得到艾司西酞普兰杂质A,这种杂质A可用于草酸艾司西酞普兰例如 其片剂的质量控制。又例如,中国专利申请号201310339936.2涉及的是草酸艾司西酞普兰 三个杂质的全新的合成方法,它对于合成高纯度的草酸艾司西酞普兰具有重要意义。该发 明主要研究西酞普兰酰胺杂质1-[3-(二甲氨基)丙基]-1-(4-氟苯基)-1,3_二氢异苯并呋 喃-5-甲酰胺(II)、西酞普兰内酯杂质1-[3-(二甲氨基)丙基]-1-(4-氟苯基)-3-氧-1,3-二 氢异苯丙呋喃-5-腈(III)、西酞普兰-N-氧化杂质1-[3-(二甲氨基)丙基]-1-(4-氟苯基)-1,3_二氢异苯丙呋喃-5-腈-N-氧化物(IV)的合成,这些杂质可用于草酸艾司西酞普兰例如 其片剂的质量控制。再例如,中国专利申请号201410049248.7涉及的是草酸艾司西酞普兰 相关物质及其制备方法。具体涉及如式(I)所示的抗抑郁药物草酸艾司西酞普兰(即(S)-(+ )-1-[3-(二甲氨基)丙基]-1-(4-氟苯基)-1,3_二氢异苯并呋喃-5-甲腈草酸盐)的相关 物质及其制备方法,其合成通过将化合物(Π)(即(S)-( + )-1-[3-(二甲氨基)丙基]-1-(4-氟苯基)-1,3_二氢异苯并呋喃-5-甲腈)经水解、酰化、缩合、还原、加成、氧化后得到目标化 合物。该方法首次通过化学合成得到化合物(I ),可以高效、快速分离得到目标化合物,这些 杂质可用于草酸艾司西酞普兰例如其片剂的质量控制。
[0011] 另外,中国专利申请号200810246555.9(公开号101769904A)公开了一种草酸艾司 西酞普兰光学异构体的高效液相色谱测定方法,在该方法中,选用万古霉素硅烷键合硅胶 为填料的色谱柱,以甲醇、无水乙醇、三乙胺和冰醋酸的混合溶剂作为流动相,可用于草酸 艾司西酞普兰光学异构体的质量控制。
[0012] 然而,令人遗憾的是,现有的方法在对草酸艾司西酞普兰或其制剂例如片剂进行 质量控制特别是对其光学异构体进行质量控制时是有局限的。因此,提供一种对草酸艾司 西酞普兰或其制剂例如片剂进行质量控制特别是对其光学异构体进行质量控制的方法,对 于本领域技术人员而言是非常迫切的。

【发明内容】

[0013] 本发明的目的在于提供一种在对草酸艾司西酞普兰或其制剂例如片剂进行质量 控制特别是对其光学异构体进行质量控制的方法。本发明的另一目的在于提供一种草酸艾 司西酞普兰制剂例如片剂组合物。本发明人出人意料地发现,使用本发明的方法可以获得 本发明所述一个或多个方面的优异效果。本发明基于此发现而得以完成。
[0014]为此,本发明第一方面提供了一种对草酸艾司西酞普兰片剂组合物进行质量控制 的方法,该方法包括对组合物中的西酞普兰R-异构体杂质进行限度检查,包括如下步骤:
[0015] (1)取草酸艾司西酞普兰片剂组合物细粉适量,其中含有相当于艾司西酞普兰20 ~30mg,精密称定,置50ml量瓶中,加流动相适量,超声使溶解,冷却至室温后用流动相稀释 至刻度,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液;
[0016] (2)精密量取供试品溶液lml,置100ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,作为 1.0%对照溶液;另精密量取供试品溶液lml,置200ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀, 作为0.5%对照溶液;另精密量取供试品溶液lml,置500ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇 匀,作为0.2 %对照溶液;
[0017] (3)照中国药典2015年版四部第59所第0512节所载的高效液相色谱法中的规范进 行测定,以万古霉素硅烷键合硅胶为填充剂,以甲醇-无水乙醇-三乙胺-冰醋酸四者体积比 为50: (40~60): (0.05~0· 15): (0.05~0· 15)的混合液为流动相,流速为0.5~1 .Oml/min, 检测波长为230~240nm;
[0018] (4)取西酞普兰消旋体适量,用流动相溶解并稀释制成每lml中含有O.lmg的溶液, 作为系统适用性溶液,取?〇μ1注入液相色谱仪,记录色谱图,R-异构体和S-异构体依次流 出,计算两峰之间的分离度大于1.5时认为分离效果可接受(即,可继续进行后续操作)(R-异构体峰相对于S-异构体峰的相对保留时间大约为0.9),理论板数按艾司西酞普兰即S-异 构体峰计算大于2500时认为可接受(即,可继续进行后续操作);
[0019] (5)取1 %对照溶液10μ1注入液相色谱仪,调节检测灵敏度,使主成分色谱峰的峰 高为满量程的20 % ;再精密量取供试品溶液、1.0 %对照溶液、0.5 %对照溶液、0.2 %对照溶 液各1〇μ1,分别注入液相色谱仪,记录色谱图;
[0020] (6)读取供试品溶液色谱图,如果该色谱图中存在R-异构体峰,将其峰面积与各种 浓度对照溶液的主峰面积进行比较,如果供试品溶液色谱图中R-异构体峰面积小于0.2% 对照溶液主峰面积则表示R-异构体杂质限度小于0.2%,如果供试品溶液色谱图中R-异构 体峰面积小于0.5%对照溶液主峰面积则表示R-异构体杂质限度小于0.5%,如果供试品溶 液色谱图中R-异构体峰面积小于1.0%对照溶液主峰面积则表示R-异构体杂质限度小于 1.0%;如果R-异构体峰面积大于1.0%,则在步骤(2)中以其类似方式配制浓度大于1.0% 的对照溶液并类似地进行比较。
[0021] 根据本发明第一方面任一实施方案的方法,其中还包括对组合物中的西酞普兰R- 异构体杂质进行含量测定,包括如下步骤:
[0022] 读取步骤(5)所得供试品溶液色谱图,如果该色谱图中存在R-异构体峰,将其峰面 积与1.0 %对照溶液色谱图中主峰面积进行比较,按下式计算R-异构体含量:
[0023] R-异构体含量=(供试品溶液色谱图中R-异构体峰面积+ 1.0%对照溶液色谱图 中主峰面积)X 1.0 %
[0024] 根据本发明第一方面任一实施方案的方法,其中对组合物中的西酞普兰R-异构体 杂质进行限度检查的步骤(1)中,取草酸艾司西酞普兰片剂组合物细粉适量,其中含有相当 于艾司西酞普兰25mg,精密称定,接着进行后续处理。
[0025] 根据本发明第一方面任一实施方案的方法,其中对组合物中的西酞普兰R-异构体 杂质进行限度检查的步骤(3)中,所述流动相为甲醇-无水乙醇-三乙胺-冰醋酸四者体积比 为50:50:0.1:0.1。
[0026]已经发现,尽管使用上述甲醇-无水乙醇-三乙胺-冰醋酸四者混合液能够获得良 好的R-异构体和S-异构体的分离度且理论板数理想,但是供试品在5小时以上的较长时间 放置后,其中的R-异构体峰面积会有变小的趋势。并且已经发现,这种R-异构体峰面积变小 趋势可能是由于组合物中添加了硬脂酸镁有关,因此未添加此硬脂酸镁的片剂未呈现这种 现象,而添加了硬脂酸镁的片剂在的供试品溶液会随着放置时间的延长而造成R-异构体峰 面积变小。已经出人意料地发现,当将混合流动流动相中的三乙胺替换为等量的氨丁三醇 时,这种R-异构体峰面积变小的现象得以克服,并且还出人意料的是,在R-异构体和S-异构 体二者具有良好分离度的情况下,S-异构体的保留时间还能够提前,这对于提高分离效率 是有益的。因此,根据本发明第一方面任一实施方案的方法,其中对组合物中的西酞普兰R-异构体杂质进行限度检查的步骤(3)中,以甲醇-无水乙醇-氨丁三醇-冰醋酸四者体积比为 50: (40~60): (0.05~0.15): (0.05~0.15)的混合液为流动相,例如以四者体积比为50:50 :0.1:0.1的混合液为流动相。
[0027] 根据本发明第一方面任一实施方案的方法,其中对组合物中的西酞普兰R-异构体 杂质进行限度检查的步骤(3)中,所述流速为0.6ml/min。
[0028] 根据本发明第一方面任一实施方案的方法,其中对组合物中的西酞普兰R-异构体 杂质进行限度检查的步骤(3)中,所述检测波长为238nm。
[0029] 根据本发明第一方面任一实施方案的方法,其中还包括对组合物中的有关物质进 行检查,包括如下步骤:
[0030] (1)取草酸艾司西酞普兰片剂组合物细粉适量,其中含有相当于艾司西酞普兰 50mg,精密称定,置100ml量瓶中,加缓冲盐溶液10ml,强力振摇lOmin后,加入40ml甲醇,振 摇lOmin后超声lOmin,待冷却至室温后加流动相稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液作为供 试品溶液;所述缓冲盐溶液的配制方法如下:称取1.5g无水醋酸钠,加入0.4ml冰醋酸,加水 至1000ml,摇匀,用1M的氢氧化钠调节pH至5.2,混匀,即得;
[0031] (2)精密量取供试品溶液lml,置100ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,作为 1.0%对照溶液(1.0%);
[0032] (3)照中国药典2015年版四部第59所第0512节所载的高效液相色谱法中的规范进 行测定,以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,色谱柱的柱长150mm、内径4.6mm、填料粒径5μ m,以缓冲盐溶液-甲醇-乙腈三者体积比为60: 33:7的混合液为流动相,流速为1.0ml/min, 检测波长为239nm,柱温45°C ;
[0033] (4)取草酸艾司西酞普兰对照品与西酞普兰杂质C对照品适量,用流动相溶解并稀 释制成每lml中各含l.Oyg的混合溶液,作为系统适用性试验溶液,取10μ1注入液相色谱仪, 记录色谱图,艾司西酞普兰与杂质C峰的分离度大于3.0时认为分离效果可接受;
[0034] (5)取对照溶液10μ1重复进样6次,主峰峰面积的相对标准偏差小于2.0%时认为 可接受;另取对照溶液1〇μ1注入液相色谱仪,调节检测灵敏度,使主成分色谱峰的峰高为满 量程的10% ;再精密量取供试品溶液、对照溶液各1〇μ1,分别注入液相色谱仪,记录色谱图 至主峰保留时间的3.5倍;
[0035] (6)读取供试品溶液色谱图,如果该色谱图中存在杂质峰,除去溶剂峰和草酸峰, 按下式计算各已知杂质、未知杂质和总杂质百分量:
[0036] 杂质 % = (Ax/Ar) X (1/F) X 1/100 X 100
[0037] 其中:
[0038] Ax:供试品溶液中各个杂质的峰面积
[0039] Ar:对照溶液中艾司西酞普兰的峰面积
[0040] F:相对响应因子。
[0041]根据本发明第一方面任一实施方案的方法,其中对组合物中的有关物质进行检查 时,各杂质的相对保留时间及其相对响应因子如下表:
[0043]根据本发明第一方面任一实施方案的方法,其中对组合物中的有关物质进行检查 时,所述的西酞普兰杂质C的化学结构如下:
[0045]根据本发明第一方面任一实施方案的方法,其中对组合物中的有关物质进行检查 时,所述的西酞普兰杂质A的化学结构如下:
[0047]根据本发明第一方面任一实施方案的方法,其中对组合物中的有关物质进行检查 时,所述的艾司西酞普兰杂质A的化学结构如下:
[0049]根据本发明第一方面任一实施方案的方法,其中对组合物中的有关物质进行检查 时,所述的西酞普兰杂质B的化学结构如下:
[0051]根据本发明第一方面任一实施方案的方法,其中对组合物中的有关物质进行检查 时,所述的西酞普兰杂质E的化学结构如下:
[0053] 本领域一般地要求,西酞普兰杂质A的可接受标准为<0.2%,艾司西酞普兰杂质A 的可接受标准为<〇. 1 %,西酞普兰杂质B的可接受标准为<0.2%,西酞普兰杂质C的可接 受标准为<〇.4%,西酞普兰杂质E的可接受标准为<0.2%,其它单个杂质的可接受标准为 <0.1 %,总杂质的可接受标准为< 1.0%。
[0054] 根据本发明第一方面任一实施方案的方法,其中所述草酸艾司西酞普兰片剂组合 物中包含治疗有效量的草酸艾司西酞普兰,以及硬脂酸镁,和任选的药学可接受的载体。
[0055] 进一步地,本发明第二方面提供了一种草酸艾司西酞普兰片剂组合物,其中包含 治疗有效量的草酸艾司西酞普兰,以及硬脂酸镁,和任选的药学可接受的载体。
[0056] 由于大多数市售草酸艾司西酞普兰片剂中均添加了作为润滑剂的硬脂酸镁,这种 非常常用的润滑剂为生产上顺利地制备片剂提供了可能。但是出人意料地发现,当使用某 些流动相对这种添加了硬脂酸镁的片剂组合物进行异构体杂质进行检查时,发现可能是由 于硬脂酸镁的存在而对质量控制检查有不利影响。但是当使用本发明所提及的某些流动相 进行检查时,片剂中硬脂酸镁的存在并不会对检查方法有不利影响。因此,包含硬脂酸镁的 草酸艾司西酞普兰片剂组合物亦是本发明的一个方面。
[0057] 在本发明上述制备方法的步骤中,虽然其描述的具体步骤在某些细节上或者语言 描述上与下文【具体实施方式】部分的制备例中所描述的步骤有所区别,然而,本领域技术人 员根据本发明全文的详细公开完全可以概括出以上所述方法步骤。
[0058]本发明的任一方面的任一实施方案,可以与其它实施方案进行组合,只要它们不 会出现矛盾。此外,在本发明任一方面的任一实施方案中,任一技术特征可以适用于其它实 施方案中的该技术特征,只要它们不会出现矛盾。
[0059] 下面对本发明作进一步的描述。
[0060] 本发明所引述的所有文献,它们的全部内容通过引用并入本文,并且如果这些文 献所表达的含义与本发明不一致时,以本发明的表述为准。此外,本发明使用的各种术语和 短语具有本领域技术人员公知的一般含义,即便如此,本发明仍然希望在此对这些术语和 短语作更详尽的说明和解释,提及的术语和短语如有与公知含义不一致的,以本发明所表 述的含义为准。
[0061] 本发明中所使用的万古霉素硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱,可以从商业途径获 得,例如品牌为Astec CHIR0BI0TIC V的色谱柱,在本发明中如未另外说明,使用的万古霉 素硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱是品牌为Astec CHIR0BI0TIC V的色谱柱,其柱规格为 250 X4.6mm,5μηι。众所周知,当能够满足分离度和理论板数要求时,其它的柱规格亦是可接 受的,例如 150 X4.6mm,5ym柱、200 X4.6mm,5ym柱等。
[0062]目前临床上使用的草酸艾司西酞普兰片剂有5mg、10mg、20mg等规格,用法为口服, 可以与食物同服。
[0063]在用量方面,抑郁障碍:每日1次,常用剂量为每日10mg,根据患者的个体反应,每 日最大剂量可以增加至20mg,通常2-4周即可获得抗抑郁疗效,症状缓解后,应持续治疗至 少6个月以巩固疗效;伴有或不伴有广场恐怖症的惊恐障碍:每日1次,建议起始剂量为每日 5mg,持续一周后增加至每日10mg,根据患者的个体反应,剂量还可以继续增加,至最大剂量 每日20mg;这些用量通常治疗约3个月可取得最佳疗效,疗程一般持续数月。
[0064] 对于老年患者(>65岁):推荐以上述常规起始剂量的半量开始治疗,最大剂量也 应相应降低。对于儿童和青少年(<18岁):本品不适用于儿童和18岁以下的青少年。
[0065] 肾功能降低者:轻中度肾功能降低者(CLCR<30ml/分钟)不需要调整剂量,严重肾 功能降低的患者慎用。
[0066] 对于肝脏功能降低者:建议起始剂量每日5 m g,持续治疗2周。根据患者的个体反 应,剂量可以增加至每日l〇mg。
[0067] 对于CYP2C19慢代谢者:对于已知是CYP2C19慢代谢的患者,建议起始剂量每日 5mg,持续治疗2周,根据患者的个体反应,可将剂量增加至每日10mg。
[0068] 停药症状:需要停止本品治疗时,应该在1周至2周内逐渐减少剂量,以避免出现停 药症状。每日20mg以上剂量的安全性还未得到证明。
[0069] 遗传毒性:消旋西酞普兰Ames试验中,在无代谢活化剂存在时,5个试验菌株中有2 个菌株(TA98和TA1537)结果为阳性。消旋西酞普兰CHL染色体畸变试验中,无论有或无代谢 活化剂存在,结果均为阳性。消旋西酞普兰小鼠淋巴瘤细胞正向基因突变试验(HPRT)、大鼠 肝脏细胞程序外DNA合成试验(UDS)、人淋巴细胞染色体畸变试验、小鼠微核试验结果均为 阴性。
[0070] 生殖毒性:生育力试验中,大鼠经口给予消旋西酞普兰32、48、72mg/kg/天,可见各 剂量组交配率降低,剂量多32mg/kg/天时生育力降低,剂量为48mg/kg/天时妊娠时间延长。 大鼠胚胎-胎仔发育毒性试验中,大鼠经口给予艾司西酞普兰56、112、150mg/kg/天,中、高 剂量(根据mg/m2推算,相当于人最大推荐剂量[MRHD]20mg/天多56倍)时,可见胎仔体重降 低和骨化延迟。各剂量组均可见母体毒性(临床异常症状、体重增量减少、摄食量降低),未 见致畸作用。发育的无影响剂量为56mg/kg/天,相当于MRHD约28倍。妊娠大鼠围产期给予艾 司西酞普兰6、12、24、48mg/kg/天,最高剂量组(相当于MRHD约24倍)子代死亡率轻微增加及 生长轻微迟滞,并可见轻微母体毒性(临床异常症状、体重增量减少,摄食量降低)。24mg/kg 厌剂量组可见子代死亡率轻微增加。无影响剂量为12mg/kg/天,相当于MRHD约6倍。
[0071]在动物生殖毒性试验中,消旋西酞普兰可见对胚胎/胎自仔发育和出生后发育的 不良影响,包括在高于人体治疗剂量时出现的致畸性。大鼠胚胎/胎仔毒性试验中,大鼠经 口给予消旋西酞普兰32、56、112mg/kg/天,高剂量时可见胚胎/胎仔生长抑制、胎仔存活率 降低,胎仔异常率增加(包括心血管和骨骼缺陷)及母体毒性(临床异常正常、体重增量减 少),发育的无影响剂量为56mg/kg/天。家兔经口给予消旋西酞普兰剂量高达16mg/kg/天未 见异常。围产期毒性试验中,大鼠经口给予消旋西酞普兰4.8、12.8、32mg/kg/天,高剂量组 可见出生后4天内幼鼠死亡率增加,幼鼠生长停滞。无影响剂量为12.8mg/kg/天。
[0072] 致癌性:NMRI/B0M小鼠和COBS WI大鼠经口给予消旋西酞普兰,分别连续18和24个 月。小鼠在剂量高达240mg/kg/天时未见致癌性。大鼠在剂量为8或24mg/kg/天时,可见小肠 肿瘤的发生率增加。此现象与人的相关性尚不明确。
[0073] 本发明的优异效果在于,通过使用特定的方法能够有效地对草酸艾司西酞普兰片 剂组合物进行质量控制。
【具体实施方式】
[0074] 通过下面的实施例可以对本发明进行进一步的描述,然而,本发明的范围并不限 于下述实施例。本领域的专业人员能够理解,在不背离本发明的精神和范围的前提下,可以 对本发明进行各种变化和修饰。本发明对试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性 和/或具体的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的, 但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。以下实施例进一步说明本发明,而不是限制本发 明。
[0075] 在下面的例子中,下文各种试验是为了举例的目的,并基于各举例的可比较性而 作了某些具体描述,本领域技术人员根据已有知识完全可以从中概括得到本发明技术方案 的方法。在下面制备各种组合物中,如未另外说明,每批的总配料量为包含活性成分至少 50g的量,不足的按比例增加到活性成分至少50g的量。在使用草酸艾司西酞普兰原料药制 备片剂时,这种原料药是由湖南洞庭药业股份有限公司生产并且其国药准字为H20140130, 符合药用标准的原料药产品。
[0076] 一、组合物制备
[0077]制备例1:制备草酸艾司西酞普兰片剂组合物 [0078]配方:
[0080] 制法:草酸艾司西酞普兰API颗粒度中值粒径0(¥,0.5) = 105以111。将草酸艾司西酞 普兰和滑石粉过30目筛,同微晶纤维素和交联羧甲基纤维素钠于单臂混合桶混合均匀。将 硬脂酸镁过30目筛加入,并继续混合3分钟,采用旋转压片机压片。
[0081] 制备例2:制备草酸艾司西酞普兰片剂组合物 [0082]配方:
[0084]制法:草酸艾司西酞普兰API颗粒度中值粒径0(¥,0.5) = 1以!11。将草酸艾司西酞普 兰、单水乳糖、微晶纤维素、羟丙基纤维素、交联羧甲基纤维素钠于高剪切制粒机中预混,加 入纯化水制粒,使用旋转整粒机湿整,湿颗粒于流化床中干燥,干燥后颗粒使用旋转整粒机 干整得到干颗粒,干颗粒外加硬脂酸镁于单臂料斗混合机中混合均匀,采用旋转压片机压 片。
[0085] 制备例3:制备草酸艾司西酞普兰片剂组合物
[0086] 配方和制法参照本发明制备例5,不同的仅是将其中的聚乙二醇-6000替换为 〇.75g的硬脂酸镁。
[0087] 制备例4:提供草酸艾司西酞普兰片剂
[0088]市售购得的草酸艾司西酞普兰片剂其批准文号H20140121(在本发明中可简称为# 121片)、市售购得的草酸艾司西酞普兰片剂其批准文号H2014339K在本发明中可简称为# 391片,湖南洞庭药业产)、市售购得的草酸艾司西酞普兰片剂其产地为山东省(在本发明中 可简称为山东片)、市售购得的草酸艾司西酞普兰片剂其产地为吉林省(在本发明中可简称 为吉林片)。上述四种市售片剂经检测,其中均添加有硬脂酸镁。
[0089] 制备例5:制备草酸艾司西酞普兰片剂组合物
[0090] 配方:
[0091] 草酸艾司西酞普兰3.34g,无水枸橼酸17.75g,碳酸氢钠29.75g,蔗糖26.62g,橙味 香精5.74g,阿司帕坦8.87g,润滑剂聚乙二醇-6000为7.83g,PVP-K30为0. lg;
[0092] 制备方法:
[0093] ①将草酸艾司西酞普兰、碳酸氢钠、无水枸橼酸、蔗糖、橙味香精80目粉碎,阿司帕 坦、聚乙二醇-6000用80目过筛;
[0094] ②称取处方量的草酸艾司西酞普兰、无水枸橼酸、阿司帕坦、橙味香精,混合均匀, 加入总质量38 %的PVPK30乙醇溶液,制软材,20目筛制粒,60°C干燥,至颗粒水分彡1.0 %, 18目筛整粒,得颗粒a;
[0095] ③称取处方量的碳酸氢钠、蔗糖,混合均匀,加入总质量62%的PVP-K30乙醇溶液, 制软材,20目筛制粒,40 °C干燥,至颗粒水分< 1.0 %,18目筛整粒,得颗粒b;
[0096] ④将颗粒a、颗粒b和处方量的聚乙二醇-6000混合均匀;
[0097] ⑤选用Φ8ι?πι平冲冲模压片,理论片重191.6mg。
[0098] 所述的PVP-K30乙醇溶液为上述处方中的PVP-K30用体积分数为50%的乙醇溶液 配制成质量分数为5 %的PVP-K30乙醇溶液。
[0099] 制备例6:制备草酸艾司西酞普兰片剂组合物
[0100] 配方和制法参照本发明制备例1,不同的仅是将其中的硬脂酸镁去除。
[0101] 制备例7:制备草酸艾司西酞普兰片剂组合物
[0102] 配方和制法参照本发明制备例2,不同的仅是将其中的硬脂酸镁去除。
[0103] 制备例8:制备草酸艾司西酞普兰片剂组合物
[0104] 配方和制法参照本发明制备例1,不同的仅是将其中的硬脂酸镁替换为等量的硬 脂酸。
[0105] 制备例9:制备草酸艾司西酞普兰片剂组合物
[0106] 配方和制法参照本发明制备例2,不同的仅是将其中的硬脂酸镁换为等量的滑石 粉。
[0107] 二、试验例部分
[0108] 试验例1、质量控制一一对组合物中的西酞普兰R-异构体杂质进行限度检查
[0109] 方法步骤:
[0110] (1)取草酸艾司西酞普兰片剂组合物细粉适量,其中含有相当于艾司西酞普兰 25mg,精密称定,置50ml量瓶中,加流动相适量,超声使溶解,冷却至室温后用流动相稀释至 刻度,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液;
[0111] (2)精密量取供试品溶液lml,置100ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,作为 1.0%对照溶液;另精密量取供试品溶液lml,置200ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀, 作为0.5%对照溶液;另精密量取供试品溶液lml,置500ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇 匀,作为0.2 %对照溶液;
[0112] (3)照中国药典2015年版四部第59所第0512节所载的高效液相色谱法中的规范进 行测定,以万古霉素硅烷键合硅胶为填充剂,以甲醇-无水乙醇-三乙胺-冰醋酸四者体积比 为50:50:0.1:0.1的混合液为流动相,流速为0.6ml/min,检测波长为238nm;
[0113] (4)取西酞普兰消旋体适量,用流动相溶解并稀释制成每lml中含有O.lmg的溶液, 作为系统适用性溶液,取?〇μ1注入液相色谱仪,记录色谱图,R-异构体和S-异构体依次流 出,计算两峰之间的分离度大于1.5时认为分离效果可接受(R-异构体峰相对于S-异构体峰 的相对保留时间大约为0.9),理论板数按艾司西酞普兰即S-异构体峰计算大于2500时认为 可接受;
[0114] (5)取1 %对照溶液10μ1注入液相色谱仪,调节检测灵敏度,使主成分色谱峰的峰 高为满量程的20 % ;再精密量取供试品溶液、1.0 %对照溶液、0.5 %对照溶液、0.2 %对照溶 液各1〇μ1,分别注入液相色谱仪,记录色谱图;
[0115] (6)读取供试品溶液色谱图,如果该色谱图中存在R-异构体峰,将其峰面积与各种 浓度对照溶液的主峰面积进行比较,如果供试品溶液色谱图中R-异构体峰面积小于0.2% 对照溶液主峰面积则表示R-异构体杂质限度小于0.2%,如果供试品溶液色谱图中R-异构 体峰面积小于0.5%对照溶液主峰面积则表示R-异构体杂质限度小于0.5%,如果供试品溶 液色谱图中R-异构体峰面积小于1.0%对照溶液主峰面积则表示R-异构体杂质限度小于 1.0%;如果R-异构体峰面积大于1.0%,则在步骤(2)中以其类似方式配制浓度大于1.0% 的对照溶液并类似地进行比较。
[0116] 试验例2、质量控制一一对组合物中的西酞普兰R-异构体杂质进行限度检查
[0117] 方法步骤:
[0118] (1)取草酸艾司西酞普兰片剂组合物细粉适量,其中含有相当于艾司西酞普兰 20mg,精密称定,置50ml量瓶中,加流动相适量,超声使溶解,冷却至室温后用流动相稀释至 刻度,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液;
[0119] (2)精密量取供试品溶液lml,置100ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,作为 1.0%对照溶液;另精密量取供试品溶液lml,置200ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀, 作为0.5%对照溶液;另精密量取供试品溶液lml,置500ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇 匀,作为0.2 %对照溶液;
[0120] (3)照中国药典2015年版四部第59所第0512节所载的高效液相色谱法中的规范进 行测定,以万古霉素硅烷键合硅胶为填充剂,以甲醇-无水乙醇-三乙胺-冰醋酸四者体积比 为50:40:0.15:0.05的混合液为流动相,流速为0.5ml/min,检测波长为240nm;
[0121] (4)取西酞普兰消旋体适量,用流动相溶解并稀释制成每lml中含有O.lmg的溶液, 作为系统适用性溶液,取?〇μ1注入液相色谱仪,记录色谱图,R-异构体和S-异构体依次流 出,计算两峰之间的分离度大于1.5时认为分离效果可接受(R-异构体峰相对于S-异构体峰 的相对保留时间大约为0.9),理论板数按艾司西酞普兰即S-异构体峰计算大于2500时认为 可接受;
[0122] (5)取1 %对照溶液10μ1注入液相色谱仪,调节检测灵敏度,使主成分色谱峰的峰 高为满量程的20 % ;再精密量取供试品溶液、1.0 %对照溶液、0.5 %对照溶液、0.2 %对照溶 液各?〇μ1,分别注入液相色谱仪,记录色谱图;
[0123] (6)读取供试品溶液色谱图,如果该色谱图中存在R-异构体峰,将其峰面积与各种 浓度对照溶液的主峰面积进行比较,如果供试品溶液色谱图中R-异构体峰面积小于0.2% 对照溶液主峰面积则表示R-异构体杂质限度小于0.2%,如果供试品溶液色谱图中R-异构 体峰面积小于0.5%对照溶液主峰面积则表示R-异构体杂质限度小于0.5%,如果供试品溶 液色谱图中R-异构体峰面积小于1.0%对照溶液主峰面积则表示R-异构体杂质限度小于 1.0%;如果R-异构体峰面积大于1.0%,则在步骤(2)中以其类似方式配制浓度大于1.0% 的对照溶液并类似地进行比较。
[0124] 试验例3、质量控制一一对组合物中的西酞普兰R-异构体杂质进行限度检查
[0125] 方法步骤:
[0126] (1)取草酸艾司西酞普兰片剂组合物细粉适量,其中含有相当于艾司西酞普兰 30mg,精密称定,置50ml量瓶中,加流动相适量,超声使溶解,冷却至室温后用流动相稀释至 刻度,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液;
[0127] (2)精密量取供试品溶液lml,置100ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,作为 1.0%对照溶液;另精密量取供试品溶液lml,置200ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀, 作为0.5%对照溶液;另精密量取供试品溶液lml,置500ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇 匀,作为0.2 %对照溶液;
[0128] (3)照中国药典2015年版四部第59所第0512节所载的高效液相色谱法中的规范进 行测定,以万古霉素硅烷键合硅胶为填充剂,以甲醇-无水乙醇-三乙胺-冰醋酸四者体积比 为50:60:0.05:0.15的混合液为流动相,流速为1.0ml/min,检测波长为230nm;
[0129] (4)取西酞普兰消旋体适量,用流动相溶解并稀释制成每lml中含有O.lmg的溶液, 作为系统适用性溶液,取?〇μ1注入液相色谱仪,记录色谱图,R-异构体和S-异构体依次流 出,计算两峰之间的分离度大于1.5时认为分离效果可接受(R-异构体峰相对于S-异构体峰 的相对保留时间大约为0.9),理论板数按艾司西酞普兰即S-异构体峰计算大于2500时认为 可接受;
[0130] (5)取1 %对照溶液10μ1注入液相色谱仪,调节检测灵敏度,使主成分色谱峰的峰 高为满量程的20 % ;再精密量取供试品溶液、1.0 %对照溶液、0.5 %对照溶液、0.2 %对照溶 液各?〇μ1,分别注入液相色谱仪,记录色谱图;
[0131] (6)读取供试品溶液色谱图,如果该色谱图中存在R-异构体峰,将其峰面积与各种 浓度对照溶液的主峰面积进行比较,如果供试品溶液色谱图中R-异构体峰面积小于0.2% 对照溶液主峰面积则表示R-异构体杂质限度小于0.2%,如果供试品溶液色谱图中R-异构 体峰面积小于0.5%对照溶液主峰面积则表示R-异构体杂质限度小于0.5%,如果供试品溶 液色谱图中R-异构体峰面积小于1.0%对照溶液主峰面积则表示R-异构体杂质限度小于 1.0%;如果R-异构体峰面积大于1.0%,则在步骤(2)中以其类似方式配制浓度大于1.0% 的对照溶液并类似地进行比较。
[0132] 试验例4、质量控制一一对组合物中的西酞普兰R-异构体杂质进行限度检查:参照 试验例1的方法,不同的仅是将混合流动流动相中的三乙胺替换为等量的氨丁三醇。试验例 5、质量控制一一对组合物中的西酞普兰R-异构体杂质进行限度检查:参照试验例2的方法, 不同的仅是将混合流动流动相中的三乙胺替换为等量的氨丁三醇。试验例6、质量控制一一 对组合物中的西酞普兰R-异构体杂质进行限度检查:参照试验例3的方法,不同的仅是将混 合流动流动相中的三乙胺替换为等量的氨丁三醇。
[0133] 分别使用以上试验例1-试验例6的方法,分别对制备例1-制备例9中提供的草酸艾 司西酞普兰片剂进行西酞普兰R-异构体杂质限度检查。
[0134] 结果:试验例1-试验例6的方法对全部片剂检测时,S-异构体和R-异构体之间的分 离度均大于2.0,均满足测定要求;试验例1-试验例6的方法对全部片剂检测时,S-异构体峰 的理论板数均大于3000,均满足测定要求;对全部片剂检测时,对于S-异构体保留时间,试 验例4-试验例6三种方法的保留时间基本相同,试验例1-试验例3三种方法的保留时间基本 相同,试验例4 -试验例6二种方法的保留时间大约是试验例1 -试验例3二种方法的保留时间 的82~83%,表明试验例4-试验例6的出峰时间提前,这对于尽快地完成分析任务是极具价 值的;用试验例1-试验例6的方法对全部片剂检测,供试品溶液在配液后2小时内完成测定, 各片剂的R异构体量均低于〇. 5%的限度,部分市售品片剂的R异构体量甚至低于0.2 %的限 度(例如湖南洞庭药业产的片剂用试验例1-试验例6的方法对全部片剂检测,供试品溶液在 配液后2小时内完成测定,限度均低于0.2%);对于同一片剂,使用试验例1-试验例6的六种 不同方法测定的R异构体量的限度基本相同,没有明显的区别,表明方法上的细小改变并不 会对结果有明显影响。在用试验例1-试验例6的方法对全部片剂检测时,供试品溶液在配液 后在室温下放置至2、5、10小时时注入液相色谱仪进行测定,结果显示不同方法对不同片剂 的测定结果呈现显著差异,具体是:试验例4 -试验例6二种方法对制备例1 -制备例9提供的 全部片剂,供试品溶液在配液后在室温下放置至2、5、10小时时注入液相色谱仪,对于在同 一方法下测定的同一片剂R异构体峰面积并无变化,即供试品溶液在放置不同时间后其中 的R异构体峰面积无变化;试验例1-试验例3三种方法对制备例5-制备例9提供的不含硬脂 酸镁的全部片剂,供试品溶液在配液后在室温下放置至2、5、10小时时注入液相色谱仪,对 于在同一方法下测定的同一片剂R异构体峰面积并无变化,即供试品溶液在放置不同时间 后其中的R异构体峰面积无变化,并且与试验例4-试验例6三种方法对这些片剂的检测结果 基本相同;试验例1-试验例3三种方法对制备例1-制备例4提供的含有硬脂酸镁的全部片 剂,供试品溶液在配液后在室温下放置至2、5、10小时时注入液相色谱仪,对于在同一方法 下测定的同一片剂R异构体峰面积,呈现与放置时间延长而峰面积下降的趋势,对于各种方 法测定的同一片剂,大体上的趋势是5小时的R异构体峰面积大约为2小时的R异构体峰面积 的87~90%,10小时的R异构体峰面积大约为2小时的R异构体峰面积的81~83% ;这表明, 使用以三乙胺为流动相成分之一,测定含有硬脂酸镁的片剂中的R异构体时,其峰面积会随 供试品溶液放置时间延长而降低,但无法解释的是,对不含硬脂酸镁的片剂进行测定时却 未呈现这种趋势,而当将三乙胺用同类物质替代时,却能很好地克服这一缺陷。鉴于硬脂酸 镁是一种优良的片剂润滑剂,因此本发明提供的一些质量控制方法是非常有价值的,因为 液相色谱测定时对于大样本量通常供试品溶液会需要等待较长时间才能向液相色谱仪中 进样。
[0135] 试验例7:质量控制--对组合物中的西酞普兰R-异构体杂质进行含量测定
[0136] 分别使用试验例1-6的方法,但是步骤(6)改为如下操作:读取步骤(5)所得供试品 溶液色谱图,如果该色谱图中存在R-异构体峰,将其峰面积与1.0%对照溶液色谱图中主峰 面积进行比较,按下式计算R-异构体含量:
[0137] R-异构体含量=(供试品溶液色谱图中R-异构体峰面积+ 1.0%对照溶液色谱图 中主峰面积)X 1.0 %
[0138] 分别使用参照试验例1-6执行的方法,对制备例1-制备例9的全部片剂进行R-异构 体含量测定,控制样品配液速度,使得全部供试品溶液在配好后2小时内注入液相色谱仪 (尽管这样做会降低工作效率)。结果显示,对于同一片剂,使用不同的方法测定得到的R-异 构体含量测定基本相同,全部片剂的R-异构体含量均低于0.5%,部分片剂的R异构体含量 在0.2~0.5%范围内,部分片剂的R异构体含量在0.05~0.2%范围内,例如湖南洞庭药业 产的片剂使用试验例1-6执行的方法测定的R异构体含量均在0.08~0.13%范围内,显示具 有非常低的异构体杂质。
[0139] 试验例8:质量控制一一对组合物中的有关物质进行检查
[0140] 检查步骤:
[0141] (1)取草酸艾司西酞普兰片剂组合物细粉适量,其中含有相当于艾司西酞普兰 50mg,精密称定,置100ml量瓶中,加缓冲盐溶液10ml,强力振摇lOmin后,加入40ml甲醇,振 摇lOmin后超声lOmin,待冷却至室温后加流动相稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液作为供 试品溶液;所述缓冲盐溶液的配制方法如下:称取1.5g无水醋酸钠,加入0.4ml冰醋酸,加水 至1000ml,摇匀,用1M的氢氧化钠调节pH至5.2,混匀,即得;
[0142] (2)精密量取供试品溶液lml,置100ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,作为 1.0%对照溶液(1.0%);
[0143] (3)照中国药典2015年版四部第59所第0512节所载的高效液相色谱法中的规范进 行测定,以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,色谱柱的柱长150mm、内径4.6mm、填料粒径5μ m,以缓冲盐溶液-甲醇-乙腈三者体积比为60: 33:7的混合液为流动相,流速为1.0ml/min, 检测波长为239nm,柱温45°C ;
[0144] (4)取草酸艾司西酞普兰对照品与西酞普兰杂质C对照品适量,用流动相溶解并稀 释制成每lml中各含l.Oyg的混合溶液,作为系统适用性试验溶液,取10μ1注入液相色谱仪, 记录色谱图,艾司西酞普兰与杂质C峰的分离度大于3.0时认为分离效果可接受;
[0145] (5)取对照溶液10μ1重复进样6次,主峰峰面积的相对标准偏差小于2.0%时认为 可接受;另取对照溶液1〇μ1注入液相色谱仪,调节检测灵敏度,使主成分色谱峰的峰高为满 量程的10% ;再精密量取供试品溶液、对照溶液各1〇μ1,分别注入液相色谱仪,记录色谱图 至主峰保留时间的3.5倍;
[0146] (6)读取供试品溶液色谱图,如果该色谱图中存在杂质峰,除去溶剂峰和草酸峰, 按下式计算各已知杂质、未知杂质和总杂质百分量:
[0147] 杂质 % = (Ax/Ar) X (1/F) X 1/100 X 100
[0148] 其中:
[0149] Ax:供试品溶液中各个杂质的峰面积
[0150] Ar:对照溶液中艾司西酞普兰的峰面积
[0151] F:相对响应因子。
[0152] 检查时,各杂质的相对保留时间及其相对响应因子如下表:
[0154]西酞普兰杂质C的化学结构如下:

[0156]西酞普兰杂质A的化学结构如下:
[0158]艾司西酞普兰杂质A的化学结构如下:
[0160]西酞普兰杂质B的化学结构如下:
[0162]西酞普兰杂质E的化学结构如下:
[0164] 经本试验例8的方法对制备例1-制备例9的片剂进行有关物质检查,结果显示,对 于全部片剂,西酞普兰杂质A均<0.2%,艾司西酞普兰杂质A均<0.1 %,西酞普兰杂质B均 彡0.2%,西酞普兰杂质C均彡0.4%,西酞普兰杂质E均彡0.2%,其它单个杂质均彡0.1%, 总杂质均< 1. 〇 % ;例如湖南洞庭药业产的片剂,其西酞普兰杂质AS 0.05 %,艾司西酞普兰 杂质A彡0.02%,西酞普兰杂质B彡0.05%,西酞普兰杂质C彡0.1%,西酞普兰杂质E彡 0.05%,其它单个杂质彡0.01%,总杂质彡0.35%。
[0165] 产业适用性
[0166] 以上所述,仅为本发明的优选实施例,不能解释为以此限定本发明的范围,凡在本 发明的权利要求书要求保护的范围内所做出的等同的变形和改变的实施方式均在本发明 所要求保护的范围内。
【主权项】
1. 对草酸艾司西酞普兰片剂组合物进行质量控制的方法,该方法包括对组合物中的西 酞普兰R-异构体杂质进行限度检查,包括如下步骤: (1) 取草酸艾司西酞普兰片剂组合物细粉适量,其中含有相当于艾司西酞普兰20~ 30mg,精密称定,置50ml量瓶中,加流动相适量,超声使溶解,冷却至室温后用流动相稀释至 刻度,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液; (2) 精密量取供试品溶液lml,置100mL量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,作为1.0% 对照溶液;另精密量取供试品溶液Iml,置200ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,作为 0. 5 %对照溶液;另精密量取供试品溶液Iml,置500ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀, 作为0.2 %对照溶液; (3) 照中国药典2015年版四部第59所第0512节所载的高效液相色谱法中的规范进行测 定,以万古霉素硅烷键合硅胶为填充剂,以甲醇-无水乙醇-三乙胺-冰醋酸四者体积比为 50: (40~60): (0 · 05~0 · 15): (0 · 05~0 · 15)的混合液为流动相,流速为0 · 5~1 · Oml/min,检 测波长为230~240nm; (4) 取西酞普兰消旋体适量,用流动相溶解并稀释制成每1ml中含有0.1 mg的溶液,作为 系统适用性溶液,取?〇μ1注入液相色谱仪,记录色谱图,R-异构体和S-异构体依次流出,计 算两峰之间的分离度大于1.5时认为分离效果可接受,理论板数按艾司西酞普兰即S-异构 体峰计算大于2500时认为可接受; (5) 取1 %对照溶液ΙΟμΙ注入液相色谱仪,调节检测灵敏度,使主成分色谱峰的峰高为 满量程的20 % ;再精密量取供试品溶液、1.0 %对照溶液、0.5%对照溶液、0.2 %对照溶液各 1〇μ1,分别注入液相色谱仪,记录色谱图; (6) 读取供试品溶液色谱图,如果该色谱图中存在R-异构体峰,将其峰面积与各种浓度 对照溶液的主峰面积进行比较,如果供试品溶液色谱图中R-异构体峰面积小于0.2%对照 溶液主峰面积则表示R-异构体杂质限度小于0.2%,如果供试品溶液色谱图中R-异构体峰 面积小于〇. 5%对照溶液主峰面积则表示R-异构体杂质限度小于0.5%,如果供试品溶液色 谱图中R-异构体峰面积小于I.O%对照溶液主峰面积则表示R-异构体杂质限度小于I.O% ; 如果R-异构体峰面积大于I. 〇%,则在步骤(2)中以其类似方式配制浓度大于I.O%的对照 溶液并类似地进行比较。2. 根据权利要求1的方法,其中还包括对组合物中的西酞普兰R-异构体杂质进行含量 测定,包括如下步骤: 读取步骤(5)所得供试品溶液色谱图,如果该色谱图中存在R-异构体峰,将其峰面积与 1. O%对照溶液色谱图中主峰面积进行比较,按下式计算R-异构体含量: R-异构体含量=(供试品溶液色谱图中R-异构体峰面积+1.0%对照溶液色谱图中主 峰面积)X1 ·〇%。3. 根据权利要求1的方法,其中对组合物中的西酞普兰R-异构体杂质进行限度检查的 步骤(1)中,取草酸艾司西酞普兰片剂组合物细粉适量,其中含有相当于艾司西酞普兰 25mg,精密称定,接着进行后续处理。4. 根据权利要求1的方法,其中对组合物中的西酞普兰R-异构体杂质进行限度检查的 步骤(3)中,所述流动相为甲醇-无水乙醇-三乙胺-冰醋酸四者体积比为50:50:0.1:0.1。5. 根据权利要求1~4任一项的方法,其中对组合物中的西酞普兰R-异构体杂质进行限 度检查的步骤(3)中,所述流动相中用等量的氨丁三醇替换三乙胺。6. 根据权利要求1的方法,其中对组合物中的西酞普兰R-异构体杂质进行限度检查的 步骤(3)中,所述流速为0.6ml/min。7. 根据权利要求1的方法,其中对组合物中的西酞普兰R-异构体杂质进行限度检查的 步骤(3)中,所述检测波长为238nm〇8. 根据权利要求1-7任一项的方法,其中还包括对组合物中的有关物质进行检查,包括 如下步骤: (1) 取草酸艾司西酞普兰片剂组合物细粉适量,其中含有相当于艾司西酞普兰50mg,精 密称定,置100mL量瓶中,加缓冲盐溶液10ml,强力振摇IOmin后,加入40ml甲醇,振摇IOmin 后超声lOmin,待冷却至室温后加流动相稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶 液;所述缓冲盐溶液的配制方法如下:称取1.5g无水醋酸钠,加入0.4ml冰醋酸,加水至 1000 ml,摇匀,用IM的氢氧化钠调节pH至5.2,混匀,即得; (2) 精密量取供试品溶液lml,置100mL量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,作为1.0% 对照溶液(1.0%); (3) 照中国药典2015年版四部第59所第0512节所载的高效液相色谱法中的规范进行测 定,以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,色谱柱的柱长150mm、内径4.6_、填料粒径5μηι,以 缓冲盐溶液-甲醇-乙腈三者体积比为60:33:7的混合液为流动相,流速为1.0 ml/min,检测 波长为239nm,柱温45°C; (4) 取草酸艾司西酞普兰对照品与西酞普兰杂质C对照品适量,用流动相溶解并稀释制 成每1ml中各含I.Oyg的混合溶液,作为系统适用性试验溶液,取ΙΟμΙ注入液相色谱仪,记录 色谱图,艾司西酞普兰与杂质C峰的分离度大于3.0时认为分离效果可接受; (5) 取对照溶液ΙΟμΙ重复进样6次,主峰峰面积的相对标准偏差小于2.0%时认为可接 受;另取对照溶液1〇μ1注入液相色谱仪,调节检测灵敏度,使主成分色谱峰的峰高为满量程 的10%;再精密量取供试品溶液、对照溶液各1〇μ1,分别注入液相色谱仪,记录色谱图至主 峰保留时间的3.5倍; (6) 读取供试品溶液色谱图,如果该色谱图中存在杂质峰,除去溶剂峰和草酸峰,按下 式计算各已知杂质、未知杂质和总杂质百分量: 杂质 % = (Ax/Ar) X (1/F) X 1/100 X 100 其中: Ax:供试品溶液中各个杂质的峰面积 Ar:对照溶液中艾司西酞普兰的峰面积 F:相对响应因子。9. 根据权利要求8的方法,其中对组合物中的有关物质进行检查时,各杂质的相对保留 时间及其相对响应因子如下表: 所述的西酞晋兰杂质C的化学结构如下:所述的艾司西酞普兰杂质A的化学结构如下:所述草酸艾司西酞普兰片剂组合物中包含治疗有效量的草酸艾司西酞普兰,以及硬脂 酸镁,和任选的药学可接受的载体。10.-种草酸艾司西酞普兰片剂组合物,其中包含治疗有效量的草酸艾司西酞普兰,以 及硬脂酸镁,和任选的药学可接受的载体。
【文档编号】G01N30/02GK106018618SQ201610517655
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年7月5日
【发明人】侯奇伟, 李晓云, 余有付, 郭杰, 梁伟
【申请人】湖南洞庭药业股份有限公司
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