胆维丁测定方法
【专利摘要】胆维丁测定方法。提供了一种测定胆维丁、胆固醇和维生素D3的混合物中胆维丁含量的方法，所述方法包括如下步骤：(1)提供不同胆维丁含量的胆维丁、胆固醇和维生素D3的标准混合物；(2)提供上述标准混合物的X衍射光谱；(3)基于上述标准混合物的胆维丁含量以及X衍射光谱中2θ＝4.0°或8.0°的衍射峰高度或面积提供线性回归方程；(4)提供胆维丁、胆固醇和维生素D3的混合物的X衍射光谱；以及(5)基于所述线性回归方程和胆维丁、胆固醇和维生素D3的混合物的X衍射光谱中2θ＝4.0°或8.0°的衍射峰高度或面积确定胆维丁的含量。
【专利说明】
胆维丁测定方法
技术领域
[0001] 本发明涉及胆维丁测定方法，具体涉及测定胆维丁含量的方法。
【背景技术】
[0002] 胆维丁制成的制剂适用于婴幼儿缺维生素 D性佝偻病，也适用于防治骨质疏松 症、肾原性骨病（肾病性佝偻病）、甲状旁腺功能亢进（伴有骨病者）、甲状旁腺功能减退、 营养和吸收障碍引起的佝偻病和骨软化症、假性缺钙（D -依赖型I )的佝偻病和骨软化症 等。
[0003] 胆维丁由维生素 D3、胆固醇组成，其结构是由维生素 D3与胆固醇在羟基上形成等 摩尔非共价键（氢键）结合物。氢键键能最大约为200kJ/mol，一般为5-30kJ/mol，比一般 的共价键、离子键和金属键键能要小，但强于静电引力。所以胆维丁中的氢键不稳定。
[0004] 由于氢键不稳定，胆维丁也可分解成游离维生素 D3和胆固醇。已有的液相方法无 法检测到游离的维生素 D3和游离的胆固醇。
[0005] 现有分析检测方法无法对胆维丁和胆固醇、维生素 D3的混合物进行区分。而且国 外药典标准和中国药典都没有对游离的胆固醇和维生素 D3做为杂质进行控制。现有药典 的含量检测方法也无法准确测出胆维丁的真正含量，含量数据还包括其中包含游离态的维 生素 D3和胆固醇。
[0006] 因此，本领域急需一种测定胆维丁、胆固醇和维生素 D3的混合物中胆维丁及其含 量的方法。
【发明内容】
[0007] 本发明所解决的技术问题是现有的分析手段无法快速区分胆维丁和胆固醇、维生 素 D3的混合物，也无法精确检测出胆维丁真正的含量，胆维丁在液相中出峰时间和游离态 的胆固醇、维生素 D3重合，所测的含量数据中还包括了胆固醇和维生素 D3的量。本发明的 目的是提供一种准确、稳定的检测方法，用于检测胆维丁及其含量。
[0008] 本发明一方面提供了一种测定胆维丁、胆固醇和维生素 D3的混合物中胆维丁含 量的方法，所述方法包括如下步骤：
[0009] (1)提供不同胆维丁含量的胆维丁、胆固醇和维生素 D3的标准混合物；
[0010] (2)提供上述标准混合物的X衍射光谱；
[0011] (3)基于上述标准混合物的胆维丁含量以及X衍射光谱中2 Θ = 4. 0°或8. 0°的 衍射峰高度或面积提供线性回归方程；
[0012] (4)提供胆维丁、胆固醇和维生素 D3的混合物X衍射光谱；以及
[0013] (5)基于所述线性回归方程测定胆维丁、胆固醇和维生素 D3的混合物中胆维丁的 含量。
[0014] 在本发明的一个优选实例中，所述标准混合物中胆维丁含量为1-99重量％ ;优选 地，所述标准混合物中胆维丁含量为1. 5625-98. 4375重量％;优选地，所述标准混合物中胆 维丁的含量分别为1. 5625重量％、3. 125重量％、6. 25重量％、12. 5重量％、25重量％、50 重量％、75重量％、87. 5重量％、93. 75重量％、96. 875重量％、98. 4375重量％
[0015] 在本发明的一个优选实例中，所述标准混合物中胆固醇和维生素 D3重量比为1 : 1〇
[0016] 在本发明的一个优选实例中，所述方法包括如下步骤：
[0017] (1)提供不同胆维丁含量的胆维丁、胆固醇和维生素 D3的标准混合物；
[0018] (2)提供上述标准混合物的X衍射光谱；
[0019] (3)基于上述标准混合物的胆维丁含量以及X衍射光谱中2 Θ = 4. 0°的衍射峰 高度提供线性回归方程；
[0020] (4)提供胆维丁、胆固醇和维生素 D3的混合物的X衍射光谱；以及
[0021] (5)基于所述线性回归方程和胆维丁、胆固醇和维生素 D3的混合物的X衍射光谱 中2Θ =4.0°的衍射峰高度确定胆维丁的含量；
[0022] 在本发明的一个优选实例中，所述方法包括如下步骤：
[0023] (1)提供不同胆维丁含量的胆维丁、胆固醇和维生素 D3的标准混合物；
[0024] (2)提供上述标准混合物的X衍射光谱；
[0025] (3)基于上述标准混合物的胆维丁含量以及X衍射光谱中2 Θ = 4. 0°的衍射峰 面积提供线性回归方程；
[0026] (4)提供胆维丁、胆固醇和维生素 D3的混合物的X衍射光谱；以及
[0027] (5)基于所述线性回归方程和胆维丁、胆固醇和维生素 D3的混合物的X衍射光谱 中2Θ =4.0°的衍射峰面积确定胆维丁的含量；
[0028] 在本发明的一个优选实例中，所述方法包括如下步骤：
[0029] (1)提供不同胆维丁含量的胆维丁、胆固醇和维生素 D3的标准混合物；
[0030] (2)提供上述标准混合物的X衍射光谱；
[0031] (3)基于上述标准混合物的胆维丁含量以及X衍射光谱中2 Θ = 8. 0°的衍射峰 高度提供线性回归方程；
[0032] (4)提供胆维丁、胆固醇和维生素 D3的混合物的X衍射光谱；以及
[0033] (5)基于所述线性回归方程和胆维丁、胆固醇和维生素 D3的混合物的X衍射光谱 中2Θ =8.0°的衍射峰高度确定胆维丁的含量。
[0034] 在本发明的一个优选实例中，所述方法步骤如下步骤：
[0035] (1)提供不同胆维丁含量的胆维丁、胆固醇和维生素 D3的标准混合物；
[0036] (2)提供上述标准混合物的X衍射光谱；
[0037] (3)基于上述标准混合物的胆维丁含量以及X衍射光谱中2 Θ = 8. 0°的衍射峰 面积提供线性回归方程；
[0038] (4)提供胆维丁、胆固醇和维生素 D3的混合物的X衍射光谱；以及
[0039] (5)基于所述线性回归方程和胆维丁、胆固醇和维生素 D3的混合物的X衍射光谱 中2Θ =8.0°的衍射峰面积确定胆维丁的含量。
[0040] 在本发明的一个优选实例中，所述方法还可以包括如下步骤：
[0041] 提供胆维丁、胆固醇和维生素 D3的混合物的拉曼光谱的预检测步骤。
[0042] 本发明还有一方面提供了一种定性检测胆维丁的方法，所述方法包括如下步骤：
[0043] (1)提供样品；
[0044] (2)提供样品的拉曼光谱；以及
[0045] (3)以及基于拉曼光谱中是否存在1640cm 1的特征峰来判断是否存在胆维丁。
[0046] 在本发明的一个优选实例中，所述拉曼光谱是在扫描光线的强度为1-100、优选为 100的条件下得到的；或者，所述拉曼光谱是在扫描时间为500毫秒-30秒、优选为6-10秒 的条件下得到的。
[0047] 本发明的检测方法相比现有检测方法来说可以准确、稳定的检测胆维丁及其含 量。
【附图说明】
[0048] 图1为衍射峰的选择。
[0049] 图2为胆维丁含量与峰高线性回归方程图（2 Θ~4. 0° )-方程A。
[0050] 图3为胆维丁含量与峰面积线性回归方程图（2 Θ~4.0° )-方程B。
[0051] 图4为胆维丁含量与峰高线性回归方程图（2 Θ~8.0° )-方程C。
[0052] 图5为胆维丁含量与峰面积线性回归方程图（2 Θ~8.0° )-方程D。
【具体实施方式】
[0053] 在本发明中，如果没有特别的说明，百分数（％)或者份都指相对于组合物的重量 百分数或者重量份。
[0054] 在本发明中，如果没有特别的说明，所涉及的各组分或其优选组分可以相互组合 形成新的技术方案。
[0055] 在本发明中，如果没有特别的说明，本文所提到的所有实施方式以及优选实施方 式可以相互组合形成新的技术方案。
[0056] 在本发明中，如果没有特别的说明，本文所提到的所有技术特征以及优选特征可 以相互组合形成新的技术方案。
[0057] 在本发明中，如果没有相反的说明，组合物中各组分的含量之和为100%。
[0058] 在本发明中，如果没有相反的说明，组合物中各组分的份数之和可以为100重量 份。
[0059] 在本发明中，除非有其他说明，数值范围"a-b"表示a到b之间的任意实数组合的 缩略表示，其中a和b都是实数。例如数值范围"0-5"表示本文中已经全部列出了 "0-5" 之间的全部实数，" 0-5 "只是这些数值组合的缩略表示。
[0060] 在本发明中，除非有其他说明，整数数值范围"a-b"表示a到b之间的任意整数组 合的缩略表示，其中a和b都是整数。例如整数数值范围"1-N"表示1、2……N，其中N是 整数。
[0061] 在本发明中，除非有其他说明，"其组合"表示所述各元件的多组分混合物，例如两 种、三种、四种以及直到最大可能的多组分混合物。
[0062] 如果没有特别指出，本说明书所用的术语"一种"指"至少一种"。
[0063] 如果没有特别指出，本发明所述的百分数（包括重量百分数）的基准都是所述组 合物的总重量。
[0064] 本文所公开的"范围"以下限和上限的形式。可以分别为一个或多个下限，和一个 或多个上限。给定范围是通过选定一个下限和一个上限进行限定的。选定的下限和上限限 定了特别范围的边界。所有可以这种方式进行限定的范围是包含和可组合的，即任何下限 可以与任何上限组合形成一个范围。例如，针对特定参数列出了 60 - 120和80 - 110的 范围，理解为60 - 110和80 - 120的范围也是预料到的。此外，如果列出的最小范围值1 和2,和如果列出了最大范围值3,4和5,则下面的范围可全郃预料到：1 一 3、1 一 4、1 一 5、 2 - 3、2 - 4、和 2 - 5〇
[0065] 在本文中，除非另有说明，各步骤都在常温常压下进行。
[0066] 在本文中，除非另有说明，各个反应步骤可以顺序进行，也可以不按顺序进行。例 如，各个步骤之间可以包含其他步骤，而且步骤之间也可以调换顺序。优选地，本文中的反 应方法是顺序进行的。
[0067] 本发明的发明人将胆维丁（DWD)、胆固醇（DGC)、维生素 D3 (WSS-D3)的XRPD图谱 放在一起进行比较，如图1所示。结果发现胆维丁的衍射峰中未与胆固醇、维生素 D3的 衍射峰未发生重叠的衍射峰有主要有2Θ~4.0°的衍射峰和2Θ~8.0°的衍射峰，且 2Θ~4.0°的衍射峰为胆维丁的最强衍射峰，2Θ~8.0°的衍射峰为胆维丁的较强衍射 峰，故可以选择2 Θ~4.0°和2 Θ~8.0°的衍射峰作为胆维丁的特征衍射峰对其进行含 量分析。基于上述发现，发明人提出了下述发明。
[0068] 本发明一方面提供了一种测定胆维丁、胆固醇和维生素 D3的混合物中胆维丁含 量的方法，所述方法包括如下步骤：
[0069] (1)提供不同胆维丁含量的胆维丁、胆固醇和维生素 D3的标准混合物；
[0070] (2)提供上述标准混合物的X衍射光谱；
[0071] (3)基于上述标准混合物的胆维丁含量以及X衍射光谱中2 Θ = 4. 0°或8. 0°的 衍射峰高度或面积提供线性回归方程；
[0072] (4)提供胆维丁、胆固醇和维生素 D3的混合物的X衍射光谱；以及
[0073] (5)基于所述线性回归方程和胆维丁、胆固醇和维生素 D3的混合物的X衍射光谱 中2 Θ = 4. 0°或8. 0°的衍射峰高度或面积确定胆维丁的含量。
[0074] 在本发明的一个优选实例中，所述标准混合物中胆维丁含量为1-99重量％。优选 地，所述标准混合物中胆维丁含量为1. 5625-98. 4375重量％。在本发明的另一个优选实 例中，所述标准混合物中胆维丁的含量分别为1. 5625重量％、3. 125重量％、6. 25重量％、 12. 5重量％、25重量％、50重量％、75重量％、87. 5重量％、93. 75重量％、96. 875重量％、 98. 4375 重量 ％
[0075] 在本发明的一个优选实例中，所述标准混合物中胆固醇和维生素 D3重量比为1 : 1〇
[0076] 在本发明的一个优选实例中，基于X衍射光谱中2 Θ = 4.0°或8.0°的衍射峰高 度或面积提供线性回归方程。优选地，基于X衍射光谱中2Θ =4.0°的衍射峰高度提供 线性回归方程。优选地，基于X衍射光谱中2Θ =4.0°的衍射峰面积提供线性回归方程。 优选地，基于X衍射光谱中2Θ =8.0°的衍射峰高度提供线性回归方程。优选地，基于X 衍射光谱中2Θ =8.0°的衍射峰面积提供线性回归方程。
[0077] 在本发明中，所述步骤（5)中选取的衍射峰与线性回归方程中选取的衍射峰相 同。优选地，所述步骤（5)中选取的衍射峰高度或面积与线性回归方程中选取的衍射峰高 度或面积相同。
[0078] 在本发明的一个优选实例中，所述方法包括如下步骤：
[0079] (1)提供不同胆维丁含量的胆维丁、胆固醇和维生素 D3的标准混合物；
[0080] (2)提供上述标准混合物的X衍射光谱；
[0081] (3)基于上述标准混合物的胆维丁含量以及X衍射光谱中2 Θ = 4. 0°的衍射峰 高度提供线性回归方程；
[0082] (4)提供胆维丁、胆固醇和维生素 D3的混合物的X衍射光谱；以及
[0083] (5)基于所述线性回归方程和胆维丁、胆固醇和维生素 D3的混合物的X衍射光谱 中2Θ =4.0°的衍射峰高度确定胆维丁的含量。
[0084] 在本发明的另一个优选实例中，所述方法包括如下步骤：
[0085] (1)提供不同胆维丁含量的胆维丁、胆固醇和维生素 D3的标准混合物；
[0086] (2)提供上述标准混合物的X衍射光谱；
[0087] (3)基于上述标准混合物的胆维丁含量以及X衍射光谱中2 Θ = 4. 0°的衍射峰 面积提供线性回归方程；
[0088] (4)提供胆维丁、胆固醇和维生素 D3的混合物的X衍射光谱；以及
[0089] (5)基于所述线性回归方程和胆维丁、胆固醇和维生素 D3的混合物的X衍射光谱 中2Θ =4.0°的衍射峰面积确定胆维丁的含量。
[0090] 在本发明的另一个优选实例中，所述方法包括如下步骤：
[0091] (1)提供不同胆维丁含量的胆维丁、胆固醇和维生素 D3的标准混合物；
[0092] (2)提供上述标准混合物的X衍射光谱；
[0093] (3)基于上述标准混合物的胆维丁含量以及X衍射光谱中2 Θ = 8. 0°的衍射峰 高度提供线性回归方程；
[0094] (4)提供胆维丁、胆固醇和维生素 D3的混合物的X衍射光谱；以及
[0095] (5)基于所述线性回归方程和胆维丁、胆固醇和维生素 D3的混合物的X衍射光谱 中2Θ =8.0°的衍射峰高度确定胆维丁的含量。
[0096] 在本发明的另一个优选实例中，所述方法步骤如下步骤：
[0097] (1)提供不同胆维丁含量的胆维丁、胆固醇和维生素 D3的标准混合物；
[0098] (2)提供上述标准混合物的X衍射光谱；
[0099] (3)基于上述标准混合物的胆维丁含量以及X衍射光谱中2 Θ = 8. 0°的衍射峰 面积提供线性回归方程；
[0100] (4)提供胆维丁、胆固醇和维生素 D3的混合物的X衍射光谱；以及
[0101] (5)基于所述线性回归方程和胆维丁、胆固醇和维生素 D3的混合物的X衍射光谱 中2Θ =8.0°的衍射峰面积确定胆维丁的含量。
[0102] 本发明的发明人还发现维生素 D3在拉曼位移1650cm1位置明显出峰，胆固醇在 拉曼位移1440cm1、1675cm 1位置明显出峰，胆维丁在拉曼位移1640cm 1位置明显出峰。因 此，通过观察拉曼图谱可以快速鉴定胆维丁。当拉曼图谱中拉曼位移1640cm1位置出峰明 显，而在1650cm 1位置和1440cm \l675cm1位置没有出峰，可以鉴定样品为胆维丁。当在 1650cm1位置和1440cm \l675cm1位置出峰明显，而在拉曼位移1640cm 1位置没有明显出 峰，就是样品中不含有胆维丁，样品为胆固醇和维生素 D3的混合物。
[0103] 因此，本发明的上述方法还可以包括如下步骤：
[0104] 提供胆维丁、胆固醇和维生素 D3的混合物的拉曼光谱的预检测步骤。
[0105] 本发明还有一方面提供了一种定性检测胆维丁的方法，所述方法包括如下步骤：
[0106] (1)提供样品；
[0107] ⑵提供样品的拉曼光谱；以及
[0108] (3)以及基于拉曼光谱中是否存在1640cm 1的特征峰来判断是否存在胆维丁。
[0109] 在本发明的一个优选实例中，所述提供样品的步骤如下：平铺样品厚度为0. 3毫 米-3厘米，较好1-2厘米，最好1厘米。
[0110] 在本发明的一个优选实例中，所述提供样品的步骤如下：平铺面积至少为〇. 5平 方厘米。最好为1平方厘米左右。
[0111] 在本发明的一个优选实例中，所述拉曼光谱是在扫描光线的强度为1-1〇〇、优选为 100的条件下得到的。
[0112] 在本发明的一个优选实例中，所述拉曼光谱是在扫描时间为500毫秒-30秒、优选 为6-10秒的条件下得到的。
[0113] 下面结合实施例进一步说明本发明，它们对本发明提供说明但本发明并不限于 此。
[0114] 实施例
[0115] 样品与试剂：胆维丁（批号：20131016生产企业：上海信谊药厂有限公司药物研 究所）；
[0116] 维生素 D3(批号：20130104生产企业：四川玉馨）
[0117] 胆固醇（批号：20131010,上海信谊药厂有限公司）；
[0118] 仪器与设备：粉末X射线衍射仪德国Bruker AXS仪器有限公司，仪器型号： D8ADVANCE。
[0119] 实施例1 :线性关系考察
[0120] 取相同质量的胆固醇和维生素 D3混合均匀，制成DSC:WSS_D3 = 1:1的混合物 ⑴。
[0121] 按制剂混合规则，将胆维丁与混合物（1)配制成胆维丁含量分别为1. 5625%、 3.125%、6.25%、12.5%、25%、50%、75%、87.5%、93.75%、96.875%、98.4375%的混合 样品。
[0122] 取上述混合样品各50mg(每个含量平行3次），进行XRPD实验，记录XRPD图谱。
[0123] 1方程A(胆维丁含量与2 Θ~4. 0°处的峰高值线性回归方程）
[0124] 以胆维丁含量为横坐标（X)，2 Θ~4. 0°的衍射峰峰高度（Y)为纵坐标进行线性 回归，得方程A，结果见表1，图2。
[0125] 表1胆维丁含量与峰高线性考察结果（2 Θ~4. 0° )-方程A
[0126]
[0127]
[0128] 2方程B(胆维丁含量与2 Θ~4. 0°处的峰面积值线性回归方程）
[0129] 以胆维丁含量为横坐标（X)，2 Θ~4. 0°的衍射峰峰面积（Y)为纵坐标进行线性 回归，得方程B，结果见表2,图3。
[0130] 表2胆维丁含量与峰面积线性考察结果（2 Θ~4. 0° )-方程B
[0131]
[0132]
[0133] 3方程C(胆维丁含量与2Θ~8.0°处的峰高值线性回归方程）
[0134] 以胆维丁含量为横坐标（X)，2 Θ~8. 0°的衍射峰峰高度（Υ)为纵坐标进行线性 回归，得方程C，结果见表3,图4。
[0135] 表3胆维丁含量与峰高线性考察结果（2 Θ~8. 0° )-方程C
[0136]
[0137]
[0138] 4方程D(胆维丁含量与2 Θ~8. 0°处的峰面积值线性回归方程）
[0139] 以胆维丁含量为横坐标（X)，2 Θ~8. 0°的衍射峰峰面积（Y)为纵坐标进行线性 回归，得方程D，结果见表4,图5。
[0140] 表4胆维丁含量与峰面积线性考察结果（2 Θ~8. 0° )-方程D
[0141]
[0142]
[0143] 实施例2 :精密度
[0144] 低含量（25% )样品：配置胆维丁含量为25%的样品，从中取6份50mg的样品进 行XRH)实验。
[0145] 中含量（50% )样品：配置胆维丁含量为50%的样品，从中取6份50mg的样品进 行XRH)实验。
[0146] 高含量（75% )样品：配置胆维丁含量为75%的样品，从中取6份50mg的样品进 行XRH)实验。
[0147] 1.方程A的精密度
[0148] 读取2 Θ~4.0°的衍射峰峰高值进行精密度考察结果见表5.
[0149] 表5.方程A的精密度实验结果
[0150]
[0151]
[0152] 2.方程B的精密度
[0153] 读取2 Θ~4.0°的衍射峰峰面积值进行精密度考察结果见表6.
[0154] 表6.方程B的精密度实验结果
[0155]
[0156]
[0157] 3.方程C的精密度
[0158] 读取2 Θ~8.0°的衍射峰峰高值进行精密度考察结果见表7.
[0159] 表7.方程C的精密度实验结果
[0160]
[0161] 4.方程D的精密度
[0162] 读取2 Θ~8.0°的衍射峰峰面积值进行精密度考察结果见表8.
[0163] 表8.方程D的精密度实验结果
[0164]
[0165]
[0166] 实施例3:准确度
[0167] 低含量（25% )样品：平行配置胆维丁含量为25%的样品6份，每份各取50mg的 样品进彳丁 XRPD实验。
[0168] 中含量（50% )样品：平行配置胆维丁含量为50%的样品6份，每份各取50mg的 样品进彳丁 XRPD实验。
[0169] 高含量（75% )样品：平行配置胆维丁含量为75%的样品6份，每份各取50mg的 样品进彳丁 XRPD实验。
[0170] 1.方程A的准确度
[0171] 读取2 Θ~4.0°的衍射峰峰高值进行准确度考察结果见表9。
[0172] 表9.方程A的准确度实验结果
[0173]
[0174]
[0175] 2.方程B的准确度
[0176] 读取2 Θ~4.0°的衍射峰峰面积值进行准确度考察结果见表10。
[0177] 表10.方程B的准确度实验结果
[0178]
[0179]
[0180] 3.方程C的准确度
[0181] 读取2 Θ~8.0°的衍射峰峰高值进行准确度考察结果见表11。
[0182] 表11.方程C的重复性实验结果
[0183]
[0184] 4.方程D的准确度
[0185] 读取2 Θ~8.0°的衍射峰峰面积值进行准确度考察结果见表11。
[0186] 表11.方程D的准确度实验结果
[0187]
[0188]
[0189] 实施例4:稳定性
[0190] 配置胆维丁含量为95%的样品1份，取50mg，分别于0h、3h、6h、12h、24h进行XRPD 试验。
[0191] 1.方程A的稳定性
[0192] 读取2 Θ~4.0°的衍射峰峰高值进行方程A的样品稳定性考察，结果见表12。
[0193] 表12.方程A的稳定性实验结果
[0194]
[0195] 2.方程B的稳定性
[0196] 读取2 Θ~4.0°的衍射峰峰面积值进行方程B的样品稳定性考察，结果见表13.
[0197] 表13.方程B的稳定性实验结果
[0198]
[0199] 3.方程C的稳定性
[0200] 读取2 Θ~8.0°的衍射峰峰高值进行方程A的样品稳定性考察，结果见表14。
[0201] 表14.方程C的稳定性实验结果
[0202]
[0203] 4.方程D的稳定性
[0204] 读取2 Θ~8. 0°的衍射峰峰面积值进行方程D的样品稳定性考察，结果见表15。
[0205] 表15.方程D的稳定性实验结果
[0206]
[0207] 实施例5 :方向学验证信息汇总
[0208] 本实施例按制剂混合规则，制备了胆维丁含量分别为1. 5625%、3. 125%、6. 25%、 12. 5 %、25 %、50 %、75 %、87· 5 %、93· 75 %、96· 875 %、98· 4375 % 的混合样品。选取 2 Θ~4. 0°和2 Θ~8. 0°两个衍射峰作为胆维丁的特征峰，分别以其峰高值和峰面积值 进行线性方程考察，得到了 A、B、C、D4个回归方程，并对四个方程进行了精密度、准确度、样 品稳定性考察，结果见表16。
[0209] 表16.方法学验证信息汇总表
[0210]
[0211] 经上述比较发现，方程A的线性相关系数为R2 = 0. 997,为四个方程中最又，方程 C的线性相关系数为R2 = 0. 991为4个方程中最差。在精密度、准确度、稳定性的方面，方 程A和方程C的RSD值最大值均小于4 %，方程B的RSD值最大值为4. 23 %、方程D的RSD 值最大值达到8. 31 %。稳定性方面，4个方程的RSD值均小于2 %。综上所述，最终采用方 程A(即：横坐标为胆维丁含量，纵坐标为2Θ~4.0°处衍射峰的峰高值的线性回归方程） 对混合样品中胆维丁含量进行分析。
[0212] 实施例6 :样品检测结果（回收率）
[0213] 20%含量样品：平行配置胆维丁含量为20%的样品5份，每份各取50mg的样品进 行XRH)实验。
[0214] 75%含量样品：平行配置胆维丁含量为75%的样品5份，每份各取50mg的样品进 行XRH)实验。
[0215] 90%含量样品：平行配置胆维丁含量为90%的样品5份，每份各取50mg的样品进 行XRH)实验。
[0216] 读取2 Θ~4.0°的衍射峰峰高值进行代入线性回归方程A，计算混合样品总胆维 丁的含量及回收率，见表17。
[0217] 表17.方程A的样品测试（回收率）实验结果
[0218]
[0219] 实验结果表明：采用方程A对胆维丁含量为20%、75%、90%的样品进行测试时， 含量为20%的样品回收率最小值为92. 65%、最大值为100. 37%，RSD值为4. 56% ;含量为 75%的样品回收率最小值为101. 88%、最大值为107. 23%，RSD值为2.03% ;含量为90% 的样品回收率最小值为97. 25%、最大值为102. 28%，RSD值为2. 07% ;同一含量的RSD值 均小于5%。
[0220] 实施例7 :测定胆维丁稳定性样品的含量
[0221] 分别取待测胆维丁样品1、样品2、样品3、样品4、样品5、样品6适量，分别研磨 过100目筛，称取过筛后的样品50mg，仪器参数调到测角仪半径为600_，数据收集范围为 2Θ = 3.0-45.0°，扫描速度为每分钟8.0°，进行粉末X射线衍射测定，读取2Θ~4.0° 处的衍射峰峰高值，乘以仪器校正因子后，代入线性回归方程：Y = 20435X-23. 87,即X = (Υ+23. 87)/20435,计算待测样品中胆维丁含量，每个待测样品平行测定2次，取平均值。
[0222] 为了方便结果比较，将上述结果列表比较如下表所示：
[0223]
【主权项】
1. 一种测定胆维丁、胆固醇和维生素 D3的混合物中胆维丁含量的方法，所述方法包括 如下步骤： (1) 提供不同胆维丁含量的胆维丁、胆固醇和维生素 D3的标准混合物； (2) 提供上述标准混合物的X衍射光谱； (3) 基于上述标准混合物的胆维丁含量以及X衍射光谱中2 Θ = 4.0°或8.0°的衍射 峰高度或面积提供线性回归方程； (4) 提供胆维丁、胆固醇和维生素 D3的混合物的X衍射光谱；以及 (5) 基于所述线性回归方程和胆维丁、胆固醇和维生素 D3的混合物的X衍射光谱中 2Θ =4.0°或8.0°的衍射峰高度或面积确定胆维丁的含量。2. 如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述标准混合物中胆维丁含量为1-99重 量％ ;优选地，所述标准混合物中胆维丁含量为1. 5625-98. 4375重量％ ;优选地，所述标准 混合物中胆维丁的含量分别为1. 5625重量％、3. 125重量％、6. 25重量％、12. 5重量％、25 重量％、50重量％、75重量％、87.5重量％、93.75重量％、96.875重量％、98.4375重量％。3. 如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述标准混合物中胆固醇和维生素 D3重量 比为1 :1。4. 如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤： (1) 提供不同胆维丁含量的胆维丁、胆固醇和维生素 D3的标准混合物； (2) 提供上述标准混合物的X衍射光谱； (3) 基于上述标准混合物的胆维丁含量以及X衍射光谱中2Θ =4.0°的衍射峰高度 提供线性回归方程； (4) 提供胆维丁、胆固醇和维生素 D3的混合物的X衍射光谱；以及 (5) 基于所述线性回归方程和胆维丁、胆固醇和维生素 D3的混合物的X衍射光谱中 2Θ =4.0°的衍射峰高度确定胆维丁的含量。5. 如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤： (1) 提供不同胆维丁含量的胆维丁、胆固醇和维生素 D3的标准混合物； (2) 提供上述标准混合物的X衍射光谱； (3) 基于上述标准混合物的胆维丁含量以及X衍射光谱中2Θ =4.0°的衍射峰面积 提供线性回归方程； (4) 提供胆维丁、胆固醇和维生素 D3的混合物的X衍射光谱；以及 (5) 基于所述线性回归方程和胆维丁、胆固醇和维生素 D3的混合物的X衍射光谱中 2Θ =4.0°的衍射峰面积确定胆维丁的含量。6. 如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤： (1) 提供不同胆维丁含量的胆维丁、胆固醇和维生素 D3的标准混合物； (2) 提供上述标准混合物的X衍射光谱； (3) 基于上述标准混合物的胆维丁含量以及X衍射光谱中2Θ =8.0°的衍射峰高度 提供线性回归方程； (4) 提供胆维丁、胆固醇和维生素 D3的混合物的X衍射光谱；以及 (5) 基于所述线性回归方程和胆维丁、胆固醇和维生素 D3的混合物的X衍射光谱中 2Θ =8.0°的衍射峰高度确定胆维丁的含量。7. 如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法步骤如下步骤： (1) 提供不同胆维丁含量的胆维丁、胆固醇和维生素 D3的标准混合物； (2) 提供上述标准混合物的X衍射光谱； (3) 基于上述标准混合物的胆维丁含量以及X衍射光谱中2Θ =8.0°的衍射峰面积 提供线性回归方程； (4) 提供胆维丁、胆固醇和维生素 D3的混合物的X衍射光谱；以及 (5) 基于所述线性回归方程和胆维丁、胆固醇和维生素 D3的混合物的X衍射光谱中 2Θ =8.0°的衍射峰面积确定胆维丁的含量。8. 如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还可以包括如下步骤： 提供胆维丁、胆固醇和维生素 D3的混合物的拉曼光谱的预检测步骤。9. 一种定性检测胆维丁的方法，所述方法包括如下步骤： (1) 提供样品； (2) 提供样品的拉曼光谱；以及 (3) 以及基于拉曼光谱中是否存在1640cm1的特征峰来判断是否存在胆维丁。10. 如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述拉曼光谱是在扫描光线的强度为 1-100、优选为100的条件下得到的；或者，所述拉曼光谱是在扫描时间为500毫秒-30秒、 优选为6-10秒的条件下得到的。
【文档编号】G01N21/65GK106033064SQ201510106721
【公开日】2016年10月19日
【申请日】2015年3月10日
【发明人】戴健, 孙宁云, 沈康宁, 陈磊, 姜玲
【申请人】上海信谊药厂有限公司