一种基于片状黑磷的人成纤维细胞生长因子免疫传感器的制备方法
【专利摘要】本发明涉及一种基于片状黑磷的人成纤维细胞生长因子免疫传感器的制备方法，属于新型生物传感检测技术领域。片状黑磷具有类似石墨烯性质的结构，具有良好的导电性。同时离子液体作为片状黑磷的分散剂，将其应用在免疫传感器的基底。同时，利用铂纳米片将底层材料和抗体牢牢地结合起来，增强传感器的稳定性。利用底液中性红为信号，实现了对人成纤维细胞生长因子的超灵敏检测。
【专利说明】
一种基于片状黑磷的人成纤维细胞生长因子免疫传感器的制备方法
技术领域
[0001]本发明涉及一种基于片状黑磷的人成纤维细胞生长因子免疫传感器的制备方法，采用黑磷@离子液体复合材料作为检测基底材料，增强导电性的同时，又能增加信号分子在传感表面的固载量上，通过铂纳米片的交联作用，制备一种检测人成纤维细胞生长因子的电化学免疫传感器，属于新型功能材料与生物传感检测技术领域。
技术背景
[0002]人成纤维细胞生长因子可以由内皮细胞、平滑肌细胞、巨噬细胞分泌。它的作用是促进内皮细胞的游走和平滑肌细胞的增殖，能够促进新血管形成，修复损害的内皮细胞。同时，它能加强胃肠功能，促进消化酶的分解，增进食欲，治疗慢性胃炎。
[0003]目前对于人成纤维细胞生长因子的检测方法不是很多，主要以酶联免疫法为主。但是酶联免疫法存在着来自代谢物的干扰，其交叉反应性能显著干扰生物利用度的测定；也可影响蛋白多肽类药物的清除和药理作用，并对其定量测定产生影响。免疫传感器是将免疫学方法与分析化学方法相结合的一种生物传感器，通过抗原与抗体之间的特异性结合，构建了操作简便、结构简单、选择性好、灵敏度高的免疫传感器。本发明制备了一种基于片状黑磷的人成纤维细胞生长因子免疫传感器。
[0004]本发明采用黑磷与离子液体作用形成的复合材料为基底材料，实现了信号分子的高通量负载。同时，铂纳米片在免疫传感器中的使用，既保证了稳定性，又增加了人成纤维细胞生长因子抗体的负载，实现了人成纤维细胞生长因子的灵敏检测。该方法具有成本低、特异性好、检测快速等优点，而且制备过程较为简单，有效克服了目前人成纤维细胞生长因子检测方法的不足。
【发明内容】
[0005]本发明的目的之一是基于黑磷@离子液体POIL复合材料为基底材料，构建了一种无酶，超灵敏的电化学免疫传感器。
[0006]本发明的目的之二是通过一锅法合成铂纳米片。
[0007]本发明的目的之三是将铂纳米片作为检测抗体的负载物，实现了对人成纤维细胞生长因子的超灵敏检测。
[0008]本发明的技术方案如下
I.一种基于片状黑磷的人成纤维细胞生长因子免疫传感器的制备方法
(1)将直径4mm的玻碳电极用Al2O3抛光粉打磨，超纯水洗净;将5?8 yU0.5?3.5mg/mL黑磷O离子液体POIL复合材料滴加到电极表面，超纯水冲洗，室温下晾干成膜；
(2)滴加5?8HL的铂纳米片在电极表面，超纯水冲洗，室温下晾干；
(3)滴加5?8UL人成纤维细胞生长因子FGF抗体标准溶液于电极表面，超纯水冲洗，4°C冰箱中晾干； (4)滴加5?8uL质量分数为0.5%?1.5%的牛血清白蛋白BSA溶液于电极表面，超纯水冲洗，4 °C冰箱中晾干；
(5)滴加5?8HU0.006?10 ng/mL的一系列不同浓度的人成纤维细胞生长因子FGF抗原标准溶液至电极表面，超纯水冲洗，4 V冰箱中晾干。
[0009]2.黑磷@离子液体POIL复合材料的制备
取0.1 ~ 1.0 mg的片状黑磷加入到0.5?5 mL的离子液体1-丁基-3-甲基咪卩坐四氟硼酸盐BM頂.BF4中，振荡2?24 h，得到复合材料黑磷O离子液体P0IL。
[0010]3.铂纳米片的制备
将30?100 mg乙酰丙酮铂，100?500 mg聚乙烯吡咯烷酮，100?500 mg的十六烷基三甲基溴化铵加入到10?100 mL的N，N-二甲基丙酰胺中。将所得到的溶液在120°C，⑶气氛中下反应3?48 h。反应结束后将得到的黑色固体用丙酮洗涤，离心分离，干燥后得到铂纳米片。
[0011]本发明有益成果
(I)黑磷的使用，实现了对传感器底层比表面积成功放大，同时能够很好的促进电极表面的电子传递，实现了高通量负载。
[0012](2)黑磷O离子液体POIL复合材料的使用，使得生物分子的负载量大大提升，扩展了传感器的线性范围，降低了检出限。
[0013](3)铂纳米片的使用，增加了传感器表面的电子传输能力，增强了传感器的稳定性，实现了超灵敏稳定检测。
【具体实施方式】
[0014]实施例1
一种基于片状黑磷的人成纤维细胞生长因子免疫传感器的制备方法
(1)将直径4mm的玻碳电极用Al2O3抛光粉打磨，超纯水洗净;将5 yU0.5 mg/mL黑磷O离子液体POIL复合材料滴加到电极表面，超纯水冲洗，室温下晾干成膜；
(2)滴加5HL的铂纳米片在电极表面，超纯水冲洗，室温下晾干；
(3)滴加5UL人成纤维细胞生长因子FGF抗体标准溶液于电极表面，超纯水冲洗，4°C冰箱中晾干；
(4)滴加5UL质量分数为0.5%的牛血清白蛋白BSA溶液于电极表面，超纯水冲洗，4°C冰箱中晾干；
(5)滴加5UU0.006?10 ng/mL的一系列不同浓度的人成纤维细胞生长因子FGF抗原标准溶液至电极表面，超纯水冲洗，4 V冰箱中晾干。
[0015]实施例2
一种基于片状黑磷的人成纤维细胞生长因子免疫传感器的制备方法
(1)将直径4mm的玻碳电极用Al2O3抛光粉打磨，超纯水洗净;将6.5 yUl.5 mg/mL黑磷@离子液体POIL复合材料滴加到电极表面，超纯水冲洗，室温下晾干成膜；
(2)滴加6.5HL的铂纳米片在电极表面，超纯水冲洗，室温下晾干；
(3)滴加6.5UL人成纤维细胞生长因子FGF抗体标准溶液于电极表面，超纯水冲洗，4°C冰箱中晾干； (4)滴加6.5uL质量分数为1.0%的牛血清白蛋白BSA溶液于电极表面，超纯水冲洗，4°C冰箱中晾干；
(5)滴加6.5UU0.006?10 ng/mL的一系列不同浓度的人成纤维细胞生长因子FGF抗原标准溶液至电极表面，超纯水冲洗，4 V冰箱中晾干。
[0016]实施例3
一种基于片状黑磷的人成纤维细胞生长因子免疫传感器的制备方法
(1)将直径4mm的玻碳电极用Al2O3抛光粉打磨，超纯水洗净;将8 pL,3.5 mg/mL黑磷O离子液体POIL复合材料滴加到电极表面，超纯水冲洗，室温下晾干成膜；
(2)滴加8HL的铂纳米片在电极表面，超纯水冲洗，室温下晾干；
(3)滴加8UL人成纤维细胞生长因子FGF抗体标准溶液于电极表面，超纯水冲洗，4°C冰箱中晾干；
(4)滴加8UL质量分数为1.5%的牛血清白蛋白BSA溶液于电极表面，超纯水冲洗，4°C冰箱中晾干；
(5)滴加8UU0.006?10 ng/mL的一系列不同浓度的人成纤维细胞生长因子FGF抗原标准溶液至电极表面，超纯水冲洗，4 V冰箱中晾干。
[0017]实施例4
黑磷@离子液体PO IL复合材料的制备
取0.1 mg的片状黑磷加入到0.5 mL的离子液体1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐BMIM.BF4中，振荡2 h，得到复合材料黑磷O离子液体P0IL。
[0018]实施例5
黑磷@离子液体PO IL复合材料的制备
取0.8 mg的片状黑磷加入到3.2 mL的离子液体1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐BMIM.BF4中，振荡8 h，得到复合材料黑磷O离子液体P0IL。
[0019]实施例6
黑磷@离子液体PO IL复合材料的制备
取1.0 mg的片状黑磷加入到5 mL的离子液体1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐BM頂.BF4中，振荡24 h，得到复合材料黑磷O离子液体P0IL。
[0020]实施例7
钼纳米片的制备
将30 mg乙酰丙酮铂，100 mg聚乙烯吡咯烷酮，100 mg的十六烷基三甲基溴化铵加入到10 mL的N，N-二甲基丙酰胺中。将所得到的溶液在120°C，⑶气氛中下反应3 h。反应结束后将得到的黑色固体用丙酮洗涤，离心分离，干燥后得到铂纳米片。
[0021 ] 实施例8
钼纳米片的制备
将80 mg乙酰丙酮铂，200 mg聚乙烯吡咯烷酮，300 mg的十六烷基三甲基溴化铵加入到70 mL的N，N-二甲基丙酰胺中。将所得到的溶液在120°C，C0气氛中下反应18 h。反应结束后将得到的黑色固体用丙酮洗涤，离心分离，干燥后得到铂纳米片。
[0022] 实施例9
钼纳米片的制备将100 mg乙酰丙酮铂，500 mg聚乙烯吡咯烷酮，500 mg的十六烷基三甲基溴化铵加入至Ij 100 mL的N，N-二甲基丙酰胺中。将所得到的溶液在120 °C，⑶气氛中下反应48 h。反应结束后将得到的黑色固体用丙酮洗涤，离心分离，干燥后得到铂纳米片。
【主权项】
1.一种基于片状黑磷的人成纤维细胞生长因子免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)将直径4mm的玻碳电极用Al2O3抛光粉打磨，超纯水洗净;将5?8 yU0.5?3.5mg/mL黑磷O离子液体POIL复合材料滴加到电极表面，超纯水冲洗，室温下晾干成膜； (2)滴加5?8HL的铂纳米片在电极表面，超纯水冲洗，室温下晾干； (3)滴加5?8UL人成纤维细胞生长因子FGF抗体标准溶液于电极表面，超纯水冲洗，4°C冰箱中晾干； (4)滴加5?8UL质量分数为0.5%?1.5%的牛血清白蛋白BSA溶液于电极表面，超纯水冲洗，4 °C冰箱中晾干； (5)滴加5?8HU0.006?10 ng/mL的一系列不同浓度的人成纤维细胞生长因子FGF抗原标准溶液至电极表面，超纯水冲洗，4 V冰箱中晾干。2.如权利要求1所述的一种基于片状黑磷的人成纤维细胞生长因子免疫传感器的制备方法，所述的黑磷@离子液体POIL复合材料，其特征在于，包括以下步骤: 取0.1?1.0 mg的片状黑磷加入到0.5?5 mL的离子液体1-丁基-3-甲基咪卩坐四氟硼酸盐BM頂.BF4中，振荡2?24 h，得到复合材料黑磷O离子液体P0IL。3.如权利要求1所述的一种基于片状黑磷的人成纤维细胞生长因子免疫传感器的制备方法，所述的铂纳米片，其特征在于，包括以下步骤: 将30?100 mg乙酰丙酮铂，100?500 mg聚乙烯吡咯烷酮，100?500 mg的十六烷基三甲基溴化铵加入到10?100 mL的N，N-二甲基丙酰胺中，将所得到的溶液在120°C，⑶气氛中下反应3?48 h，反应结束后将得到的黑色固体用丙酮洗涤，离心分离，干燥后得到铂纳米片。
【文档编号】G01N27/26GK106053557SQ201610339989
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年5月23日
【发明人】魏琴, 任祥, 闫涛, 王耀光, 吴丹, 孙旭, 李悦源, 李燕
【申请人】济南大学