甲磺酸非诺多泮及其制剂的一种高效液相分析方法
【专利摘要】本发明公开了一种甲磺酸非诺多泮及其制剂的含量及有关物质检测控制方法，该方法采用高效液相色谱法检测甲磺酸非诺多泮及其制剂。本发明通过大量实验优选出最佳流动相组成、流速、检测波长和色谱柱等分析条件，经多次实验验证表明，本发明提供的甲磺酸非诺多泮及其制剂的含量及有关物质检测控制方法，稳定性和重复性好、分析效率高、分离度好，可以灵敏准确的定性、定量检测甲磺酸非诺多泮及其有关物质，从而可以客观、全面、准确的评价甲磺酸非诺多泮及其制剂的质量，对甲磺酸非诺多泮及其制剂的质量和保证临床疗效具有重要意义。
【专利说明】
甲磺酸非诺多泮及其制剂的一种高效液相分析方法
技术领域
[0001] 本发明属于药物新技术领域，涉及一种用于改善高血压症状的药物甲磺酸非诺多 泮及其制剂分析测定方法，具体说是一种高效液相色谱法，采用紫外检测器，利用特征峰吸 收，选用适当的流动相，对甲磺酸非诺多泮及其制剂进行有关物质分析和含量测定。
【背景技术】
[0002] 甲磺酸非诺多泮(Fenoidopan Mesylate)是由爱尔兰Elan研制开发的一种D1类多 巴胺受体激动剂，于1998年最先在美国上市。甲磺酸非诺多泮作用于重症高血压短期治疗 的药物，是强效血管扩张剂，化学名为6-氯-2,3,4,5-四氢-1-(4-羟苯基)-[1扪-3-苯并氮 杂卓-7，8_二醇甲磺酸盐。临床显示甲磺酸非诺多泮能降低血压，增加肾血流量并促进利 尿、利钠。甲磺酸非诺多泮副作用小，无正性肌力和扩张静脉活性，也不通过血脑屏障而导 致中枢作用，是目前用于重症高血压治疗效果较好的药物。
[0003] 根据文献报道及国家药品标准，测定甲磺酸非诺多泮及其制剂采用高效液相分析 方法有： 美国药典36版收载的原料含量的方法。
[0004] 照高效液相色谱法（中国药典2015年版通则0512 )。
[0005] 色谱条件与系统适用性试验：用苯烷基键合硅胶为填充剂色谱柱；以16.33g磷酸 二氢钾(每2000ml含2ml三乙胺，用磷酸调pH值至2.5)-甲醇（19:1)。检测波长:225nm;流速： 1.7ml/min;进样体积:20yl。理论塔板数按甲磺酸非诺多泮峰计算应不低于2000，甲磺酸非 诺多泮峰与杂质A峰的分离度应大于1.5;拖尾因子应小于1.3. 系统适用性储备液的制备:取甲磺酸非诺多泮原料50mg，置于50ml容量瓶中，用流动相 溶解稀释至刻度即得。
[0006] 系统适用性溶液的制备:取非诺多泮杂质A对照品5mg，置于50ml容量瓶中，加25ml 流动相溶解，在加5ml系统适用性储备液，用流动相溶解稀释至刻度即得。
[0007] 测定法:精密量取5ml系统适用性储备液于50ml容量瓶中，用流动相溶解并稀释至 刻度，作为供试品溶液；另取甲磺酸非诺多泮对照品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释 成每lml含0. lmg的溶液。精密量取供试品溶液与对照品溶液各20yl，记录色谱图，按外标法 以峰面积计算，既得。
[0008] 美国药典36版收载的原料有关物质的方法。
[0009] 取本品，用流动相溶解稀释成每lml中含lmg的溶液，作为供试品溶液;精密量取 lml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。照高效液相色谱法（中国 药典2015年版通则0512)测定。用苯烷基键合硅胶为填充剂色谱柱；以流动相A: 16.33g磷酸 二氢钾(每2000ml含2ml三乙胺，用磷酸调pH值至2.5):甲醇（19:1);流动相B:甲醇，按下表 进行梯度洗脱。检测波长:225nm;流速：1.7ml/min。精密量取供试品溶液和对照溶液各20y 1，分别注入液相色谱仪。供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，杂质A峰的峰面积不得大于 0.3%，单个杂质峰的峰面积不得大于0.1%，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液的主峰面 积。
美国药典36版收载的制剂含量的方法 色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基键合硅胶柱为填充剂色谱柱；以：1.38g磷酸 二氢钠一水合物+己烷磺酸钠1.888，加水10001^，磷酸（1-9)调口112.5)-甲醇(67:33)，检测 波长:225nm;流速：1.0ml/min;进样体积：lOyl。理论塔板数按甲磺酸非诺多泮峰计算应不 低于1800,甲磺酸非诺多泮峰与杂质B峰的分离度应大于1.5;拖尾因子应小于2.0。
[0011] 稀释液的配制：取磷酸二氢钠一水合物1.38g，加水lOOOmL，磷酸（1-9)调pH2.5， 即得。
[0012]系统适用性溶液的制备:取非诺多泮-杂质B 2.74mg，置于100ml容量瓶中，用稀释 液溶解稀释至刻度即得。
[0013]测定法:精密量取本品0.5ml，置于25ml容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，作 为供试品溶液;另取甲磺酸非诺多泮对照品26.3mg，精密称定，置于100ml容量瓶中，加75ml 稀释液溶解，再加lml系统适用性溶液，摇匀，用稀释液溶解至刻度，作为对照品溶液。精密 量取供试品溶液与对照品溶液各l〇yl，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得。
[0014] 美国药典36版收载的制剂有关物质的方法 精密量取本品〇. 5ml，置于25ml容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，作为供试品溶 液;对照品溶液同含量测定项下。照高效液相色谱法（中国药典2015年版通则0512)测定。用 十八烷基键合硅胶柱为填充剂色谱柱；以：1.38g磷酸二氢钠一水合物+己烷磺酸钠1.88g， 加水 1000mL，磷酸（1-9)调 pH2.5)_ 甲醇(67:33)，检测波长:22511111;流速：1.〇1111/111111。精密量 取供试品溶液和对照品溶液各l〇yl，分别注入液相色谱仪。供试品溶液的色谱图中，记录色 谱图，按外标法以峰面积计算，杂质B不得过0.6%。
【发明内容】
[0015] 本发明目的在于提供一种稳定性好、重复性好、操作简单、理论塔板数高、杂质检 出量高，用于甲磺酸非诺多泮及其制剂的分析测定方法。应用该方法测定治疗高血压症状 的药物甲磺酸非诺多泮及其制剂，方便可行，准确度高，对人体和环境造成的危害小。
[0016] 本发明解决上述技术问题所采用的技术方案是:采用高效液相色谱法，将甲磺酸 非诺多泮及其制剂用流动相溶解稀释成每lml中含甲磺酸非诺多泮0.04mg~0.5mg的溶液作 为供试品溶液，注入高效液相色谱仪，利用紫外检测器，检测波长为220~240nm，甲醇-磷酸 盐溶液作为流动相，磷酸盐溶液中加入拖尾剂，流动相流速为〇. 5~2.0ml/min，采用固定相 烷基键合硅胶色谱柱，对甲磺酸非诺多泮及其制剂的有关物质和含量进行测定。其中所述 的流动相中含甲醇的比例范围为20%~70%，含磷酸盐溶液的体积比例范围为30%~80%。
[0017] 所述的拖尾剂为三乙胺，在磷酸盐溶液中所含的体积比例范围为0.05%~0.5%。
[0018] 在上述技术方案基础上，所述的固定相烷基键合硅胶为十八烷基键合硅胶。
[0019] 在上述技术方案基础上，所述的磷酸盐溶液为磷酸二氢钾溶液。
[0020] 在上述技术方案基础上，所述的磷酸盐溶液为磷酸二氢钾溶液，其中磷酸二氢钾 溶液的摩尔浓度为〇. 〇1~〇. 05m〇l/l，最佳为0.03mol/l。
[0021] 在上述技术方案基础上，所述的检测波长为225nm，供试品溶液含甲磺酸非诺多泮 为0.3mg/ml，进样体积为20yl，流动相流速为lml/min，三乙胺在磷酸盐溶液中所含体积比 例范围为0.1%。
[0022] 有益效果:本发明提供的甲磺酸非诺多泮及其制剂的质量检测方法和现有检测方 法相比具有以下优点。
[0023] 本发明根据甲磺酸非诺多泮中活性成分和杂质成分的结构性质特点，通过大量实 验筛选出最佳的流动相组成、流速、检测波长、色谱柱、拖尾剂的使用量等分析条件，经多次 实验验证表明，本发明提供的甲磺酸非诺多泮及其制剂的质量检测方法可以灵敏、准确的 检测活性成分，因此具有很高的分析效率，可以克服现有检测方法中检测时间长、杂质个数 检测少等缺点，且本发明提供的质量检测方法稳定性好、对各分析成分的分离度好，可定 性、定量检测分析各化合物；杂质的最低检出量为〇.17ng，相当于供试品溶液的浓度为 0.0028%。因此，本发明提供的甲磺酸非诺多泮及其制剂的质量检测方法可以客观、全面、准 确的评价甲磺酸非诺多泮及其制剂的质量，对控制甲磺酸非诺多泮注射液的质量和保证临 床疗效具有重要意义。
【附图说明】
[0024]图1为色谱条件下样品的色谱图。
[0025] 图2为色谱条件下系统适用性的色谱图。
【具体实施方式】
[0026] 仪器:一套简单高效液相色谱仪，包括液相栗、紫外检测器、进样器 试剂:磷酸二氢钾(分析纯）、甲醇(色谱纯）、三乙胺(色谱纯） 色谱柱:十八烷基键合硅胶色谱柱 检测波长：225nm 以下实施说明本发明，但不以任何方式限制本发明 实施例1:有关物质 照高效液相色谱法（中国药典2015版通则0512 )测定。
[0027] 色谱条件与系统适应性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相A为 0.03mol/L的磷酸二氢钾溶液(每1000ml含lml三乙胺，用磷酸调pH值至3.5);流动相B为甲 醇，梯度洗脱，检测波长为225nm。取甲磺酸非诺多泮对照品约10mg，精密称定，置10ml量瓶 中，加稀释液(流动相A:流动相B=76:24,下同）稀释至刻度，摇匀，即得系统适用性原液。再 取非诺多泮-杂质A、非诺多泮-杂质B、非诺多泮-环合物各5mg，精密称定，置50ml量瓶中，加 入约25mL稀释液稀释，溶解，再加入5mL的系统适用性原液，用稀释液稀释至刻度，摇匀，即 得系统适用性溶液。非诺多泮-杂质A峰与非诺多泮峰的分离度应大于1.5,理论塔板数按非 诺多泮峰计算应不低于2000。
[0028] 测定法取本品约30mg，精密称定，置100ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀，作 为供试品溶液。精密量取供试品溶液lml，置100ml的量瓶中，用稀释液稀释至刻度，摇匀，作 为对照溶液。取对照溶液20yl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约 为满量程的15%~20%;取供试品溶液20yl，注入液相色谱仪，供试品溶液的色谱图中如显杂 质峰，非诺多泮杂质A的峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.3倍(0.3%)，非诺多泮杂质B 的校正后的峰面积(校正因子为1.3)不得大于对照溶液主峰面积的0.1倍(0.1%)，其他单个 杂质的峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.1倍(0.1%)，校正后的所有杂质峰面积的和 不得大于对照溶液主峰面积(1.0%)。
[0029]实施例2:方法比较 照高效液相色谱法（中国药典2015版通则0512 )测定。
[0030] 用实施例1中系统适用性溶液，采用美国药典原料有关物质检测方法和本发明的 方法进行检测。
[0031] 如图1和图2所示；图1为本说明方法，图2为美国药典原料有关物质检测方法。可以 看出：图1中的出峰顺序为非诺多泮-杂质B(5.231min)、非诺多泮-杂质A(9.879min)、非诺 多泮（10.801min)、非诺多泮-环合物（21.447min);图2中的出峰顺序为非诺多泮-杂质B (7.501min)、非诺多泮(20.252min)、非诺多泮-杂质A(27.778min)。本方法相比于美国药典 方法，能有效检出非诺多泮-环合物杂质，且主峰非出峰时间早，跑样的时间短，可以节省流 动相及时间，减少环境污染。
【主权项】
1. 甲磺酸非诺多泮及其制剂的一种高效液相分析方法，其特征在于：将甲磺酸非诺多 泮及其制剂用流动相溶解稀释成每lml中含甲磺酸非诺多泮0.02mg~0.5mg的溶液作为供试 品溶液，注入高效液相色谱仪，进样体积为5~100μΙ，利用紫外检测器，检测波长为220~ 240nm，甲醇-磷酸盐溶液作为流动相，流动相中含甲醇的比例范围为20%~70%，含磷酸盐溶 液的体积比例范围为30%~80%，磷酸盐溶液中加入拖尾剂，拖尾剂为三乙胺，在磷酸盐溶液 中所含的体积比例范围为〇. 05%~0.5%，流动相流速为0.5~2.0ml /min，采用固定相烷基键合 硅胶色谱柱，对甲磺酸非诺多泮及其制剂的有关物质和含量进行测定。2. 按照权利要求1所述，甲磺酸非诺多泮及其制剂的一种高效液相分析方法，其特征在 于:紫外检测器的检测波长为225nm，供试品溶液含甲磺酸非诺多泮为0.3mg/ml，进样体积 为20μ1，流动相流速为lml/min，三乙胺在磷酸盐溶液中所含体积比例范围为0.1%。3. 按照权利要求1所述，甲磺酸非诺多泮及其制剂的一种高效液相分析方法，其特征在 于:所述的固定相烷基键合硅胶为十八烷基键合硅胶。4. 按照权利要求1所述，甲磺酸非诺多泮及其制剂的一种高效液相分析方法，其特征在 于：甲醇-磷酸盐溶液作为流动相，所述的磷酸盐溶液为磷酸二氢钾溶液。5. 按照权利要求4所述，甲磺酸非诺多泮及其制剂的一种高效液相分析方法，其特征在 于：甲醇-磷酸盐溶液作为流动相，所述的磷酸盐溶液为磷酸二氢钾溶液，其中磷酸二氢钾 溶液的摩尔浓度为〇. 01~〇. 〇5mol/l。6. 按照权利要求5所述，甲磺酸非诺多泮及其制剂的一种高效液相分析方法，其特征在 于，所述磷酸二氢钾溶液的摩尔浓度为〇. 〇3mol/l。
【文档编号】G01N30/02GK106053639SQ201610358810
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年5月27日
【发明人】施猛, 任亚东, 夏春森, 肖艳, 刘恩桂
【申请人】扬子江药业集团广州海瑞药业有限公司