一种采用高效液相色谱检测手性苯乙胺含量的方法
【专利摘要】一种应用于化合物物质检测领域中的一种采用高效液相色谱检测手性苯乙胺含量的方法，该检测方法包括如下步骤：色谱条件：色谱柱：冠醚衍生物涂布的硅胶填充柱，粒径5μm；检测波长：紫外检测器210nm；流动相:高氯酸水溶液pH＝1.0/乙腈＝50:50(体积比)；高氯酸水溶液pH＝1.0溶液的配制；系统适用性溶液的制备；供试品溶液的制备；测定方法；该发明检测左旋苯乙胺和右旋苯乙胺重现性、灵敏度、准确度均能符合要求。
【专利说明】
一种采用高效液相色谱检测手性苯乙胺含量的方法
技术领域
[0001]本发明涉及药物分析领域中的一种采用高效液相色谱检测手性苯乙胺含量的方法。
【背景技术】
[0002]苯乙胺，又称β_苯乙胺，是一种生物碱与单胺类神经递质。苯乙胺有一个结构异构体，即α-苯乙胺，α-苯乙胺有两个立体异构体:(R)-( + )-1-苯乙胺与(S)-(-)-1-苯乙胺。手性苯乙胺是制备单一对映体的重要中间体之一，它既可作为外消旋体的手性拆分剂，拆分有机酸类，又可作为不对称合成的手性助剂及合成原料，所以它的制备和分析具有重要意义。目前关于手性苯乙胺拆分的检验方法，未见相关报道，因此，研制开发一种手性苯乙胺的检验方法一直是亟待解决的新课题。
【发明内容】
[0003]本发明的目的在于提供一种采用高效液相色谱检测手性苯乙胺含量的方法，该方法采用高效液相色谱法测定，具有重现性好、灵敏度高、检测精确、专属性强、操作方便等特点。
[0004]为实现上述目的，本发明采用如下技术方案:一种采用高效液相色谱检测手性苯乙胺含量的方法，所述方法包括以下步骤:
[0005](I)色谱条件:
[0006]色谱柱:冠醚衍生物涂布的硅胶填充柱；
[0007]检测波长:紫外波长210nm;
[0008]流动相:PH=1.0的高氯酸水溶液和乙腈的混合溶剂；
[0009](2)流动相的配制、系统适用性溶液的配制、供试品溶液的配制；
[0010](3)测定方法:
[0011]取系统适用性溶液注入液相色谱仪，记录图谱，其中左旋苯乙胺和右旋苯乙胺峰的分离度应多1.5，取供试品溶液注入液相色谱仪，记录图谱，分别计算供试品溶液中左旋苯乙胺的峰面积和右旋苯乙胺的峰面积；
[0012]所述冠醚衍生物涂布的硅胶的粒径为5μπι;所述pH=1.0的高氯酸水溶液和乙腈的体积比为= 45-55:45-55，优选体积比为50:50 ；所述流动相的流速为:0.3-0.5mL/min，优选的流速为0.4mL/min;所述色谱柱的柱温为20-30°C，优选的柱温为25°C ;所述流动相的配制方法为:称取高氯酸于第一容量瓶中，用水定容，混匀，即为pH= 1.0的高氯酸水溶液，将上述pH= 1.0的高氯酸水溶液转移至第二容量瓶中，用乙腈定容至刻度，混匀，脱气;所述第一容量瓶的容积为I升，所述第二容量瓶的容积为2升;所述系统适用性溶液的配制方法为称取混旋苯乙胺对照品50mg，用流动相溶解并稀释至10mL，摇匀;所述供试品溶液的配制方法为称取供试品50mg，用流动相溶解并稀释至10mL，摇匀;所述系统适用性溶液和供试品溶液注入液相色谱仪的进样量为0.5-5yL，优选进样量为lyL。
[0013]本发明的要点在于它的检测方法。该检测方法的基本原理是，左旋苯乙胺、右旋苯乙胺在流动相中的保留时间不同，利用HPLC面积归一化法计算其含量。
[0014]一种采用高效液相色谱检测手性苯乙胺含量的方法与现有技术相比，具有重现性、灵敏度、精确度均能符合要求等优点，将广泛的应用于药物分析领域中。
【附图说明】
[0015]下面结合附图及实施例对本发明进行详细说明。
[0016]图1是供试品I的HPLC检测图谱。
[0017]图2是供试品2的HPLC检测图谱。
[0018]图3是供试品3的HPLC检测图谱。
【具体实施方式】
[0019]下面结合实施例对本发明做进一步的说明，实施例有助于更好地理解本发明，但本发明并不仅仅局限于下述实施例。
[0020]实施例一
[0021]1.色谱条件:
[0022]色谱柱:冠醚衍生物涂布的硅胶填充柱，粒径5μπι;
[0023]检测波长:紫外波长210nm;
[0024]流动相:pH=1.0的高氯酸水溶液/乙腈=50:50(体积比)；
[0025]流速:0.4mL/min;
[0026]柱温:25°C;
[0027]2.流动相、系统适用性溶液及供试品溶液的配制:
[0028]2.1流动相的配制:称取16.3g高氯酸(含量72%)于100mL棕色容量瓶中，用水定容，混匀，即为IL pH= 1.0的高氯酸水溶液。将上述IL pH= 1.0的高氯酸水溶液转移至2L容量瓶中，用乙腈定容至刻度，混匀，脱气。
[0029]2.2系统适用性溶液的配制:
[0030 ] 称取混旋苯乙胺对照品50mg，用流动相溶解并稀释至I OmL，摇匀；
[0031]2.3供试品溶液的配制:
[0032]2.3.1称取供试品I，(R)-(+)-1-苯乙胺50mg，用流动相溶解并稀释至1mL，过滤。
[0033]2.3.2称取供试品2，混旋苯乙胺50mg，用流动相溶解并稀释至10mL，过滤。
[0034]2.3.3称取供试品3，右苯乙胺盐50mg，用流动相溶解并稀释至10mL，过滤。
[0035]3.测定方法:
[0036]取系统适用性溶液IyL注入液相色谱仪，记录图谱，左旋苯乙胺和右旋苯乙胺的分离度应多1.5，各取3批供试液IyL注入液相色谱仪，记录图谱，分别计算供试液中左旋苯乙胺的峰面积和右旋苯乙胺的峰面积。
[0037]检验结果:
[0038]供试品l:(R)-( + )-l-苯乙胺(HPLC色谱图见附图1):
[0039](5)-(-)4-苯乙胺的面积为25091，(R)-( + )_l_苯乙胺的面积为3373982
[0040](R)-( + )-l-苯乙胺含量为[3373982 + (25091+3373982)] X 100% =99.26%
[0041](S)-(-)-l-苯乙胺含量为[25091+ (25091+3373982)] X 100% =0.74% ；
[0042]供试品2:混旋苯乙胺(HPLC色谱图见附图2):
[0043](5)-(-)4-苯乙胺的面积为^643358,(^-( + )4-苯乙胺的面积为15269336
[0044](R)-( + )-l-苯乙胺含量为[15269336 + (13643358+15269336)] X 100% =52.81%
[0045](S)-(-)-l-苯乙胺含量为[13643358+ (13643358 + 15269336)] X 100% =47.19% ；
[0046]供试品3:右苯乙胺盐(HPLC色谱图见附图3):
[0047]^-(-卜丨-苯乙胺的面积为425.3，(R)-( + )_l-苯乙胺的面积为11903.6
[0048](R)-( + )-l-苯乙胺含量为[11903.6 +(425.3+11903.6)] X 100% =96.55%
[0049](S)-(-)-l-苯乙胺含量为[425.3 +(425.3+11903.6)] X 100% =3.45%。
【主权项】
1.一种采用高效液相色谱检测手性苯乙胺含量的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤: (1)色谱条件: 色谱柱:冠醚衍生物涂布的硅胶填充柱； 检测波长:紫外波长210nm; 流动相:PH= 1.0的高氯酸水溶液和乙腈的混合溶剂； (2)流动相的配制、系统适用性溶液的配制、供试品溶液的配制； (3)测定方法: 取系统适用性溶液注入液相色谱仪，记录图谱，其中左旋苯乙胺和右旋苯乙胺峰的分离度应多1.5，取供试品溶液注入液相色谱仪，记录图谱，分别计算供试品溶液中左旋苯乙胺的峰面积和右旋苯乙胺的峰面积。2.根据权利要求1所述的一种采用高效液相色谱检测手性苯乙胺含量的方法，其特征在于，所述冠醚衍生物涂布的硅胶的粒径为5μπι;所述pH=l.0的高氯酸水溶液和乙腈的体积比为=45-55:45-55，优选体积比为50:50 ；所述流动相的流速为:0.3-0.5mL/min，优选的流速为0.4mL/min;所述色谱柱的柱温为20-30°C，优选的柱温为25°C。3.根据权利要求1所述的一种采用高效液相色谱检测手性苯乙胺含量的方法，其特征在于，所述流动相的配制方法为:称取高氯酸于第一容量瓶中，用水定容，混匀，即为PH =1.0的高氯酸水溶液，将上述pH=l.0的高氯酸水溶液转移至第二容量瓶中，用乙腈定容至刻度，混匀，脱气;所述第一容量瓶的容积为I升，所述第二容量瓶的容积为2升。4.根据权利要求1所述的一种采用高效液相色谱检测手性苯乙胺含量的方法，其特征在于，所述系统适用性溶液的配制方法为称取混旋苯乙胺对照品50mg，用流动相溶解并稀释至10mL，摇匀；所述供试品溶液的配制方法为称取供试品50mg，用流动相溶解并稀释至1mL，摇勾。5.根据权利要求1所述的一种采用高效液相色谱检测手性苯乙胺含量的方法，其特征在于，所述系统适用性溶液和供试品溶液注入液相色谱仪的进样量为0.5-5yL，优选进样量为 IiiL0
【文档编号】G01N30/02GK106053657SQ201610513852
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年7月1日
【发明人】张海宏, 李晶晶, 胡勇男, 李秀媛
【申请人】东北制药集团股份有限公司