一种舒肝丸中川楝子的含量测定方法
【专利摘要】本发明提供了一种舒肝丸中川楝子的含量测定方法。该方法采用UPLC?MS/MS法测定舒肝丸中川楝子的含量，方法灵敏，准确，可用于舒肝丸的质量控制。
【专利说明】
一种舒肝丸中川楝子的含量测定方法
技术领域
[0001] 本发明涉及到一种舒肝丸中川楝子的含量测定方法，属中药技术领域，具体的，涉 及一种UPLC-MS/MS法测定舒肝丸中川楝子含量的测定方法。
【背景技术】
[0002] 舒肝丸为理气剂，具有舒肝和胃，理气止痛之功效。主治肝郁气滞，胸肋胀满，胃脘 疼痛，嘈杂呕吐，嗳气泛酸。该药物由川楝子、醋延胡索、片姜黄、白芍（酒炒）、沉香、枳壳 (炒）、木香、砂仁、陈皮、豆蔻仁、茯苓、姜厚朴、朱砂组成，药效明确。舒肝丸(大蜜丸)标准最 早收录在《中国药典》1985年版，2000年版中增加水蜜丸规格，2005年版增加水丸规格，并对 标准进行修订，检验内容同现行标准，2010年版第二增补本中增加小蜜丸规格，检验内容同 《中国药典》2005年版，未作修定。该药物现行标准为《中国药典》2015年版，记载了该药物的 组方、制法及质量控制方法。该药物所含药味多，《中国药典》2015年版中的含量测定项中， 样品经过复杂的处理过程后，仅对白芍中芍药苷进行了含量测定，舒肝丸处方中川楝子并 未进行含量测定。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的在于提供了一种测定舒肝丸中川楝子的含量测定方法，本发明采用 超高效液相色谱-质谱联用(UPLC-MS/MS)法测定舒肝丸中川楝子的含量，该方法如下：
[0004] -种舒肝丸中川楝子的含量测定方法，该方法采用超高效液相色谱质谱联用法， 其特征在于该含量测定方法如下：
[0005] 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;流动相为乙腈-0.01 %至0.02%甲酸溶液，体 积比为31:69;流速为0.351111/1^11;采用三重串联四极杆质谱检测器，电喷雾离子化负离子 模式下选择质荷比573离子进行检测;理论板数按川楝素峰计算应不低于6000-8000。
[0006] 对照品溶液的制备取川楝素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含0.001-1 yg的溶液，即得。
[0007] 供试品溶液的制备取舒肝丸水丸或水蜜丸适量，研细，取0.8g;或取小蜜丸、大蜜 丸适量，剪碎，取lg;或取浓缩丸适量，研细，取〇. 4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入 甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤 过，取续滤液，即得。
[0008] 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各liil，注入液相色谱仪，测定，即 得。
[0009] 本发明含量测定方法中，流动相优选为乙腈-0.01 %甲酸溶液，体积比为31:69。
[0010] 本发明含量测定方法中，理论板数优选为按川楝素峰计算应不低于8000。
[0011] 本发明含量测定方法中，对照品溶液的制备优选为取川楝素对照品适量，精密称 定，加甲醇制成每lml含lyg的溶液，即得。
[0012] 本发明含量测定方法还优选为：
[0013] 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;流动相为乙腈-o .01 %甲酸溶液，体积比为31 :69;流速:0.35ml/min;采用三重串联四极杆质谱检测器，电喷雾离子化负离子模式下选择 质荷比573离子进行检测;理论板数按川楝素峰计算应不低于8000。
[0014] 对照品溶液的制备取川楝素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含Uxg的溶 液，即得。
[0015] 供试品溶液的制备取舒肝丸水丸或水蜜丸适量，研细，取0.8g;或取小蜜丸、大蜜 丸适量，剪碎，取lg;或取浓缩丸适量，研细，取〇. 4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入 甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤 过，取续滤液，即得；
[0016] 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各liil，注入液相色谱仪，测定，即 得。
[0017] 《中国药典》2010年版第一增补本中川楝素的含量测定方法采用单级四极杆质谱 检测器，"舒肝丸"中除川楝子另有12味药材，若采用单级四极杆质谱检测器，其他药味可能 对测定结果产生影响，而采用多反应检测可以较好地排除其他因素对川楝素的干扰，从而 得到制剂中川楝素的准确含量。
[0018] 为了验证测定含量方法的稳定性、准确性、专属性及系统适应性，对方法进行了以 下方法学验证实验，以确保该含量测定方法可以作为舒肝丸的质量控制。
[0019] 1仪器与试药
[0020] Waters公司XEVO TQ-S超高效液相色谱质谱联用仪，Millipore公司Milli-Q超纯 水机。川楝素对照品（中检院，批号= 111842-201102)，甲醇、乙腈均为色谱纯。
[0021] 2、色谱条件与系统适用性试验
[0022] 色谱柱为ACQUITY UPLC BEH (：18(2.1\50臟，1.7_)，流动相为乙腈-0.01%甲酸 水，体积比为36:64;流速:0.35ml/min。
[0023] 采用三重串联四级杆质谱检测器，电喷雾离子化(ESI)负离子模式进行检测，毛细 管电压2.8kV，去溶剂气温度500°C。
[0024] 川楝素质谱条件如下表：
[0026] 3、对照品溶液的制备
[0027]精密称取川楝素对照品适量，加甲醇溶解制成每lml含川楝素为lng、5ng、20ng、 40ng、80ng、160ng、1 OOOng 的溶液，即得。
[0028] 4、供试品溶液的制备
[0029] 取舒肝丸约lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回 流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0030] 5线性范围考察
[0031 ]分别精密吸取对照品溶液（1 ? 115ng/ml，5 ? 575ng/ml，22 ? 3ng/ml，44 ? 6ng/ml， 89.2ng/ml，178.4ng/ml，1115ng/ml)各lyl注入液相色谱质谱联用仪，按上述条件测定峰面 积，以川楝素峰面积积分值为纵坐标，以进样浓度(ng/mL)为横坐标，绘制标准曲线，得回归 方程为Y = 778.74X+629.44(r = 0.9999)。结果表明，川楝素在1.115~1115ng/ml范围内，线 性关系良好。
[0032]表1标准曲线测定结果
[0033]
[0034] 6重复性试验
[0035]取同一批样品（批号1204071)，研细，取0.58、1.(^、1.58各三份，精密称定，按正文 方法进行测定。结果表明，本方法重复性良好(结果见表2)。
[0036] 表2重复性试验结果
[0039] 取已知含量的样品（批号20151877,川楝素:0.0083mg/g)9份，每份约0.5g，精密称 定，每三份为一组，分别加入用甲醇配制的低、中、高三个浓度的混合对照品溶液，按供试品 溶液制备项下方法制备供试品溶液。按拟定的色谱条件测定，计算回收率。结果见表3,表明 本方法回收率较好。
[0040]表3回收率试验的结果
[0042] 8样品测定
[0043] 对全部135批样品进行测定，典型样品色谱图见图1，
[0044] 表4样品测定结果
【附图说明】
[0047] 图1:川楝素负离子模式扫描一级质谱图。
[0048] 图2:川楝素负离子模式扫描二级质谱图。
[0049] 图3:川楝素对照品溶液总离子流图。
[0050] 图4:舒肝丸的总离子流图。
【具体实施方式】 [0051 ] 实施例1
[0052]以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;流动相为乙腈-0.01 %甲酸溶液，体积比为31 :69;流速:0.35ml/min;采用三重串联四极杆质谱检测器，电喷雾离子化负离子模式下选择 质荷比573离子进行检测;理论板数按川楝素峰计算应不低于8000;
[0053]对照品溶液的制备取川楝素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含liig的溶 液，即得；
[0054] 供试品溶液的制备取舒肝丸水丸或水蜜丸适量，研细，取0.8g;或取小蜜丸、大蜜 丸适量，剪碎，取lg;或取浓缩丸适量，研细，取〇. 4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入 甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤 过，取续滤液，即得；
[0055] 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各liil，注入液相色谱仪，测定，即 得。
[0056] 实施例2
[0057]以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;流动相为乙腈-0.02 %甲酸溶液，体积比为31 :69;流速:0.35ml/min;采用三重串联四极杆质谱检测器，电喷雾离子化负离子模式下选择 质荷比573离子进行检测;理论板数按川楝素峰计算应不低于6000;
[0058]对照品溶液的制备取川楝素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含liig的溶 液，即得；
[0059] 供试品溶液的制备取舒肝丸水丸或水蜜丸适量，研细，取0.8g;或取小蜜丸、大蜜 丸适量，剪碎，取lg;或取浓缩丸适量，研细，取〇. 4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入 甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤 过，取续滤液，即得；
[0060] 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各liil，注入液相色谱仪，测定，即 得。
[0061 ] 实施例3
[0062]以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;流动相为乙腈-0.01 %甲酸溶液，体积比为31 :69;流速:0.35ml/min;采用三重串联四极杆质谱检测器，电喷雾离子化负离子模式下选择 质荷比573离子进行检测;理论板数按川楝素峰计算应不低于8000;
[0063] 对照品溶液的制备取川楝素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含0.0 Olyg 的溶液，即得；
[0064] 供试品溶液的制备取舒肝丸水丸或水蜜丸适量，研细，取0.8g;或取小蜜丸、大蜜 丸适量，剪碎，取lg;或取浓缩丸适量，研细，取〇. 4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入 甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤 过，取续滤液，即得；
[0065] 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各liil，注入液相色谱仪，测定，即 得。
[0066] 实施例4
[0067]以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;流动相为乙腈_0.15%甲酸溶液，体积比为31 :69;流速:0.35ml/min;采用三重串联四极杆质谱检测器，电喷雾离子化负离子模式下选择 质荷比573离子进行检测;理论板数按川楝素峰计算应不低于7000;
[0068] 对照品溶液的制备取川楝素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.05yg 的溶液，即得；
[0069] 供试品溶液的制备取舒肝丸水丸或水蜜丸适量，研细，取0.8g;或取小蜜丸、大蜜 丸适量，剪碎，取lg;或取浓缩丸适量，研细，取〇. 4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入 甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤 过，取续滤液，即得；
[0070] 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各liil，注入液相色谱仪，测定，即 得。
[0071] 上述实施例均按照药典要求进行方法学验证，结果显示方法准确可靠、灵敏、专 属，各项指标均符合质量控制的要求。
【主权项】
1. 一种舒肝丸中川楝子的含量测定方法，该方法采用超高效液相色谱-质谱联用色谱 法，其特征在于该含量测定方法如下： 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;流动相为乙腈-ο. 01 %至0.02%甲酸溶液，体积比 为31:69;流速为0.35ml/min;采用三重串联四极杆质谱检测器，电喷雾离子化负离子模式 下选择质荷比573离子进行检测;理论板数按川楝素峰计算应不低于6000-8000; 对照品溶液的制备取川楝素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含0.001-Uig的 溶液，即得； 供试品溶液的制备取舒肝丸水丸或水蜜丸适量，研细，取〇.8g;或取小蜜丸、大蜜丸适 量，剪碎，取1 g;或取浓缩丸适量，研细，取〇. 4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取 续滤液，即得； 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2μ1，注入液相色谱仪，测定，即得。2. 根据权利要求1所述含量测定方法，其特征在于所述流动相为乙腈-0.01 %甲酸溶 液，体积比为31:69。3. 根据权利要求1所述含量测定方法，其特征在于所述理论板数为按川楝素峰计算应 不低于8000。4. 根据权利要求1所述含量测定方法，其特征在于所述对照品溶液的制备为取川楝素 对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含Uig的溶液，即得。5. 根据权利要求1-4所述含量测定方法，其特征在于该含量测定方法如下： 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;流动相为乙腈-〇. 01 %甲酸溶液，体积比为31:69; 流速:0.35ml/min;采用三重串联四极杆质谱检测器，电喷雾离子化负离子模式下选择质荷 比573离子进行检测;理论板数按川楝素峰计算应不低于8000; 对照品溶液的制备取川楝素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含lyg的溶液， 即得； 供试品溶液的制备取舒肝丸水丸或水蜜丸适量，研细，取〇.8g;或取小蜜丸、大蜜丸适 量，剪碎，取1 g;或取浓缩丸适量，研细，取〇. 4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取 续滤液，即得； 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各?μL，注入液相色谱仪，测定，即得。
【文档编号】G01N30/02GK106053661SQ201610527135
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年6月29日
【发明人】马永青, 王敏, 刘永利, 赵振霞
【申请人】河北省药品检验研究院