一种用hplc分离测定伊格列净脯氨酸原料药有关物质的方法
【专利摘要】本发明涉及一种用HPLC分离测定伊格列净脯氨酸原料药有关物质的方法，包括如下步骤：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以水为流动相A、乙腈为流动相B进行梯度洗脱，流速为0.8～1.2mL/min，柱温为28～32℃，采用紫外检测器对伊格列净进行检测；以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇和水的混合液为流动相，采用紫外检测器对脯氨酸进行检测。本发明方法通过综合考虑分析柱、流动相、梯度洗脱程序以及流速、柱温对分离检测的综合影响，使得检测结果达到了最优化，具有快速简便、灵敏度高、准确可靠的优点，适用于分离测定伊格列净脯氨酸原料药的有关物质。
【专利说明】
一种用HPLC分离测定伊格列净脯氨酸原料药有关物质的方法
技术领域
[0001] 本发明涉及一种伊格列净脯氨酸原料药的分析测定方法，具体涉及一种用HPLC分 离测定伊格列净脯氨酸原料药有关物质的方法。
【背景技术】
[0002] 随着人口老龄化趋势和生活方式的改变，与营养和运动密切相关的2型糖尿病患 者在我国逐年增加，以2型糖尿病患者为主。传统糖尿病治疗药物多存在一些不良反应，如 体重增加、低血糖等。SGLT2是糖尿病治疗的新型靶点，SGLT2抑制剂可以从尿中排出体内多 余的葡萄糖，从而减少糖基化蛋白，改善肝脏和外周组织的胰岛素敏感性、改善辟田胞功能， 同时能进一步改善肝脏胰岛素抵抗，从而促使较高的肝糖输出恢复正常，降低糖尿病患者 已升高的血糖水平。
[0003] 伊格列净脯氨酸片是日本上市的首个SGLT2抑制剂类药物，具有降糖效果好，不良 反应(如体重增加、低血糖等)少，可与其他降糖药联合应用等优势。
[0004] 伊格列净是选择性的，可逆的钠-葡萄糖协同转运蛋白2(SGLT2)抑制剂。钠-葡萄 糖共-转运蛋白2(SGLT2)，在近端肾小管内表达，负责来自肾小管管腔大部分被过滤葡萄糖 的再吸收。SGLT2转运肾重吸收葡萄糖的90%，而SGLT1只占其余的10%。因此抑制561^2活 性，从而特异性地抑制肾脏对葡萄糖的重吸收，是寻找潜在抗糖尿病药的新靶点。伊格列净 通过抑制SGLT2,降低被过滤葡萄糖的再吸收和减低对葡萄糖阈值(RTG)，而从而增加尿葡 萄糖排泄，进而降低糖尿病患者已升高的血糖水平。
[0005] 伊格列净腫氨酸的分子式为〇211121?〇53*〇51191^〇2，分子量为519.58，结构式如下：
[0007] 为了控制伊格列净脯氨酸原料药的质量，需要对主要成分和杂质进行控制，在现 有的技术中，没有适合于快速、简便、精确分析检测伊格列净脯氨酸原料药有关物质的分析 方法。
[0008] 因此，对于伊格列净脯氨酸原料药有关物质的测定方法存在进一步的改进和优化 需求，这正是本发明得以完成的动力和出发点所在。
【发明内容】
[0009] 为了克服现有技术存在的上述技术问题，本发明人在进行了大量的深入研究之 后，从而提供了一种用HPLC分离测定伊格列净脯氨酸原料药有关物质的方法，具有快速简 便、灵敏度高、准确可靠的优点。
[0010] 本发明通过以下技术方案实现，具体而言，涉及一种用HPLC分离测定伊格列净脯 氨酸原料药有关物质的方法，包括如下步骤：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以水为流 动相A、乙腈为流动相B进行梯度洗脱，流速为0.8~1.2mL/min，柱温为28~32°C，采用紫外 检测器对伊格列净进行检测；以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇和水的混合液为 流动相，采用紫外检测器对脯氨酸进行检测。
[0011 ] 优选的，所述十八烷基硅烷键合硅胶的粒径为5ym，柱内径为4.6mm，柱长为250mm。 [0012]优选的，对伊格列净进行检测时，样品采用体积比40:60的乙腈和水形成的混合液 进行溶解，进样量为20yL。
[0013]优选的，在进行所述梯度洗脱时，流速为1 .OmL/min,柱温为30°C。
[0014]优选的，所述梯度洗脱的具体过程为：
[0016]优选的，对伊格列净进行检测时，紫外检测器的检测波长为229nm。
[0017]优选的，对脯氨酸进行检测时，所述甲醇和水的体积比为55:45，紫外检测器的检 测波长为205nm，进样量为20yL〇
[0018] 与现有技术相比，本发明的有益效果如下:本发明方法通过综合考虑分析柱、流动 相、梯度洗脱程序以及流速、柱温对分离检测的综合影响，使得检测结果达到了最优化，具 有快速简便、灵敏度高、准确可靠的优点，适用于分离测定伊格列净脯氨酸原料药的有关物 质。
【附图说明】
[0019] 图1是伊格列净的样品混合溶液(100 %主药+1 %杂质)相谱图。
【具体实施方式】
[0020] 下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术 人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术 人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明 的保护范围。
[0021] 有关物质取本品适量，加溶剂（乙腈-水(40:60))溶解并定量稀释制成每lml中含 伊格列净约〇.4mg的溶液，作为供试品溶液;精密量取lmL，置200mL量瓶中，加溶剂稀释至刻 度，摇匀，作为对照溶液。另取伊格列净对照品、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F及 杂质G对照品适量，用溶剂溶解并定量稀释制成每lmL中含伊格列净0.4mg，各杂质均为4yg 的混合溶液作为系统适用性溶液。用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(粒径为5wn，柱内径 为4.6mm，柱长为250mm)，以水为流动相A，以乙腈为流动相B，流速为1. OmL/min，柱温为30 °C，紫外检测器的检测波长为229nm对伊格列净进行检测，按表1梯度洗脱，伊格列净的样品 混合溶液(100%主药+1 %杂质)液相谱如图1所示。
[0022]表1梯度洗脱程序
[0024] 量取系统适用性试验溶液20此，注入液相色谱仪，出峰顺序为杂质G、伊格列净、杂 质C、杂质E、杂质F、杂质D、杂质B与杂质A，各峰之间的分离度应符合要求。另取对照溶液20y L注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为满量程的10%~20%。再精 密量取供试品溶液和对照溶液各20此，分别注入液相色谱仪。记录色谱图。供试品溶液的色 谱图中如显示有杂质C、杂质D、杂质E、杂质F与杂质G保留时间一致的色谱峰，按下式以峰面 积计算，杂质C、杂质D、杂质E、杂质F与杂质G不得过0.10%，其他单个杂质峰面积不得大于 对照溶液主峰面积的0.2倍(0.10% )，各杂质峰面积(杂质C、杂质D、杂质E、杂质F与杂质G按 校正后的峰面积计算)的和不得大于对照溶液主峰面积的2倍(1.0%)。
[0028]异构体及杂质H取本品适量，精密称定，加流动相溶解并定量稀释制成每lmL中含 伊格列净约为〇. 2mg的溶液作为供试品溶液;精密称取异构体、杂质H对照品适量，加流动相 溶解并定量稀释制成每lmL中各含0.4yg的溶液作为对照品溶液。用直链淀粉-三(3，5-二甲 基苯基氨基甲酸酯)键合硅胶为填充剂(CHIRALPAK AD-H手性柱(4.6 X 250mm，5wii))，以正 己烷-无水乙醇(60:40)为流动相，检测波长229nm，流速为0.5ml/min。精密量取对照品溶液 20yL，注入液相色谱仪，记录色谱图，出峰顺序依次为异构体、杂质H，各峰之间的分离度应 符合要求，理论板数按异构体峰计算不低于3000。再精密量取供试品溶液与对照品溶液各 20此分别注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液的色谱图中如有异构体及杂质H峰，按 外标法以峰面积计算，异构体、杂质H均不得过0.10 %。
[0029]以上对本发明的具体实施例进行了描述。需要理解的是，本发明并不局限于上述 特定实施方式，本领域技术人员可以在权利要求的范围内做出各种变形或修改，这并不影 响本发明的实质内容。
【主权项】
1. 一种用HPLC分离测定伊格列净脯氨酸原料药有关物质的方法，其特征在于，包括如 下步骤：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以水为流动相A、乙腈为流动相B进行梯度洗 脱，流速为0.8~1.2mL/min，柱温为28~32°C，采用紫外检测器对伊格列净进行检测；以十 八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇和水的混合液为流动相，采用紫外检测器对脯氨酸 进行检测。2. 如权利要求1所述的用HPLC分离测定伊格列净脯氨酸原料药有关物质的方法，其特 征在于，所述十八烷基硅烷键合硅胶的粒径为5mi，柱内径为4.6mm，柱长为250_。3. 如权利要求1所述的用HPLC分离测定伊格列净脯氨酸原料药有关物质的方法，其特 征在于，对伊格列净进行检测时，样品采用体积比40:60的乙腈和水形成的混合液进行溶 解，进样量为20此。4. 如权利要求1所述的用HPLC分离测定伊格列净脯氨酸原料药有关物质的方法，其特 征在于，在进行所述梯度洗脱时，流速为1. OmL/min，柱温为30°C。5. 如权利要求1所述的用HPLC分离测定伊格列净脯氨酸原料药有关物质的方法，其特 征在于，所述梯度洗脱的具体过程为：6. 如权利要求1所述的用HPLC分离测定伊格列净脯氨酸原料药有关物质的方法，其特 征在于，对伊格列净进行检测时，紫外检测器的检测波长为229nm。7. 如权利要求1所述的用HPLC分离测定伊格列净脯氨酸原料药有关物质的方法，其特 征在于，对脯氨酸进行检测时，所述甲醇和水的体积比为55:45，紫外检测器的检测波长为 205nm，进样量为20yL。
【文档编号】G01N30/02GK106053665SQ201610544071
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年7月11日
【发明人】葛德培, 吴其华, 刘涛
【申请人】安徽联创生物医药股份有限公司