一种豉香型白酒中氨基甲酸乙酯含量的检测方法
【专利摘要】本发明公开了一种豉香型白酒中EC含量的检测方法，该方法包括样品的前处理步骤及LC?MS检测步骤；所述样品的前处理步骤中按如下步骤制备样品：吸取1mL样品置于10mL容量瓶中，加入100μL1000μg/L的氨基甲酸丁酯内标，用蒸馏水定容至10mL，混匀，经0.22μm有机滤膜过滤，滤液供LC?MS测定；所述LC?MS检测步骤中采用液相色谱?质谱仪对滤液进行氨基甲酸乙酯含量的测定。本发明公开的检测方法中样品经过蒸馏水稀释、微孔滤膜过滤后直接进样上机，简化了样品的前处理过程，提高了方法的回收率及检测结果的稳定性。
【专利说明】
一种豉香型白酒中氨基甲酸乙酯含量的检测方法
技术领域
[0001]本发明属于分析化学领域，涉及白酒中微量成分的分析检测，具体公开了豉香型白酒中氨基甲酸乙酯的液相色谱-质谱检测方法，该检测方法可以省去样品前处理过程中有机溶液的使用，简化样品的前处理过程，提高检测结果的准确度和灵敏度。
【背景技术】
[0002]氨基甲酸乙酯(简称EC)，是食品发酵和贮藏过程中产生的天然物质，广泛存在于发酵酒、酸乳酪、酱油等发酵制品中。氨基甲酸乙酯具有遗传毒性和致癌性，2007年，国际癌症研究机构(IARC)已正式将EC归类为2A类致癌物(即人类可能致癌物)。
[0003]目前国内外关于EC检测的现有标准方法主要有AOACOfficial Method 994.7、SN/T0285-2012(出入境检验检疫行业标准)、及GB5009.223-2014(食品安全国家标准)。按检测方法来分，主要有气相色谱质谱外标法、气相色谱质谱内标法和液相色谱荧光法。气相色谱质谱内标法相对气相色谱质谱外标法来说，方法的准确度和稳定性有所提高，但是气相色谱质谱法均存在前处理繁琐、耗时长、试剂损耗大等问题。液相色谱荧光法操作简单、快速，但是准确度和定量均不好。
【发明内容】
[0004]本发明公开了一种豉香型白酒中氨基甲酸乙酯含量的检测方法，该方法通过简化样品的前处理过程，可以快速、准确的对豉香型白酒中的微量氨基甲酸乙酯进行定量分析，降低了检测成本，节约了检测时间，提高了检测方法的回收率及检测结果的稳定性。
[0005]本发明公开的豉香型白酒中氨基甲酸乙酯含量的检测方法包括以下步骤:
[0006](I)量取一定体积的白酒样品，加入一定浓度的内标物氨基甲酸丁酯，用蒸馏水定容，过滤膜。
[0007](2)取过滤后的样品直接进样上机(液相色谱-质谱仪)，选择质子化氨基甲酸乙酯分子离子89.9m/z、氨基甲酸丁酯分子离子118m/z为定量离子进行检测，经标准曲线计算后得到样品中氨基甲酸乙酯的含量。
[0008](3)液相色谱条件:
[0009]色谱柱:Poroshell120EC-C18，3.0X50mm，2.7-micron;
[0010]流动相:A相为0.1 % (v/v)乙酸水溶液，B相为乙腈；
[0011]流速:0.25mL/min;
[0012]梯度洗脱程序:0min，95%A，5%B;
[0013]lmin,90%Aa0%B；
[0014]2.5πι?η,15%Α,85%Β；
[0015]2.8min,95%A,5%B；
[0016](后运行时间:7.2min)
[0017]柱温:40Γ;
[0018]进样量:10yL。
[0019](4)质谱条件:
[0020]离子源:电喷雾离子源；
[0021]扫描方式:正离子扫描；
[0022]检测方式:多反应监测；
[0023]毛细管电压:3100V;
[0024]离子源温度:350 Γ ;
[0025]流速:10.8L/min;
[0026]氨基甲酸乙酯定性离子:89.9m/z; 62.2m/z ；
[0027]氨基甲酸丁酯定性离子:118m/z; 62.2m/z。
[0028]本发明相比现有技术有益的技术效果:
[0029](I)样品前处理简单，无需使用有机溶剂，污染小。以下为各种常用检测方法的前处理比对:
[0030]气相色谱质谱外标法(SN/T0285-2012):样品经二氯甲烷提取、水浴浓缩后，用乙腈进行溶解，过后还需进行正己烷净化、PSA萃取；
[0031]气相色谱质谱内标法(GB5009.223-2014):样品经碱性硅藻土固相萃取后，进行脱水、氮吹浓缩，后用甲醇复溶解；
[0032]液相色谱荧光法:样品需用占顿醇溶液-盐酸溶液进行衍化；
[0033]本发明公开的检测方法:蒸馏水稀释，微孔滤膜过滤。
[0034](2)上机检测时间短，效率高。以下为各种常用检测方法的上样检测时间比对:
[0035]气相色谱质谱外标法(SN/T 0285-2012):51分钟；
[0036]气相色谱质谱内标法(GB5009.223-2014):40分钟；
[0037]液相色谱荧光法:30分钟；
[0038]本发明公开的检测方法:10分钟。
[0039](3)方法灵敏度高，检出限低。以下为各种常用检测方法的最低定量检出限比对:
[0040]气相色谱质谱外标法(SN/T0285-2012):10yg/kg；
[0041 ]气相色谱质谱内标法(GB5009.223-2014): 2.0yg/kg；
[0042]液相色谱荧光法:5.0yg/L;
[0043]本发明公开的检测方法:0.75yg/L。
[0044](4)方法稳定性及重复性较好。
[0045]由于本发明公开的检测方法中，样品只需要用蒸馏水稀释定容，过滤膜，即可上机检测，降低了样品在萃取过程中的丢失及破坏，最大程度的保证了样品的完整性，提高了方法的回收率。方法前处理过程简单、易操作，也因此提高了方法的稳定性及重复性。
[0046]以下结合说明书附图和【具体实施方式】对本发明的检测方法及检测效果进行详细说明。
【附图说明】
[0047]图1:EC浓度为I?50yg/L的标准曲线图；
[0048]图2:浓度均为lOyg/L的氨基甲酸乙酯、氨基甲酸丁酯标准品提取离子轮廓图；
[0049]图3:样品中氨基甲酸乙酯提取离子轮廓图。
【具体实施方式】
[0050]1、标准溶液的制备
[0051]氨基甲酸乙酯储备液(lOOyg/mL):准确称取1mg氨基甲酸乙酯标准品，用甲醇溶解、定容至I OOmL，置于4 0C冰箱中保存。
[0052]氨基甲酸丁酯储备液(lOOyg/mL):准确称取1mg氨基甲酸丁酯标准品，用甲醇溶解、定容至I OOmL，置于4 0C冰箱中保存。
[0053]氨基甲酸乙酯中间液(lOOOyg/L):准确吸取氨基甲酸乙酯储备液(lOOyg/mL)lmL，用甲醇-水(1: 9v/v)溶液定容至10mL，4°C冰箱中保存。
[0054]氨基甲酸丁酯中间液(lOOOyg/L):准确吸取氨基甲酸丁酯储备液(lOOyg/mLHmL，用甲醇-水(1: 9v/v)溶液定容至10mL，4°C冰箱中保存。
[0055 ] 标准曲线工作溶液:分别吸取氨基甲酸乙酯中间液(I 000yg/L) I OyL、20yL、50yL、100yL、200yL、500yL于6个1mL容量瓶中，再分别加入氨基甲酸丁酯中间液(1000yg/L)100yL，用蒸馏水定容至刻度，得到lyg/L、2yg/L、5yg/L、10yg/L、20yg/L、50yg/L，内标氨基甲酸丁酯为10yg/L的标准曲线工作溶液，现配现用。
[0056]2、样品的前处理
[0057]吸取ImL样品置于1mL容量瓶中，加入10yL lOOOyg/L的氨基甲酸丁酯内标，用蒸馏水定容至1mL，混匀，经0.22μπι有机滤膜过滤，滤液供LC-MS测定。
[0058]3、液相色谱-质谱检测
[0059](I)液相色谱条件:
[0060]色谱柱:Poroshell120EC-C18，3.0X50mm，2.7-micron;
[0061 ]流动相:A相为0.1 % (v/v)乙酸水溶液，B相为乙腈；
[0062]流速:0.25mL/min;
[0063]梯度洗脱程序:0min，95%A，5%B;
[0064]lmin,90%Aa0%B；
[0065]2.5πι?η,15%Α,85%Β；
[0066]2.8min,95%A,5%B；
[0067](后运行时间:7.2min)
[0068]柱温:40Γ;
[0069]进样量:1OyL。
[0070](2)质谱条件:
[0071]离子源:电喷雾离子源；
[0072]扫描方式:正离子扫描；
[0073]检测方式:多反应监测；
[0074]毛细管电压:3100V;
[0075]离子源温度:350Γ ;
[0076]流速:10.8L/min;
[0077]氨基甲酸乙酯定性离子:89.9111/2;62.2111/2;
[0078]氨基甲酸丁酯定性离子:118m/z; 62.2m/z;
[0079](3)标准曲线的制作
[0080]将浓度为lμg/L、2μg/L、5μg/L、10μg/L、20μg/L、50μg/L的标准曲线工作溶液(内含lOyg/L氨基甲酸丁酯的内标)进行液相色谱质谱法检测。以氨基甲酸乙酯浓度为横坐标、氨基甲酸乙酯的峰面积与氨基甲酸丁酯的峰面积之比为纵坐标，绘制如图1的标准曲线。对标准曲线进行线性回归分析，得到标准曲线的回归方程:y = 2.274555x-0.004084，由图1可知，本方法在I?50yg/L浓度范围内的线性相关系数R2 = 0.9993。
[0081 ] (4)样品溶液的检测
[0082]在与标准曲线工作溶液同等的测试条件下对样品溶液进行液相色谱质谱法检测，再根据目标峰面积及标准曲线求出样品溶液中的氨基甲酸乙酯的含量。
[0083]4、方法的最低检出限和最低定量限
[0084]检出限为分析方法在规定的实验条件下所能检出被测组分的最低浓度或最低量，一般以信噪比(S/N)为3:1时相应的浓度或注入仪器的量确定检出限。依据S/N为3推算，本发明方法的最低检出限为(LOD) 0.20yg/L。
[0085]定量限为样品中被测物能被定量测定的最低量，一般以信噪比(S/N)为10:1时相应的浓度或注入仪器的量确定定量限。依据S/N为10推算，本发明方法的最低定量限(LOQ)为0.75yg/L。
[0086]5、方法的精密度及稳定性
[0087]本发明方法中，取6份相同的样品，经过相同的样品前处理后，在与标准曲线工作溶液同等的测试条件下对样品溶液进行液相色谱质谱法检测，并对样品中的氨基甲酸乙酯进行定量计算。通过计算检测结果的相对标准偏差(RSD)得到方法的精密度，本发明方法的精密度为3.49%，稳定性好。
[0088]6、方法的基质加标回收率和样品加标回收率
[0089]本发明方法中，取2份相同的空白样品，其中一份加入定量的待测成分标准物质。3份样品(空白样品、加标样品、定量标准物质)同时按相同的分析步骤分析检测，空白样品与加标样品的检测结果差值除以定量标准物质的检测结果即为方法的基质加标回收率，本发明方法的基质加标回收率为95?105%。
[0090]本发明方法中，取2份相同的已知含有待测成分的样品，其中一份加入定量的待测成分标准物质。3份样品(样品、加标样品、定量标准物质)同时按相同的分析步骤分析检测，2份样品的检测结果差值除以定量标准物质的检测结果即为方法的样品加标回收率，本发明方法的样品加标回收率为92?99%。
[0091 ]本发明方法的基质加标回收率和样品加标回收率都能满足国家标准的检测要求。
【主权项】
1.一种豉香型白酒中氨基甲酸乙酯含量的检测方法，包括: 样品的前处理步骤，量取一定体积的白酒样品，加入一定浓度的内标物氨基甲酸丁酯，用蒸馏水定容，过滤膜，滤液供LC-MS测定； 液相色谱-质谱仪检测步骤，滤液直接进样上机，选择质子化氨基甲酸乙酯分子离子89.9m/z、氨基甲酸丁酯分子离子118m/z为定量离子进行检测，经标准曲线计算后得到样品中氨基甲酸乙酯的含量。2.根据权利要求1所述的豉香型白酒中氨基甲酸乙酯含量的检测方法，其特征在于:所述样品的如处理步骤中按如下步骤制备样品:吸取ImL样品置于1mL容量瓶中，加入100μLlOOOyg/L的氨基甲酸丁酯内标，用蒸馏水定容至I OmL，混匀，经0.22μπι有机滤膜过滤。3.根据权利要求1所述的豉香型白酒中氨基甲酸乙酯含量的检测方法，其特征在于:所述液相色谱-质谱仪检测步骤中，液相色谱条件为: 色谱柱:Poroshell 120EC-C18，3.0X 50mm, 2.7-micron ； 流动相:A相为0.1 %v/v乙酸水溶液，B相为乙腈； 流速:0.25mL/min ； 梯度洗脱程序:Omin，95 % A，5 % B; lmin,90%Aa0%B； 2.5πι?η,15%Α,85%Β； 2.8min,95%A,5%B； 后运行时间:7.2min; 柱温:40°C; 进样量:10yL。4.根据权利要求1所述的豉香型白酒中氨基甲酸乙酯含量的检测方法，其特征在于:所述液相色谱-质谱仪检测步骤中，质谱条件为: 离子源:电喷雾离子源； 扫描方式:正离子扫描； 检测方式:多反应监测； 毛细管电压:3100V; 离子源温度:350 °C; 流速:10.8L/min; 氨基甲酸乙酯定性离子:89.9m/ z; 6 2.2m/ z ； 氨基甲酸丁酯定性离子:118m/z;62.2m/z。
【文档编号】G01N30/88GK106053695SQ201610480539
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年6月23日
【发明人】郭波, 郑扬韵, 孙心恒
【申请人】广东石湾酒厂集团有限公司