一种测定转铁蛋白的试剂盒及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种测定转铁蛋白的试剂盒及其制备方法，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：试剂R1：缓冲液、表面活性剂、防腐剂、稳定剂，试剂R2：缓冲液、表面活性剂、无机盐离子、防腐剂、转铁蛋白抗体，其溶剂为纯化水，制备方法为：按照组分含量配制好试剂；将待测样本与试剂R1和试剂R2混合，使其充分反应；用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度差值；根据吸光度变化值计算出样本中的转铁蛋白的浓度。本发明具有操作方便、准确度高等优点。
【专利说明】
一种测定转铁蛋白的试剂盒及其制备方法
技术领域
[0001] 本发明涉及医学及生物化学技术领域，具体来说是一种测定转铁蛋白的试剂盒及 其制备方法。
【背景技术】
[0002] 转铁蛋白又名运铁蛋白（TRF)，是血浆中主要的含铁蛋白质，负责运载由消化管吸 收的铁和由红细胞降解释放的铁，以TRF-Fe 3+的复合物形式进入骨髓中，供成熟红细胞的生 成，转铁蛋白分子量约7.7万，为单链糖蛋白，含糖量约6%，TRF可逆地结合多价离子，包括 铁、铜、锌、钴等，每一分子TRF可结合两个三价铁原子，TRF主要由肝细胞合成，半衰期为7 天。血浆中TRF的浓度受铁供应的调节，在缺铁状态时，血浆TRF浓度上升，经铁有效治疗后 恢复到正常水平。
[0003] 血浆中转铁蛋白水平可用于贫血的诊断和对治疗的监测，在缺铁性的低血色素贫 血中TRF的水平增高，但其铁的饱和度很低，相反，如果贫血是由于红细胞对铁的利用障碍， 则血浆中TRF正常或低下，但铁的饱和度增高。在铁负荷过量时，TRF水平正常，但饱和度可 超过50%，甚至达90%。
[0004]在急性时相反应中往往降低，因此在炎症、恶性病变时常随着白蛋白、前白蛋白同 时下降，在慢性肝疾病及营养不良时亦下降，因此可以作为营养状态的一项指标。
[0005] 目前市场上的测定转铁蛋白的试剂普遍存在操作不便、测定准确度低的缺陷，因 此需要进行改进。
【发明内容】
[0006] 本发明所要解决的技术问题是为了克服现有技术操作复杂、测定准确度低的缺 陷，而提供一种测定转铁蛋白的试剂盒及其制备方法。
[0007] 本发明解决上述技术问题提供的技术方案是:本发明公开了一种测定转铁蛋白的 试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为： 试剂R1: 缓冲液 30~100 mmol/L 加速剂 10~35 g/L 表面活性剂 8.0~18.0 ml/L 防腐剂 0.1~0.7 g/L 稳定剂 10~30 g/L 其溶剂为纯化水 试剂R2: 缓冲液 30~100 mmol/L 表面活性剂 8.0~18.0 ml/L 无机盐离子 15CK250 mmol/L 防腐剂 0.1~0.7 g/L 转铁蛋白抗体 3.0~14.0 ml/L 其溶剂为纯化水。
[0008] 作为优选，本发明公开了一种测定转铁蛋白的试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和 试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为： 试剂R1: 缓冲液 65 mmol/L 加速剂 20 g/L 表面活性剂 13 ml/L 防腐剂 0.4 g/L 稳定剂 20 g/L 其溶剂为纯化水 试剂R2: 缓冲液 65 mmol/L 表面活性剂 13ml/L 无机盐离子 200 mmol/L 防腐剂 0.4 g/L 转铁蛋白抗体 8 ml/L 其溶剂为纯化水。
[0009] 作为优选，所述的试剂R1中，所述的缓冲液采用三羟甲基氨基甲烷缓冲液、MOPS缓 冲液、PBS缓冲液、MES缓冲液、甘氨酸缓冲液中的一种或多种的组合，所述的加速剂采用聚 乙二醇-2000、聚乙二醇-8000、聚乙烯吡咯烷酮中的一种或多种的组合，所述的表面活性剂 采用吐温-80、聚氧乙烯苯基醚中的一种，所述的防腐剂采用苯酚、苯甲酸钠、叠氮钠中的一 种或多种的组合，所述的稳定剂采用牛血清白蛋白、蔗糖、海藻糖中的一种或多种的组合。
[0010] 作为优选，所述的试剂R2中，所述的缓冲液采用三羟甲基氨基甲烷缓冲液、MOPS缓 冲液、PBS缓冲液、MES缓冲液、甘氨酸缓冲液中的一种或多种的组合，所述的表面活性剂采 用吐温-80、聚氧乙烯苯基醚中的一种，所述的无机盐离子采用氯化钠、氯化钾、氯化镁中的 一种或多种的组合，所述的防腐剂采用苯酚、苯甲酸钠、叠氮钠中的一种或多种的组合。
[0011] 作为优选，本发明还公开了上述测定转铁蛋白的试剂盒的制备方法和使用方法， 包括以下步骤： (a)按照下列组分含量配制好试剂： 试剂R1: 缓冲液 30~100 mmol/L 加速剂 10~35 g/L 表面活性剂 8.0~18.0 ml/L 防腐剂 0.1~0.7 g/L 稳定剂 10~30 g/L 其溶剂为纯化水 试剂R2: 缓冲液 30~100 mmol/L 表面活性剂 8.0~18.0 ml/L 无机盐离子 150~250 mmol/L 防腐剂 0.1~0.7 g/L 转铁蛋白抗体 3.0~14.0 ml/L 其溶剂为纯化水； (b) 将待测样本与试剂R1和试剂R2混合，使其充分反应； (c) 用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度差值； (d) 根据吸光度变化值计算出样本中的转铁蛋白的浓度。
[0012]作为优选，步骤(b)中，所述的试剂R1与试剂R2的体积比为3:1。
[0013] 作为优选，步骤(b)中，所述的待测样本与试剂R1和试剂R2的总体积的体积比在1: 5到1:200之间。
[0014] 本发明的检测原理是:样品中的转铁蛋白可与试剂R2中的转铁蛋白抗体发生特异 性的抗原抗体反应，形成抗原抗体免疫复合物，形成浊度，其浊度高低与样本中转铁蛋白含 量成正相关。通过测定浊度并与转铁蛋白校准曲线进行换算，求出样品中转铁蛋白的含量。
式中：A At以空白管吸光度作对照的样品管吸光度值 A As以空白管吸光度作对照的校准管吸光度值 Cs校准液中转铁蛋白的浓度。
[0016]与现有技术相比，本发明具有以下有益优点:本试剂中添加了助悬剂和加速剂，助 悬剂有利于抗体的分散和稳定，加速剂则可以加速抗原抗体的反应，即使较微弱的变化也 可以检测出来，提高了试剂分析灵敏度。
【具体实施方式】
[0017]以下结合具体实施例进一步说明，但本发明并不仅限于这些实施例。
[0018] 实施例1 本发明的试剂盒包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，其中 试剂R1: 三羟甲基氨基甲烷缓冲液65 mmol/L 聚乙二醇-8000 20 g/L 吐温-80 13 ml/L 叠氮钠 0.4 g/L 牛血清白蛋白 20 g/L 其溶剂为纯化水 试剂R2: 三羟甲基氨基甲烷缓冲液 65 mmol/L 吐温-80 13ml/L 氯化钠 200 mmol/L 叠氮钠 0.4 g/L 转铁蛋白抗体 8 ml/L 其溶剂为纯化水。
[0019] 实施例2 本发明的试剂盒包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，其中 试剂R1: MOPS缓冲液 30 mmol/L 聚乙二醇-2000 10 g/L 聚氧乙稀苯基醚 18.0 ml/L 苯甲酸钠 0.1 g/L 鹿糖 30 g/L 其溶剂为纯化水 试剂R2: MOPS缓冲液 30 mmol/L 吐温-80 8.0 ml/L 氯化钾 150 mmol/L 苯酚 0.7 g/L 转铁蛋白抗体 14.0 ml/L 其溶剂为纯化水。 实施例3 试剂盒的制备和使用方法 1、 按照下列组分含量配制好试剂： 试剂R1: 三羟甲基氨基甲烷缓冲液 65 mmol/L 聚乙二醇-8000 20 g/L 吐温-80 13 ml/L 叠氮钠 0.4 g/L 牛血清白蛋白 20 g/L 其溶剂为纯化水 试剂R2: 三羟甲基氨基甲烷缓冲液65 mmol/L 吐温-80 13ml/L 氯化钠 200 mmol/L 叠氮钠 0.4 g/L 转铁蛋白抗体 8 ml/L 其溶剂为纯化水； 2、 全自动生化分析仪参数设置 (a) 检测温度:37°C; (b) 检测波长:主波长340nm，副波长700nm; (C)反应时间：10min，其中，孵育时间5min，加入试剂R2后立即测定读取吸光度 Al，5min后读取吸光度A2,计算吸光度变化AA = A2-A1 ; (d)反应方向：正反应； 3、检测步骤 (a) 取225yl试剂R1与3yl待测样本混匀； (b) 将混匀后的溶液在37°C的条件下孵育5min;
(c) 加入75yl试剂R2,立即测定读取吸光度Al，5min后读取吸光度A2,计算吸光度变化 AA = A2-A1; (d)根据样本中转铁蛋白的活性 计算出样本中的转铁蛋白 的浓度。
[0020] 实施例4 试剂盒的制备和使用方法 1、 按照下列组分含量配制好试剂： 试剂R1: MOPS缓冲液 30 mmol/L 聚乙二醇-2000 10 g/L 聚氧乙稀苯基醚 18.0 ml/L 苯甲酸钠 0.1 g/L 鹿糖 30 g/L 其溶剂为纯化水 试剂R2: MOPS缓冲液 30 mmol/L 吐温-80 8.0 ml/L 氯化钾 150 mmol/L 苯酚 0.7 g/L 转铁蛋白抗体 14.0 ml/L 其溶剂为纯化水； 2、 全自动生化分析仪参数设置 (a) 检测温度:37°C; (b) 检测波长:主波长340nm，副波长700nm; (c) 反应时间：10min，其中，孵育时间5min，加入试剂R2后立即测定读取吸光度 Al，5min后读取吸光度A2,计算吸光度变化AA = A2-A1 ; (d) 反应方向：正反应； 3、 检测步骤 (a) 取225yl试剂R1与3yl待测样本混匀； (b) 将混匀后的溶液在37°C的条件下孵育5min; (c) 加入75yl试剂R2,立即测定读取吸光度Al，5min后读取吸光度A2,计算吸光度变化 AA = A2-A1; (d)根据样本中转铁蛋白的活性
计算出样本中的转铁蛋白 的浓度。
[0021] 表1为实施例1所制得的测定转铁蛋白的试剂盒以及实施例2所制得的测定转铁蛋 白的试剂盒分别对质控品1进行测定的结果，其中质控品1中的转铁蛋白的浓度为1.29 g/ L，测定结果见表1:
由表1可知，本发明所制得的测定转铁蛋白的试剂盒对质控品1的测定结果偏差较小， 因此测定准确度高，而且实施例1为最优的选择。
[0022] 表2为实施例1所制得的测定转铁蛋白的试剂盒以及实施例2所制得的测定转铁 蛋白的试剂盒分别对质控品2进行测定的结果，其中质控品2中的转铁蛋白的浓度为3.38 g/L，测定结果见表2:
由表2可知，本发明所制得的测定转铁蛋白的试剂盒对质控品2的测定结果偏差较小， 因此测定准确度高，而且实施例1为最优的选择。
[0023] 表3为实施例3所制得的测定转铁蛋白的试剂盒对同一待测样本进行的多次反复 测定以及实施例4所制得的测定转铁蛋白的试剂盒对同一待测样本进行的多次反复测定， 对所得的结果进行SD和CV的计算，结果如下：
由表3可知本发明所制得的测定转铁蛋白的试剂盒的精密度比较好，而且由表3可知， 实施例3为最优的选择。
[0024] 上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟 悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因 此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完 成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。
【主权项】
1. 一种测定转铁蛋白的试剂盒，其特征在于:包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体 组分，包括的成分及相应含量为： 试剂R1: 缓冲液 30~100 mmol/L 加速剂 10~35 g/L 表面活性剂 8.0~18.0 ml/L 防腐剂 0.1~0.7 g/L 稳定剂 10~30 g/L 其溶剂为纯化水 试剂R2: 缓冲液 30~100 mmol/L 表面活性剂 8.0~18.0 ml/L 无机盐离子 150~250 mmol/L 防腐剂 0.1~0.7 g/L 转铁蛋白抗体 3.0~14.0 ml/L 其溶剂为纯化水。2. 根据权利要求1所述的一种测定转铁蛋白的试剂盒，其特征在于:包括彼此独立的试 剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为： 试剂R1: 缓冲液 65 mmol/L 加速剂 20 g/L 表面活性剂 13 ml/L 防腐剂 0.4 g/L 稳定剂 20 g/L 其溶剂为纯化水 试剂R2: 缓冲液 65 mmol/L 表面活性剂 13ml/L 无机盐离子 200 mmol/L 防腐剂 0.4 g/L 转铁蛋白抗体 8 ml/L 其溶剂为纯化水。3. 根据权利要求1或2所述的一种测定转铁蛋白的试剂盒，其特征在于:所述的试剂R1 中，所述的缓冲液采用三羟甲基氨基甲烷缓冲液、MOPS缓冲液、PBS缓冲液、MES缓冲液、甘氨 酸缓冲液中的一种或多种的组合，所述的加速剂采用聚乙二醇-2000、聚乙二醇-8000、聚乙 烯吡咯烷酮中的一种或多种的组合，所述的表面活性剂采用吐温-80、聚氧乙烯苯基醚中的 一种，所述的防腐剂采用苯酚、苯甲酸钠、叠氮钠中的一种或多种的组合，所述的稳定剂采 用牛血清白蛋白、蔗糖、海藻糖中的一种或多种的组合。4. 根据权利要求1或2所述的一种测定转铁蛋白的试剂盒，其特征在于:所述的试剂R2 中，所述的缓冲液采用三羟甲基氨基甲烷缓冲液、MOPS缓冲液、PBS缓冲液、MES缓冲液、甘氨 酸缓冲液中的一种或多种的组合，所述的表面活性剂采用吐温-80、聚氧乙烯苯基醚中的一 种，所述的无机盐离子采用氯化钠、氯化钾、氯化镁中的一种或多种的组合，所述的防腐剂 采用苯酚、苯甲酸钠、叠氮钠中的一种或多种的组合。5. 根据权利要求1或2所述的一种测定转铁蛋白的试剂盒的制备方法和使用方法，其特 征在于:包括以下步骤： (a) 按照下列组分含量配制好试剂： 试剂R1: 缓冲液 30~100 mmol/L 加速剂 10~35 g/L 表面活性剂 8.0~18.0 ml/L 防腐剂 0.1~0.7 g/L 稳定剂 10~30 g/L 其溶剂为纯化水 试剂R2: 缓冲液 30~100 mmol/L 表面活性剂 8.0~18.0 ml/L 无机盐离子 150~250 mmol/L 防腐剂 0.1~0.7 g/L 转铁蛋白抗体 3.0~14.0 ml/L 其溶剂为纯化水； (b) 将待测样本与试剂R1和试剂R2混合，使其充分反应； (c) 用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度差值； (d) 根据吸光度变化值计算出样本中的转铁蛋白的浓度。6. 根据权利要求5所述的一种测定转铁蛋白的试剂盒的制备方法和使用方法，其特征 在于:步骤(b)中，所述的试剂R1与试剂R2的体积比为3:1。7. 根据权利要求5所述的一种测定转铁蛋白的试剂盒的制备方法和使用方法，其特征 在于：步骤(b)中，所述的待测样本与试剂R1和试剂R2的总体积的体积比在1: 5到1: 200之 间。
【文档编号】G01N33/68GK106053838SQ201610544746
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年7月12日
【发明人】蔡晓辉, 庄庆华, 吴铮, 徐运
【申请人】安徽伊普诺康生物技术股份有限公司